槽中，超声反应2小时，直到溶液变为粘稠液，即为含有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的高分子铕荧光探针的粘稠液。
[0114]磺草酮农药检测试剂盒实施例
[0115]一种磺草酮农药检测试剂盒。该磺草酮农药检测试剂盒包括96孔聚苯乙烯酶联板和结合在所述96孔聚苯乙烯酶联板上的高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为实施例1制备的含有高分子铕荧光探针的粘稠液，其中，所述高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。
[0116]其中，高分子铕荧光探针结合在所述聚合物酶联板上的方法如下:
[0117](I).将实施例1制备的含有高分子铕荧光探针的粘稠液直接涂布在96孔聚苯乙烯酶联板上，在紫外灯下老化10小时，待粘稠液硬化变为固态，即得到涂布有对磺草酮农药具有特异识别和检测功能的尚分子箱焚光探针的96孔聚苯乙稀酶联板；其中，控制该尚分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为1.lmg/cm2。
[0118](2).将步骤(I)获得的涂布有高分子铕荧光探针的96孔聚苯乙烯酶联板浸泡在50%甲醇水中，振荡、溶胀12小时后用1.0%的甲酸溶液振荡洗涤，去除磺草酮模板分子，得到不含磺草酮模板分子的酶联板，干燥后装入试剂盒。
[0119]另外，按照上述方法，将实施例2-4的含有高分子铕荧光探针的粘稠液分别涂覆在96孔聚苯乙烯酶联板表面，经紫外光固化后进行浸泡处理，控制该高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为0.5?2.0mg/cm2。
[0120]磺草酮检测方法实施例
[0121]一种磺草酮检测方法，包括如下步骤:
[0122](I)标准磺草酮样品溶液和待测样品溶液的配制:用20mM的NH4Ac溶液配制磺草酮浓度为0、20、40、80、200 ( μ g/L)的系列标准溶液；；待测样品采用NH4Ac配制1.0 μ g/ml的NH4Ac溶液；
[0123](2)将上述磺草酮农药检测试剂盒实施例提供的磺草酮农药检测试剂盒用20mmol/L 的 NH4Ac 溶液浸泡 2h ；
[0124](3)弃去浸泡液，分别向96孔聚苯乙烯酶联板的孔中加入250ul用步骤(I)配制的20mmol/L的NH4Ac溶解的标准磺草酮样品溶液和待测样品溶液，振荡30min ；
[0125](4)弃去待测液，以100 μ L的20mmol/L的NH4Ac溶液清洗2次；
[0126](5)将酶联板置于荧光酶标仪，以310nm激发波长，615nm发射波长分别测定各孔的荧光强度。
[0127]检测结果，如图1所述，磺草酮浓度为O、20、40、80、200 μ g/L的系列标准溶液采用含有实施例1制备的高分子铕荧光探针的磺草酮农药检测试剂盒所测得的荧光强度之间具有良好的线性关系，其R高达0.9935。将待测样品的荧光值按照图1中标准曲线进行计算，得到待测样品中的磺草酮含量。
[0128]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种高分子铕荧光探针的制备方法，包括如下步骤: 将铕金属盐溶液与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应，制备出铕多配位复合物； 将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应，生成高分子铕荧光探针。2.根据权利要求1所述的高分子铕荧光探针的制备方法，其特征在于，将所述铕金属盐与带不饱和双键的配位化合物、磺草酮农药进行反应方法如下: 向铕金属盐溶液中加入带不饱和双键的配位化合物和磺草酮农药，得到溶液A ;其中，所述铕金属盐、带不饱和双键的配位化合物和磺草酮三者的摩尔比为1: (I?3): (I?3); 向所述溶液A中加入水后将混合液的pH调至8.0?10，搅拌直至所述混合液中出现絮状物，接着进行结晶处理，固液分离处理，得到铕多配位复合物。3.根据权利要求1或2所述的高分子铕荧光探针的制备方法，其特征在于:所述带不饱和双键的配位化合物选用邻苯二甲酸烯酯类化合物。4.根据权利要求1或2所述的高分子铕荧光探针的制备方法，其特征在于，所述分子印迹聚合反应的方法如下: 将所述铕多配位复合物与苯乙烯、二乙烯基苯交联剂混合溶解后，加入引发剂混合，得到半透明状溶液；其中，所述铕多配位复合物:苯乙烯:二乙烯基苯交联剂的摩尔比为1:(90 ?95): (I ?4)； 在无氧的环境中，将所述半透明状溶液于50?70°C下超声反应2?8小时，生成高分子铕荧光探针。5.一种高分子铕荧光探针，其特征在于:所述高分子铕荧光探针为根据权利要求1-4任一所述的高分子铕荧光探针的制备方法制备获得的高分子铕荧光探针。6.一种磺草酮农药检测试剂盒，包括聚合物酶联板和结合在所述聚合物酶联板上的高分子铕荧光探针，所述高分子铕荧光探针为权利要求5所述的高分子铕荧光探针，其中，所述高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。7.根据权利要求6所述的磺草酮农药检测试剂盒，其特征在于:所述高分子铕荧光探针结合在所述聚合物酶联板上的方法为: 将含有所述高分子铕荧光探针的溶液涂布在所述聚合物酶联板上后，经紫外光老化处理； 将经老化处理后的所述聚合物酶联板进行浸泡溶胀处理，采用浓度为0.1-1%的甲酸洗涤处理，洗脱除去高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子。8.根据权利要求6或7所述的磺草酮农药检测试剂盒，其特征在于:所述高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为0.5?2.0mg/cm2。9.一种磺草酮农药的检测方法，包括如下步骤: 获取含有待测样品的溶液； 将如权利要求6-8任一所述的磺草酮农药检测试剂盒中含有高分子铕荧光探针的聚合物酶联板进行浸泡处理； 将所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中进行震荡反应10-30min，然后对所述聚合物酶联板进行洗涤处理； 将经洗涤处理后的所述聚合物酶联板置于荧光酶标仪测定相应孔的荧光强度，从而得出磺草酮的量。10.根据权利要求9所述的一种磺草酮农药的检测方法，其特征在于:所述含有待测样品的溶液中待测样品的浓度为0.02-1.0 μ g/ml ;且所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中的体积为100-250ul ; 所述测定相应孔的荧光强度检测条件是:激发波长为310nm，发射波长为615nm。
【专利摘要】本发明提供了一种高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒和一种磺草酮农药的检测方法。其中，本发明高分子铕荧光探针由如下方法制备：先制备铕多配位复合物，然后将所述铕多配位复合物在交联剂作用下发生分子印迹聚合反应。本发明高分子铕荧光探针对磺草酮具有抗干扰、高选择性、高灵敏度特点。本发明磺草酮农药检测试剂盒含有本发明高分子铕荧光探针，其中，该高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。本发明磺草酮农药的检测方法直接利用本发明磺草酮农药检测试剂盒进行检测。本发明磺草酮农药检测试剂盒和磺草酮农药的检测方法能快速实现对磺草酮进行检测，且灵敏度高，成本低。
【IPC分类】C08F212/08, G01N33/64, C08J9/26, G01N21/64, C08F212/36, C09K11/06, C08F230/04
【公开号】CN104910310
【申请号】CN201410697281
【发明人】沈金灿, 韩瑞阳, 谢冬冬, 肖陈贵, 肖锋, 张毅, 华红慧
【申请人】深圳市检验检疫科学研究院, 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年11月26日