利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌及重组方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物工程技术领域，具体地涉及一种利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组 大肠杆菌及重组方法及应用。
【背景技术】
[0002] 羟基酪醇（hydroxytyrosol)，中文名称：3, 4-二羟基苯乙醇，英文名称： 3, 4-Dihydroxyphenylethanol。中文别名：2-(3, 4-二羟基苯基）乙醇；羟基酪醇；3, 4-二 羟基苯乙基醇。CAS号：10597-60-1。分子式！C8HltlO3。结构式：
【主权项】
1. 利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌构建方法，其特征是包括如下步骤，以序 列表SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2为PCR引物，以大肠杆菌BW25113基因组DNA为模板，PCR扩 增HpaBC基因的开放阅读框架，利用SacI和KpnI双酶切将HpaBC基因连入载体pTrcHisB， 得到中间质粒pTrcHisB-HpaBC，以pTrcHisB-HpaBC为模板，利用 SEQ ID No. 3、SEQ ID NO. 2 为PCR引物，PCR扩增获得带有Trc启动子的HpaBC基因片段Trc-HpaBC，KpnI单酶切连入 质粒pTrcHisB-AROlO,得到表达载体pTrcHisB-AROlO-HpaBC ;将pTrcHisB-AROlO-HpaBC与 质粒pBb3共转入大肠杆菌菌株BMGA，得到重组大肠杆菌菌株BMGA (pTrcHisB-AROlO-HpaBC &PbB3)。
2. 权利要求1的方法构建的利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌。
3. 权利要求2的利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌发酵生产羟基酪醇的用途。
【专利摘要】本发明公开了利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌及构建方法及应用，方法为，以SEQ ID NO.1、2为引物，以大肠杆菌BW25113基因组DNA为模板，PCR扩增HpaBC基因，连入载体pTrcHisB，得到中间质粒，以中间质粒为模板，以SEQ ID No.3、2为引物，PCR扩增，连入质粒pTrcHisB-ARO10，得到表达载体pTrcHisB-ARO10-HpaBC并将该载体与质粒pBb3共转入大肠杆菌菌株BMGA，得到重组大肠杆菌。本发明的重组大肠杆菌含有来自酿酒酵母的ARO10基因及来自大肠杆菌内源的HpaBC基因。能够显著提高羟基酪醇的产量。
【IPC分类】C12N15-70, C12R1-19, C12N1-21, C12P7-22
【公开号】CN104805110
【申请号】CN201510242626
【发明人】刘涛, 李晓林, 白艳芬, 毕慧萍, 庄以彬, 马延和
【申请人】中国科学院天津工业生物技术研究所
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年5月13日