一种快速培养绿脓杆菌的方法及其专用培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物领域，具体涉及一种快速培养绿脓杆菌的方法及其专用培养基。
【背景技术】
[0002] 绿脓杆菌，又称铜绿假单胞菌（学名Pseudomonas aeruginos)，是一种革兰氏阴 性菌、好氧、呈长棒形的细菌，只有单向的运动性。绿脓肝菌是一种条件致病菌，对外界环 境适应能力很强，在潮湿环境下可长期存活。人正常皮肤尤其是潮湿部位（如腋下、会阴 部、耳道、呼吸道和肠道等处）均有绿脓肝菌的存在，而完整的皮肤和粘膜作为屏障能够有 效的抵御绿脓肝菌的入侵，但人体的正常防御机制下降或受到损伤（如皮肤粘膜损伤、粒 细胞缺乏、低蛋白血症、肿瘤的放化疗、长期应用激素和抗生素、烧伤、婴幼儿皮肤、脐带、肠 道，老年人泌尿系统）则容易引发绿脓肝菌感染。
[0003] 与其他假单胞菌属的细菌一样，绿脓杆菌分泌多种的色素，包括绿脓菌素（呈青 色）、萤光素（呈荧光黄色）及绿脓菌红素（呈绯红色）。假单胞菌属培养基P就是用作增 加绿脓菌素及绿脓菌红素的生产，而假单胞菌属培养基F就是加强萤光素的生成。
[0004] 绿脓杆菌的特征是它那如珠母般的外形及在试管内的葡萄气味。临床确认绿脓杆 菌的方法是在于绿脓菌素及萤光素的生成，且在42°C的环境下生长的能力。绿脓杆菌在柴 油及航空燃料中仍能生长，更被称为氢碳分解菌，能引发微生物腐蚀作用。它会产生一种暗 色的凝胶垫，一般被误解为藻类。
[0005] 绿脓杆菌是一种令免疫受损的机会性感染病原，一般影响肺部及泌尿道，或造成 烧伤、伤口及其他血液感染，如败血病。虽然很不常有，但绿脓杆菌亦会造成肺炎。在很多 肺炎研宄中指出，绿脓杆菌是其中一种需要隔绝的细菌。绿脓菌素就是这种细菌的致病因 子，且在氧化应激下能使秀丽隐杆线虫死亡，但是有研宄指水杨酸能抑制绿脓菌素的生成。 10%在医院感染的病症都是由绿脓杆菌所引致的。囊肿性纤维化病人的肺部是最先感染绿 脓杆菌的一群。在缺乏适当处理食水质素下，它亦是引致皮肤炎的其中一种细菌。它也是 造成烧伤感染最普遍的细菌。据报道绿脓杆菌引起的院内感染占10%~31. 5%，居病原菌 之首，国内外烧伤中心对细菌感染的临床调查中发现绿脓杆菌感染占50%以上。基于以上 致病性，绿脓杆菌是疾病诊断中必检微生物之一。传统的检测方法按照，需要至少3天的时 间进行菌落培养检测。对于疾病的诊断来说，具有一个较大的滞后性。因此，提供一种能够 快速培养绿脓杆菌的培养基显得非常重要。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于针对上述各种现有培养基存在的问题，提供一种快速且培养阳 性率高的绿脓杆菌液体培养基。
[0007] 本发明提供了如下的技术方案：一种能促进绿脓细菌快速增殖的培养基（IL):苯 乙酸I. 2g，酪蛋白胨5g，硫酸镁0. 08g，氯化钠2g，磷酸氢二钾2. 5g，硫酸锌lmg，葡萄糖 lg，盐酸P比卩多醇〇. 5mg，卵磷脂lg，四氯四碘焚光素钠0. 001g，甘油lml，pH8. 0,加蒸馏水至 1000ml。制备方法：将配方中各成分混匀，调pH8.0,低压灭菌，4°C保存。主要特点：分离绿 脓杆菌生长，不允许或很少有其它革兰氏阴性杆菌生长，绿脓杆菌呈绿色反应，绿色明显， 易观察。
[0008] 本发明作为一种促进绿脓杆菌快速增殖的培养基，与常规培养基相比有着明显的 促进绿脓杆菌生长，缩短培养时间的效果。用该培养基培养绿脓杆菌表明，绿脓杆菌对数生 长期提前了 5-8小时，且稳定期长。
【具体实施方式】
[0009] 本发明结合以下实例作进一步的说明。
[0010] 实施例1配制培养基
