高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于农药残留检测技术领域，具体涉及一种高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒和磺草酮农药的一种检测方法。
【背景技术】
[0002]农药是当前农业生产中用于防治病、虫、杂草对农作物危害不可缺少的物质。农药的大面积使用也带来了严重的食品安全与环境问题，农药残留污染环境、污染农产品，影响农产品出口，引起人、畜中毒事故。我国蔬菜产业目前仍属于小农经济，生产规模不大，市场小而散，产销方式多为即采即售。因此，要有效防止“毒菜”流入市场，无疑需要很大的检测量，而建立既简便、快速又经济有效的样品前处理及检测方式是解决这一问题的关键。因此，为有效监测农药残留，发展高灵敏、高选择性、快速、可靠和低成本的检测技术具有十分重要的意义。
[0003]常用的农药残留快速检测技术有酶抑制法、免疫分析法等。酶抑制法测定样品和农药种类有限，目前只用于蔬菜、水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留检测，且不能给出定性和定量结果。免疫分析法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强、检测费用低等优点，只需很少的仪器设备和专业培训，是农药残留快速筛查的好方法。但是，免疫分析是以抗体、酶等一些脆弱的生物活性物质作为分子识别单元，这些生物活性物质易失活，缺乏保存和操作的稳定性，操作条件苛刻、繁琐；其次，并非所有的农药分子都适用于免疫分析，一些没有特征结构的农药分子无法设计相应的半抗原；第三，抗体或标记抗体的制备和纯化难度大，无法重复使用，因此免疫分析的成本依然较高。免疫分析的这些局限性在很大程度上限制了它们在农残快筛检测中的广泛应用。
[0004]在现有检测农药的残留农药化合物中，磺草酮是最为常见的一种农药之一。磺草酮为三酮类除草剂，主要用于防治玉米、甘蔗与小麦田杂草的广谱除草剂，具有稳定性强、兼容性好、除草效果佳等优点，已在许多国家得到广泛的应用。目前农药(磺草酮)残留分析的主要手段为基于色谱、质谱及色谱-质谱联用的大型精密仪器分析法，采用仪器分析法虽然方法灵敏度高、准确度好等优点，然而这些方法存在着样品处理步骤复杂繁琐，分析时间长，仪器设备昂贵、庞大，检测成本高，难以实现现场(在线)检测等问题，无法满足目前市场急需的经济、快速、简便的农药残留检测需求。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种磺草酮农药检测试剂盒和磺草酮农药的一种检测方法，旨在解决现有检测磺草酮农药残留方法存在的检测步骤繁琐，时间长，成本高，灵敏度不高等技术问题。
[0006]本发明的另一目的在于提供一种有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子高子铕荧光探针及其制备方法。
[0007]为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下:
[0008]一种高分子铕荧光探针的制备方法，包括如下步骤:
[0009]将铕金属盐溶液与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应，制备出铕多配位复合物；
[0010]将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应，生成高分子铕荧光探针。
[0011]以及，一种高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为上述的高分子铕荧光探针的制备方法制备获得的高分子铕荧光探针。
[0012]以及，一种磺草酮农药检测试剂盒，其包括聚合物酶联板和结合在所述聚合物酶联板上的高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为本发明高分子铕荧光探针，其中，所述高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。
[0013]以及，一种磺草酮农药的检测方法，包括如下步骤:
[0014]获取含有待测样品的溶液；
[0015]将如上述的磺草酮农药检测试剂盒中含有高分子铕荧光探针的聚合物酶联板进行浸泡处理2.0-8.0小时；
[0016]将所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中进行震荡反应10-30min，然后对所述聚合物酶联板进行洗涤；
[0017]将经洗涤处理后的所述聚合物酶联板置于荧光酶标仪测定相应孔的荧光强度，从而得出磺草酮的量。
[0018]与现有技术相比，上述高分子铕荧光探针的制备方法将高度灵敏的铕荧光检测与分子印迹相结合，制备出的高分子铕荧光探针能够利用分子印迹技术的识别特性，完成对磺草酮的特异识别，其后将分析结果以荧光的形式表达出来，从而使得该高分子铕荧光探针对磺草酮具有抗干扰、高选择性、高灵敏度特点，同时Stokes位移大，发射线状光谱，荧光寿命长，荧光稳定。另外，其制备方法简单，制备的高分子铕荧光探针性能稳定。
[0019]上述磺草酮农药检测试剂盒由于含有上述的高分子铕荧光探针，且高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱处理，因此，该高分子铕荧光探针中具有磺草酮结合位点，使得上述磺草酮农药检测试剂盒对磺草酮农药具有特异性，高选择性和抗干扰性，能够实现快速的检测磺草酮农药，且灵敏度高，成本低。
[0020]上述磺草酮农药的检测方法直接利用上述磺草酮农药检测试剂盒进行检测，因此，该方法能够实现对磺草酮农药快速、准确的检测，且检测灵敏度高，其方法简单，成本低。
【附图说明】
[0021]图1为本发明磺草酮检测方法实施例中配制的磺草酮浓度为0、20、40、80、200的系列标准溶液采用含有实施例1制备的高分子铕荧光探针的磺草酮农药检测试剂盒进行荧光检测的含量与荧光强度关系图。
【具体实施方式】
[0022]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0023]本发明实例提供了一种将高度灵敏的铕荧光检测与分子印迹相结合的高分子铕荧光探针的制备方法。该方法包括如下步骤:
[0024]步骤S01.制备铕多配位复合物:
[0025]将铕金属盐溶液与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应，制备出铕多配位复合物；
[0026]步骤S02.利用铕多配位复合物制备高分子铕荧光探针:
[0027]将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应，生成高分子铕荧光探针。
[0028]具体地，在上述步骤SOl中，为了有效提高铕多配位复合物的得率和稳定性能，在一实施例中，铕金属盐与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应方法如下:
[0029]步骤SOll:向铕金属盐溶液中加入带不饱和双键的配位化合物和磺草酮农药，得到溶液A ;
[0030]步骤S012:向所述溶液A中加入水后将混合液的pH调至8.0-10.0，搅拌直至所述混合液中出现絮状物，接着进行结晶处理，固液分离处理，得到铕多配位复合物。
[0031]其中，该步骤SOll中，所述铕金属盐、带不饱和双键的配位化合物和磺草酮三者的摩尔比为1:(1-3):(1_3)。在一具体实施例中，该铕金属盐、带不饱和双键的配位化合物和磺草酮三者的摩尔比为1:2:1。在另一实施例中，在将三者混合物的过程中，先将铕金属盐与带不饱和双键的配位化合物进行混合均匀后，然后再加入磺草酮进行混料均匀。
[0032]在上述步骤SOll中的各实施例的基础上，在一具体实施例中，该带不饱和双键的配位化合物选用邻苯二甲酸烯酯类化合物，在具体实施例中，该邻苯二甲酸烯酯类化合物为邻苯二甲酸二丙烯酯、邻苯二甲酸二乙烯酯中的至少一种。该选用的邻苯二甲酸烯酯类化合物含有不饱和双键，不仅能够与铕形成稳定的配位，而且能够参与聚合反应从而将铕探针固定。
[0033]