NO: 1或图 11所示的侧翼玉米DNA序列，或其互补物。这些DNA序列可以作为DNA引物用于DNA扩增 方法。使用这些引物产生的扩增子对于事件E6611. 32. 1. 38是诊断性的。因此，本发明的实 施方案还包括由DNA引物产生的扩增子，所述DNA引物与单独的32138玉米的转移的T-DNA 区或其与鉴定出的侧翼序列的组合是同源的或互补的。
[0014] 按照本发明的另一实施方案，提供了检测样品中对应于事件E6611. 32. 1.38的 DNA分子的存在的方法，该方法包含：（a)将包含从植物中提取的DNA的样品与DNA探针接 触，所述探针包含在严紧杂交条件下与从事件E6611. 32. 1. 38中提取的DNA杂交并且在严 紧杂交条件下不与对照植物DNA杂交的分子；(b)使样品和探针处于严紧杂交条件下，和 (c)检测探针与DNA的杂交。更具体地，本发明的另一实施方案包含检测样品中对应于事件 E6611. 32. 1. 38的DNA分子的存在的方法，该方法由以下组成：（a)将包含从玉米植物提取 的DNA的样品与由例如接合序列的对于该事件是独特的序列所组成的DNA探针分子接触， 其中所述DNA探针分子在严紧杂交条件下与从包含玉米事件E6611. 32. 1. 38的植物提取的 DNA杂交并且在严紧杂交条件下不与对照玉米植物DNA杂交；(b)使样品和探针处于严紧杂 交条件下，和（c)检测探针与DNA的杂交。
[0015] 本发明的另一实施方案还涉及用于鉴定生物样品中事件E6611. 32. 1.38的DNA 检测试剂盒。所述试剂盒包含用于PCR鉴定操作步骤中的第一引物和第二引物，所述第 一引物特异性地识别E6611. 32. 1. 38的左或右边界侧翼区，所述第二引物特异性地识别 E6611. 32. 1. 38的外源DNA内的序列。本发明的其他实施方案涉及用于鉴定生物样品中事 件E6611. 32. 1. 38的试剂盒，所述试剂盒包含特异性探针，所述特异性探针具有对应于以 下序列或与以下序列互补的序列：与事件E6611. 32. 1.38的特异区具有80%至100%的序 列同一性的序列。探针的序列对应于包含事件E6611. 32. 1.38的5'或3'侧翼区的部分的 特异区。
[0016] 本发明的其他实施方案涉及为了不同目的使用本发明的实施方案所包括的 方法和试剂盒，所述不同目的例如但不限于以下：鉴定植物、植物材料或产品中的事件 E6611. 32. 1. 38,所述产品例如但不限于包含或源自植物材料的食品或饲料产品（新鲜的 或加工过的）；为了转基因和非转基因材料之间的分离，鉴定转基因植物材料；以及确定包 含玉米事件E6611. 32. 1. 38的植物材料的质量。所述试剂盒还可以含有检测方法的实施所 必需的试剂和材料。
[0017] 在另一方面中，本发明提供用于产生包含事件E6611. 32. 1. 38的子代植物的方 法。所述子代植物可以是近交（inbred)或杂交植物。在其他应用中，本发明提供用于实施 对于事件E6611. 32. 1. 38的标记（marker)辅助育种的方法。按照本发明的另一方面，提供 了包含事件E6611. 32. 1. 38的稳定转化的玉米植物。
[0018] 附图概述
[0019] 图1提供了 PHP24597的质粒图谱。质粒大小为52869bp。
[0020] 图2提供了来自质粒PHP24597的T-DNA区的图谱。所使用的探针的位置如图谱 下方盒所示并且标识为以下：
[0021]
【主权项】
1. DNA构建体，其包含第一表达盒、第二表达盒和第三表达盒，所述第一表达盒包含与 编码恢复植物雄性不育的基因产物的第一多核苷酸可操作地连接的第一启动子，所述第二 表达盒包含与编码防止淀粉积累的基因产物的第二多核苷酸可操作地连接的第二启动子， 并且所述第三表达盒包含与编码提供可视标记的基因产物的第三多核苷酸可操作地连接 的第三启动子。
2. 如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述第一启动子是雄性组织偏好启动子。
3. 如权利要求2所述的DNA构建体，其中所述第一启动子是玉米5126启动子。
4. 如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述第一多核苷酸编码玉米MS45。
5. 如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述第二启动子是雄性组织偏好启动子。
6. 如权利要求5所述的DNA构建体，其中所述第二启动子是玉米PG47启动子。
7. 如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述第二多核苷酸编码a -淀粉酶。
8. 如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述第三启动子是种子偏好启动子。
9. 如权利要求8所述的DNA构建体，其中所述种子偏好启动子优先在糊粉中表达。
10. 如权利要求9所述的DNA构建体，其中所述糊粉偏好启动子为大麦脂质转移蛋白启 动子（LTP2)。
11. 如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述第三多核苷酸编码产生着色的多肽。
12. 如权利要求11所述的DNA构建体，其中所述产生着色的多肽是DsRed2 (Altl)。
13. 如权利要求1所述的DNA构建体，其包含与编码玉米MS45的多核苷酸可操作地连 接的玉米5126启动子，与编码玉米a -淀粉酶的多核苷酸可操作地连接的玉米PG47启动 子，和与编码DsRed2(Altl)的多核苷酸可操作地连接的大麦LTP2启动子。
14. 如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述表达盒还包含与所述第二启动子可操作 地连接的编码靶向造粉体的转运肽的多核苷酸。
15. 如权利要求14所述的DNA构建体，其中所述编码靶向造粉体的转运肽的多核苷酸 来自玉米Brittle-I基因。
【专利摘要】提供了涉及包含制种技术的转基因植物的组合物和方法。具体地，提供了具有赋予制种技术的E6611.32.1.38事件的玉米植物。在已述染色体位置携带E6611.32.1.38事件的植物包含所述的基因组/转基因接合。位于整合的E6611.32.1.38事件侧翼的植物基因组DNA可以用于设计会特异性针对E6611.32.1.38事件的测定法。E6611.32.1.38事件的基因组插入位点的表征为增强的育种效率做准备并且使利用分子标记在育种群体及其子代中追踪转基因插入物成为可能。提供了用于玉米E6611.32.1.38事件的鉴定、检测和使用的多种方法和组合物。
【IPC分类】C12N15-82
【公开号】CN104805115
【申请号】CN201510184565
【发明人】肯特·布灵克, 埃兰·克罗盖, 尼娜·迪耶特里希, 大卫·洪德莱德, 乔舒亚·K·永, 仲晓燕
【申请人】先锋国际良种公司, 纳幕尔杜邦公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2009年2月16日
【公告号】CA2715564A1, CN102119216A, CN102119216B, EP2245169A2, US8257930, US20090210970, US20130031674, WO2009103049A2, WO2009103049A3