[0011] (1)快速培养培养基：按苯乙酸1.2g，酪蛋白胨5g，硫酸镁0.08g，氯化钠2g，磷 酸氢二钾2.5g，硫酸锌lmg，葡萄糖lg，盐酸吡哆醇0. 5mg，卵磷脂lg，四氯四碘荧光素钠 0. 001g，甘油lml，pH8. 0,加蒸馏水至1000ml。灭菌，即得到所述的培养基。
[0012] (2)现有技术常用的培养基：
[0013] 配方（每升）：酪蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖 2. 5g，卵磷脂lg，吐温80 7g，最终pH7. 2±0. 2,灭菌得到所述的培养基。
[0014] (3)普通牛肉膏蛋白胨培养基。
[0015] 实施例2菌落培养实验
[0016] 按2X IO6Ail的接种量分别接种绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌 于三种培养基中，置37摄氏度培养6小时，用血球计数器计数法测定菌数，实验结果如下：
[0017]
[0018] 从以上的数据可以表明，本申请提供的快速培养基能够具有较好的促进绿脓杆菌 快速增殖的特性，而且，该培养基也不适合其它常见的细菌的繁殖，有利于绿脓杆菌的纯化 培养。
[0019] 实施例3医疗样本中绿脓杆菌培养条件的优化
[0020] 取医疗样本分泌物少许，加入到含有3mL快速培养培养基的试管中，首先42 °C 220r/min培养2h，然后37摄氏度220r/min培养6h，培养液颜色变为微绿色。表明医疗样 本中含有绿脓杆菌。通过本领域常规的PCR鉴定也表明，该培养液中的菌为绿脓杆菌。
[0021] 通过实施例3可以发现，所述的培养方法相对于现有技术的常规的培养方法大规 模的缩短了培养和鉴别的时间，为病菌的检验节省了大量宝贵的时间。具有很好的应用价 值。
[0022] 实施例4与其它的绿脓杆菌培养基的专性比较
[0023] 按照CN1730649A中公开的方法，将CGMCC No. 1445菌株以2X 106/ml接种量接种 到其专用液体培养基中，在35°C下220r通气培养8h。
[0024] 将CGMCC No. 1445菌株以2X 106/ml接种量接种到本发明的液体培养基中，在 35°C下220r通气培养8h ;结果如下：
[0025]
[0026] 从以上的结1果也可以看出，本申请的培^基在快速培养绿脓i干菌方面上具有较好 的效果。
【主权项】
1. 一种培养基，其特征在于：能快速培养绿脓杆菌。2. 如权利要求1所述的培养基，其特征在于：由如下组分组成：苯乙酸I. 2g，酪蛋白胨 5g，硫酸镁0. 08g，氯化钠2g，磷酸氢二钾2. 5g，硫酸锌lmg，葡萄糖lg，盐酸吡B多醇0. 5mg， 卵磷脂lg，四氯四碘焚光素钠〇. 〇〇lg，甘油lml，pH8. 0,加蒸馏水至1000ml。3. -种快速培养绿脓杆菌的方法，其特征在于使用权利要求1-2任一项所述的培养基 培养绿脓杆菌。
【专利摘要】本发明公开了一种能促进绿脓杆菌快速增殖的培养基。该培养基是通过众多的组分通过千百次摸索得到的一种具有较好培养效果的培养基。本发明的促进绿脓杆菌快速增殖的培养基能够显著的增加增强细胞活力。本发明的促进细菌快速增殖的培养基与常规培养基相比有着明显的促进细菌生长，缩短培养时间的效果。
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/385
【公开号】CN104894039
【申请号】CN201510383294
【发明人】辛克盛, 刘慧 , 姚宗良, 王红兵
【申请人】青岛大学, 刘慧
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月26日