一种促进细菌生物膜形成的培养基及培养方法_2

文档序号:8468559阅读:来源:国知局
法范例
[0015]以下实施例中的测试菌株都是用该实施例中未加氯化钙的培养基将测试菌株稀释到0D_= 1.0配制成菌悬液母液,然后在无菌三角瓶中加入该实施例的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,然后再按照5%的体积分数的接种量加入菌悬液母液,成菌悬液工作液,将菌悬液工作液混合均匀后,吸取200 μ I菌悬液工作液到96孔细胞培养板中,做8个重复,并设空白对照(该实施例的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基中不加氯化钙的培养基),将96孔板放入30°C或37°C恒温培养箱静置培养一定时间(24-48h),然后将96孔板取出,轻轻的吸去浮游菌,然后用无菌去离子水分别清洗每个培养板孔3次,将多孔板放置在室温下晾干(此时用肉眼可看到在板孔的内壁和底部有较多的细菌生物膜形成),紧接着在每个板孔内加入200 μ I I %结晶紫染色液,静置室温染色45min,吸去结晶紫染色液,再用无菌水洗板孔三次以去除多余的结晶紫,室温干燥30min后,200 μ L 95%的乙醇脱色30min,利用全波长酶标仪测其在595nm处的吸光度值(OD595)。
[0016]实施例1:
[0017]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠8g,胰蛋白胨12g,酵母粉7g,氯化1? 10g,余量为水,将上述培养基的成份混合均勾后,灭菌备用。用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538)作为测试菌株,按照上述测试方法范例中的方法进行测试,用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:1.82 ;用含氯化钠8g/L,胰蛋白胨12g/L,酵母粉7g/L,余量为水的对照培养基在同样条件下培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),所测得的OD595均值为:1.29 (对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),与对照相比,其生物膜形成能力提高41.09%。
[0018]实施例2:
[0019]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠9g,胰蛋白胨13g,酵母粉6g,氯化1? 20g,余量为水,将上述成分混合均勾后,灭菌备用;用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538)作为测试菌株,按照上述测试方法范例中的方法进行测试。用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:2.17 ;用每升含有氯化钠9g,胰蛋白胨13g,酵母粉6g,余量为水的对照培养基在同样条件下培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),所测得的 OD595均值为:1.32 (对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),与对照相比,其生物膜形成能力提高64.39%。
[0020]实施例3:
[0021]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠12g,胰蛋白胨7g,酵母粉6g,氯化1? 30g,余量为水,将上述成分混合均勾,灭菌备用;用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538)作为测试菌株,按照上述测试方法范例的方法进行测试。用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:2.32 ;用含氯化钠12g,胰蛋白胨Sg,酵母粉6g,余量为水的对照培养基在同样条件下培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),所测得的 OD595均值为:1.35 (对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),与对照相比,其生物膜形成能力提高71.85%。
[0022]实施例4:
[0023]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠10g,胰蛋白胨10g,酵母粉5g,氯化1? 40g,余量为水,将上述成分混合均勾后,灭菌备用;用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538)作为测试菌株,按照上述测试方法范例的方法进行测试。用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:3.05 ;用每升含氯化钠10g,胰蛋白胨10g,酵母粉5g,余量为水的对照培养基在同样条件下培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),所测得的 OD595均值为:1.38 (对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),与对照相比,其生物膜形成能力提高1.21倍。
[0024]实施例5:
[0025]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠Hg,胰蛋白胨9g,酵母粉4g,氯化1? 50g,余量为水,将上述成分混合均勾后,灭菌备用;用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538)作为测试菌株,按照上述测试方法范例的方法进行测试。用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:1.77 ;用每升含氯化钠Hg,胰蛋白胨9g,酵母粉4g,余量为水的对照培养基在同样条件下培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),所测得的 OD595均值为:1.39 (对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC6538),与对照相比,其生物膜形成能力提高27.34%。
[0026]实施例6:
[0027]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升氯化钠Sg,胰蛋白胨12g,酵母粉7g,氯化钙10g,余量为水,将上述成分混合均匀后,灭菌备用;用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC6051)作为测试菌株,按照上述测试方法范例中的方法进行测试。用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:1.36 ;用每升含氯化钠Sg,胰蛋白胨12g,酵母粉7g,余量为水的对照培养基在同样条件下培养枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis ATCC6051),所测得的OD595均值为:1.01(对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisATCC6051),与对照相比,其生物膜形成能力提高34.65%。
[0028]实施例7:
[0029]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠9g,胰蛋白胨13g,酵母粉6g,氯化钙20g,余量为水,将上述成分混合均匀后,灭菌备用;用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC6051)作为测试菌株,按照上述测试方法范例中的方法进行测试。用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:1.49 ;用每升含氯化钠9g,胰蛋白胨13g,酵母粉6g,余量为水的对照培养基在同样条件下培养枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis ATCC6051),所测得的OD595均值为:0.98(对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisATCC6051),与对照相比,其生物膜形成能力提高52.04%。
[0030]实施例8:
[0031]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠12g,胰蛋白胨Sg,酵母粉6g,氯化钙30g,余量为水,将上述成分混合均匀后,灭菌备用;用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC6051)作为测试菌株,按照上述测试方法范例中的方法进行测试。用96孔细胞培养板在37°C静置培养菌株24h,用结晶紫染色法和全波长酶标仪测定菌株的生物膜形成能力,测得的OD595均值为:1.30 ;用每升含氯化钠12g,胰蛋白胨Sg,酵母粉6g,余量为水的对照培养基在同样条件下培养枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC6051),所测得的OD595均值为:1.09 (对照);由此可见,使用本发明所提供的简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基培养枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis ATCC6051),与对照相比,其生物膜形成能力提高19.27%。
[0032]实施例9:
[0033]一种简便而有效促进细菌生物膜形成的培养基,该培养基的配方如下:每升含有氯化钠10g,胰蛋白胨10g,酵母粉5g,氯化1? 40g,余量为水,将上述成分混合均勾后,灭菌备用;用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC6051)作为测试
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