仪；或在还 原性或非还原性条件下在通过考马斯（Coomassie)蓝或银染剂检测的情况下达到凝胶电 泳（例如SDS-PAGE)均质性。术语"分离抗体"包括就地在重组细胞内的抗体，因为抗体天 然环境的至少一种组分将不存在。在某些实施例中，通过至少一个纯化步骤制备分离抗体。 [0089] 如本文所使用，"免疫反应性"指的是对氨基酸残基（"结合位点"或"抗原决定 基"）序列具有特异性但在与其它肽/蛋白质交叉反应的情况下在将其调配用于投与供人 类使用的水平下无毒的抗体或其片段。"抗原决定基"指的是能够与抗体或其抗原结合片段 形成结合相互作用的抗原部分。抗原决定基可以是线性肽序列（即"连续的"）或可以由不 连续的氨基酸序列（即"构象"或"不连续的"）构成。术语"优选结合"意指结合剂与结合 位点结合的亲和力大于其结合不相关氨基酸序列的亲和力。
[0090] 术语"互补决定区"和"⑶R"在所属领域中已知指的是抗体可变区内的氨基酸 的非连续序列，其赋予抗原特异性和结合亲和力。一般来说，重链可变区中存在三个（3) CDR(CDRH1、CDRH2、CDRH3)并且在轻链可变区中存在三个（3)CDR(CDRL1、CDRL2、CDRL3)。 [0091] 可以容易地使用多个熟知方案测定给定的精确氨基酸序列边界，所述方案包 括卡巴特（Kabat)等人（1991)所描述的"免疫学感兴趣的蛋白质序列（Sequences of Proteins of Immunological Interest)，"第 5 版公共卫生署（Public Health Service), 美国国家卫生研宄院（National Institutes of Health),贝塞斯达（Bethesda),MD( "卡 巴特"编号方案），A1-垃兹卡尼等人（Al-Lazikani), (1997) JMB 273, 927-948 ( "科西 亚（Chothia)"编号方案），麦克卡勒姆（MacCallum)等人，分子生物学杂志（J.Mol. Biol.) 262:732-745 (1996)，"抗体-抗原相互作用：接触分析和结合位点拓扑学 (Antibody-antigen interactions:Contact analysis and binding site topography)," 分子生物学杂志262, 732-745. "("接触（Contact)"编号方案），乐弗兰克MP(Lefranc MP) 等人，"用于免疫球蛋白和T细胞受体可变域和Ig总科V形结构域的MGT独特编号（MGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains),"发育和比较免疫学（Dev Comp Immunol), 2003 年 1月； 27(1):55-77("MGT"编号方案），以及霍内格 A(H〇negger A)和普鲁克桑 A(Plilckthun A), "用于免疫球蛋白可变域的又一个编号方案：自动建模和分析工具（Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains:an automatic modeling and analysis tool), "分子生物学杂志，2001年6月8日；309 (3): 657-70,（AHo编号方案）的 那些方案。
[0092] 给定⑶R的边界可能取决于用于鉴别的方案而不同。举例来说，卡巴特方案是基 于结构比对，而科西亚方案是基于结构信息。卡巴特和科西亚方案的编号都是基于最常见 的抗体区域序列长度，其具有通过插入字母例如"30a"来调节的插入和一些抗体中出现的 缺失。两种方案在不同位置处放置某些插入和缺失（"插入缺失"），产生不同的编号。接 触方案是基于复合物晶体结构的分析并且在多种方面与科西亚编号方案类似。以下表1 分别列出了 CDRL1、CDRL2、CDRL3的位置以及如卡巴特方案、科西亚以及接触方案所鉴别的 ⑶RH1XDRH2、⑶RH3。对于⑶R-H1来说，使用卡巴特和科西亚编号方案给定列出残基编号。
[0093] 表1不同编号方案的⑶R位詈
【主权项】
1. 一种方法，其包含：向患有肝脏疾病或病况的个体投与结合和/或抑制L0XL2的药 剂，从而治疗或改善所述疾病或病况。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病或病况与纤维化相关。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肝脏疾病或病况选自由以下组成的群 组：NASH(非酒精性脂肪性肝炎）、PSC(原发性硬化性胆管炎）、肝硬化、门静脉血压过高、 PBC(原发性胆汁性肝硬化）、自身免疫性肝炎、酒精性肝硬化、a 1抗胰蛋白酶缺乏疾病、遗 传性血色沉着病、威尔逊氏病、B型肝炎病毒HBV、C型肝炎病毒HCV以及HIV相关的脂肪性 肝炎。
4. 根据权利要求1到3中任一权利要求所述的方法，其中所述药剂是与L0XL2特异性 结合的抗体。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述抗体与具有重链可变区序列SEQ ID N0:8和 /或轻链可变区序列SEQ ID N0:9的抗体竞争性结合L0XL2。
