一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法_2

文档序号:8523804阅读:来源:国知局
造条件,Gl的快速繁殖加快六价铬的去除,提高六价铬的去除率,除pH=2外其余均能达到100%去除废水中的六价铬。
【附图说明】
[0016]图1酸碱度对微生物生长繁殖的影响;
图2酸碱度分别对两种微生物去除六价铬的影响(G1、B2);
图3复合微生物不同酸碱度下对六价铬的去除。
【具体实施方式】
[0017]下面通过实例对本发明做进一步详细说明,这些实例仅用来说明本发明,并不限制本发明的范围。
[0018]实施例1 驯化筛选步骤:
(1)取铬污染土壤样品10g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中,30°C培养24h,摇床转速为120 rpm ;
(2)取步骤(I)培养液Iml转移进100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬20mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm ;
(3)取步骤(2)培养液Iml转移至100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬30mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm,以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量,逐步增加六价铬的含量,直至六价铬浓度达到50 mg/L,培养24 h后得到驯化菌液;
(4)取驯化菌液Iml转移至9 ml无菌生理盐水中,稀释10倍,菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10_7 (即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中);
(5)从10_6、10_7g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上,培养箱中30°C培养24 h ;
(6)从上述步骤中分别挑取单菌落,平板划线纯化,得到一株芽孢杆菌Bacillus和一株地霉菌Geotrichum,斜面保存备用。
[0019]所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为:牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5g/L、水 I L0
[0020]所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
[0021]所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4, lg/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4,0.01g/L CaCl2, lg/L NH4C1,0.01 g/L FeSO4, 1.0g/L NaCl,0.003g/L MnSO4, 5g/L 葡萄糖。
[0022]挑取两株菌分别在含40 mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养24 h后,各取I ml菌液同时加入pH为4的150 ml无机盐培养基(六价铬含量为40mg/L)中,摇床转速为120 rpm, 30°C培养,每隔一定的时间取样5 ml,在9280Xg离心力作用下离心15 min,取上清液,稀释10倍后按标准法(HJ687-2014)测定并计算六价铬残留量,结果如图3:由图可知进水pH在4能处理六价铬,主要是地霉菌Gl的生长繁殖使六价铬被去除。
[0023]实施例2 驯化筛选步骤:
(1)取铬污染土壤样品10g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中,30°C培养24h,摇床转速为120 rpm ;
(2)取步骤(I)培养液Iml转移进100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬20mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm ;
(3)取步骤(2)培养液Iml转移至100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬30mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm,以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量,逐步增加六价铬的含量,直至六价铬浓度达到50 mg/L,培养24 h后得到驯化菌液;
(4)取驯化菌液Iml转移至9 ml无菌生理盐水中,稀释10倍,菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10_7 (即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中);
(5)从10_6、10_7g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上,培养箱中30°C培养24 h ;
(6)从上述步骤中分别挑取单菌落,平板划线纯化,得到一株芽孢杆菌Bacillus和一株地霉菌Geotrichum,斜面保存备用。
[0024]所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为:牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5g/L、水 I L0
[0025]所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
[0026]所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4,1 g/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4,
0.0lg/L CaCl2, lg/L NH4C1,0.01 g/L FeSO4, 1.0g/L NaCl,0.003g/L MnSO4, 5g/L 葡萄糖。
[0027]挑取两株菌分别在含40 mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养24 h后,各取
Iml菌液同时加入pH为10的150 ml无机盐培养基(六价铬含量为40mg/L)中,摇床转速为120 rpm, 30°C培养,每隔一定的时间取样5 ml,在9280Xg离心力作用下离心15 min,取上清液,稀释10倍后按标准法(HJ687-2014)测定并计算六价铬残留量,结果如图3:由图可知进水PH在10能处理六价铬,初期由芽孢杆菌生长代谢去除部分六价铬,同时代谢产物的积累使废水PH降低,为Gl的生长繁殖创造条件,Gl的快速繁殖加快六价铬的去除,提高六价铬的去除率,达到100%去除废水中的六价铬。
[0028]实施例3 驯化筛选步骤:
(1)取铬污染土壤样品10g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中,30°C培养24h,摇床转速为120 rpm ;
(2)取步骤(I)培养液Iml转移进100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬20mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm ;
(3)取步骤(2)培养液Iml转移至100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬30mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm,以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量,逐步增加六价铬的含量,直至六价铬浓度达到50 mg/L,培养24 h后得到驯化菌液;
(4)取驯化菌液Iml转移至9 ml无菌生理盐水中,稀释10倍,菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10_7 (即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中);
(5)从10_6、10_7g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上,培养箱中30°C培养24 h ;
(6)从上述步骤中分别挑取单菌落,平板划线纯化,得到一株芽孢杆菌Bacillus和一株地霉菌Geotrichum,斜面保存备用。
[0029]所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为:牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5g/L、水 I L0
[0030]所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
[0031]所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4, lg/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4,
0.01g/L CaCl2, lg/L NH4Cl, 0.0lg/L FeSO4, 1.0g/L NaCl,0.003g/L MnSO4, 5g/L 葡萄糖。
[0032]挑取两株菌分别在含有40mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养,各取I ml菌液分别加入pH为4的150 ml无机盐培养基(六价铬含量为40mg/L)中,摇床转速为120rpm, 30°C培养,按一定时间间隔,分别取样5 ml,在9280Xg离心力作用下离心15 min,取上清液,稀释10倍后按标准法(HJ687-2014)测定并计算六价铬残留量,结果如图2 (GUB2):从图中可以看出当pH为4时,地霉菌Gl能够处理含六价铬的废水,并且在6天内100%去除六价铬;而芽孢杆菌B2在pH4时则生长繁殖完全被抑制,对六价铬含量没有影响。
[0033]实施例4 驯化筛选步骤:
(1)取铬污染土壤样品10g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中,30°C培养24h,摇床转速为120 rpm ;
(2)取步骤(I)培养液Iml转移进100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬20mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm ;
(3)取步骤(2)培养液Iml转移至100 ml无机盐液态培养基,培养基中含六价铬30mg/L,六价铬以重铬酸钾配制,30°C培养24 h,摇床转速为120 rpm,以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量,逐步增加六价铬的含量,直至六价铬浓度达到50 mg/L,培养24 h后得到驯化菌液;
(4)取驯化菌液Iml转移至9 ml无菌生理盐水中,稀释10倍,菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10_7 (即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml
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