6. 根据权利要求4或5所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区，其具有与SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:12 中所阐述的序列具有至少 75% -致性的氨基酸序列；和/或轻链可变区，其具有与序列SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:9、 SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 14具有至少75% -致性的氨基酸序列。
7. 根据权利要求4到6中任一权利要求所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO:8 中所阐述的重链可变区序列的重链CDR和/或SEQ ID N0:9中所阐述的轻链可变区序列的 轻链CDR。
8. 根据权利要求1到7中任一权利要求所述的方法，其中所述药剂以处于或约或至少 处于或至少约l〇mg/kg或20mg/kg或约10mg/kg到20mg/kg之间的剂量投与。
9. 根据权利要求1到7中任一权利要求所述的方法，其中所述药剂以至少处于或至少 约或处于或约200mg或700mg或约200mg到700mg之间的剂量投与。
10. 根据权利要求1到7中任一权利要求所述的方法，其中所述药剂以至少处于或至少 约或处于或约75mg或125mg或75mg到125mg之间或约75mg到125mg之间的剂量投与。
11. 根据权利要求1到10中任一权利要求所述的方法，其中所述药剂是静脉内或皮下 投与。
12. 根据权利要求1到11中任一权利要求所述的方法，其中所述方法增加或延长所述 个体的生存期，减少或防止桥接纤维化增加，减少或防止a平滑肌肌动蛋白a SMA含量增 加，减少或防止星状细胞活化增加，和/或减少或防止丙氨酸转氨酶ALT或天冬氨酸转氨酶 AST或Y _谷氨酰转移酶GGT增加。
13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述方法将ALT、AST、GGT或ALT/AST比率降低 到低于上限或正常值ULN或低于正常值上限ULN的2倍、5倍或10倍。
14. 一种用于检测、预测或监测疾病或病况的方法，所述方法包含： a) 使获自个体的液体样品与对赖氨酰氧化酶样蛋白2L0XL2具有特异性的抗体接触； 以及 b) 检测所述抗体与所述液体样品中存在的L0XL2的结合，从而检测所述液体样品中的 L0XL2水平， 其中所检测到的L0XL2水平指示所述个体中所述疾病或病况的存在或不存在或所述 个体对所述疾病或病况的治疗反应的可能性。
15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病或病况是肺纤维化、肝脏纤维化、肾脏 纤维化、心脏纤维化或骨髓纤维化、肝硬化、慢性病毒性肝炎、C型肝炎病毒HCV、B型肝炎病 毒HBV或代偿失调性肝脏疾病。
16. 根据权利要求14或15所述的方法，其中所述疾病或病况是特发性肺纤维化IPF、 NASH(非酒精性脂肪性肝炎）、PSC(原发性硬化性胆管炎）、肝硬化、门静脉血压过高、 PBC(原发性胆汁性肝硬化）、自身免疫性肝炎、酒精性肝硬化、a 1抗胰蛋白酶缺乏疾病、遗 传性血色沉着病、威尔逊氏病、B型肝炎病毒HBV、C型肝炎病毒HCV以及HIV相关的脂肪性 肝炎。
17. 根据权利要求14到16中任一权利要求所述的方法，其中所检测到的L0XL2水平大 于约 700pg/mL。
18. 根据权利要求14所述的方法，其中所检测到的L0XL2水平大于约800pg/mL。
19. 根据权利要求14到18中任一权利要求所述的方法，其进一步包含测定所检测到的 L0XL2水平是否大于L0XL2的阈值水平，从而测定所述个体中所述疾病或病况的结果、终点 或事件的可能性。
20. 根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区，其具有与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID N0:10、SEQ ID NO:ll、SEQ ID NO:12 中所阐述的序列具有至少 75% -致性的氨基酸序列；和/或轻链可变区，其具有与序列SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、 SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 14具有至少75% -致性的氨基酸序列。
【专利摘要】本发明提供了使用结合、抑制和/或检测赖氨酰氧化酶样蛋白2 LOXL2的药剂的疾病的治疗方法、诊断方法以及预后方法，所述疾病包括与纤维化和癌症相关的疾病；以及与此类方法一起使用的药剂、组合物、试剂盒、分析系统以及装置。
【IPC分类】C07K16-40
【公开号】CN104755501
【申请号】CN201380057346
【发明人】J·D·伯恩施泰因, J·I·亚当凯维奇, V·史密斯, S·K·莱曼, J·简, 李晓明, 邵立新
【申请人】吉联亚科学公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2013年10月30日
【公告号】CA2889208A1, EP2914632A1, US20140120102, WO2014070939A1