高分子铕荧光探针及其制备方法、磺草酮农药检测试剂盒的制作方法_2

文档序号:8933266阅读:来源:国知局
在另一具体实施例中,该铕金属盐选用硝酸铕、氯化铕中的至少一种。该铕金属盐为上述各实施例中提供铕离子。
[0034]在另一具体实施例中,铕金属盐溶液的溶剂为甲醇、乙醇中的至少一种。
[0035]该步骤S012中,在一实施例中,向溶液A中加入水的量为在加水的混合溶液中的含量为20-40%。在一具体实施例中,该向溶液A中加入水的量为在加水的混合溶液中的含量为 30% ν/νο
[0036]当将加有水的混合溶液的pH调至8-10时,该反应物发生反应,生成絮状物。为了提高絮状物的得率,在一具体实施例中,该pH调至8.0。在一实施例中,调节该混合溶液的pH调可以用但不仅仅用氢氧化钠溶液。
[0037]为了使得该絮状的铕多配位复合物能有效的结晶,在一实施例中,该结晶在处理是将生成有絮状物的溶液直接在暗室中过夜,使得絮状物充分结晶。待充分结晶后,进行过滤,干燥处理即可得到结晶的铕多配位复合物。
[0038]上述步骤S02中,在交联剂作用下,铕多配位复合物单体发生分子印迹聚合反应,生成高分子铕荧光探针。为了提高分子印迹聚合反应的反应速率和提高高分子铕荧光探针的得率,在一实施例中,该分子印迹聚合反应的方法如下:
[0039]步骤S021.将上述步骤S012制备的铕多配位复合物与苯乙烯、二乙烯基苯交联剂混合溶解后,加入引发剂混合,得到半透明状溶液;
[0040]步骤S022.在无氧的环境中,将所述半透明状溶液于50-70°C下超声反应2?8小时,生成高分子铕荧光探针。
[0041]其中,步骤S021中,在一实施例中,该铕多配位复合物、苯乙烯、二乙烯基苯交联剂三者的摩尔比为1:(90-95): (1-4),在一具体实施例中,该铕多配位复合物、苯乙烯、二乙烯基苯交联剂三者的摩尔比为1:95:4。其中,苯乙烯在该反应过程中作为聚合溶剂,第一是用来溶解化合物,另外能够参与聚合形成粘稠液。
[0042]在另一实施例中,引发剂是引发相关单体发生聚合反应,以生成高分子铕荧光探针。针对单体,在一实施例中,该引发剂选用偶氮二乙丁腈、过氧化苯甲酰中的一种或两种以任意比例的混合物。另外,该引发剂的添加量可以按照常规引发剂的添加量进行添加。
[0043]该步骤S022中,无氧的环境可以是充满氮气的无氧环境,如向密闭容器中通入氮气,充分排出空气,从而营造一无氧环境。在该无氧环境中,将该步骤SOll配制的半透明状溶液在50-70°C下进行超声聚合反应,从而生成高分子铕荧光探针。经该超声聚合反应反应后的溶液为粘稠液。在一具体实施例中,该聚合反应反应的温度为60°C。
[0044]在该聚合反应中,含有铕荧光探针的铕多配位复合物单体进行聚合反应,生成设计具有特异识别性的高分子铕焚光探针聚合物(Molecular Imprinting Polymers, MIPs)。由于该聚合物具有许多固定形状和大小的孔穴,孔穴内通常带有确定排列的结合位点,对印迹分子的立体结构具有记忆和识别功能。而含有的铕荧光探针具有Stokes位移大,发射线状光谱,荧光寿命长,荧光稳定,受外界影响小等优点,因此可以较好的消除复杂基质中的背景干扰。
[0045]因此,上述高分子铕荧光探针的制备方法将高度灵敏的铕荧光检测与分子印迹相结合,制备出的高分子铕荧光探针能够利用分子印迹技术的识别特性,完成对磺草酮的特异识别,其后将分析结果以荧光的形式表达出来,从而使得该高分子铕荧光探针对磺草酮具有抗干扰、高选择性、高灵敏度特点,同时Stokes位移大,发射线状光谱,荧光寿命长,荧光稳定。另外,其制备方法简单,制备的高分子铕荧光探针性能稳定。
[0046]相应地,在上文提供的尚分子箱焚光探针的制备方法的基础上,本发明实施例还提供了一种由上文高分子铕荧光探针的制备方法制备获得的高分子铕荧光探针。因此,该高分子铕荧光探针将高度灵敏的荧光检测与分子印迹相结合的产物,探针具有对磺草酮特异识别性和高选择性,且荧光寿命长,荧光稳定。
[0047]相应地,在上文高分子铕荧光探针的基础上,本发明实施例还提供了一种磺草酮农药检测试剂盒。该磺草酮农药检测试剂盒包括聚合物酶联板和结合在所述聚合物酶联板上的高分子铕荧光探针。
[0048]其中,该高分子铕荧光探针为上文所述的高分子铕荧光探针,不同之处在于,在试剂盒中,该高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱。该高分子铕荧光探针制备方法敬请参上上文关于高分子铕荧光探针制备方法,为了节约篇幅,在此不再赘述。
[0049]用于高分子铕荧光探针的载体聚合物酶联板可以选用试剂盒常用的聚合物酶联板,如在一具体实施例中,该聚合物酶联板选用96孔聚苯乙烯酶联板。
[0050]为了使得该被洗脱磺草酮模板分子的高分子铕荧光探针能够有效牢固的结合在载体聚合物酶联板上,在一实施例中,该所述高分子铕荧光探针结合在所述聚合物酶联板上的方法如下:
[0051]步骤a:将含有所述高分子铕荧光探针的溶液涂布在所述聚合物酶联板上后,经紫外光老化处理。
[0052]步骤b:将经老化处理的所述聚合物酶联板通过溶剂浸泡溶胀处理,采用浓度为
0.1-1.0%的甲酸洗涤处理,洗脱除去高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子。
[0053]其中,步骤a中,高分子铕荧光探针的溶液可以直接是由步骤S022中超声聚合反应后的粘稠液。让然也可以是另外配制的其他适于涂布的含有高分子铕荧光探针的溶液。
[0054]为了使得该磺草酮农药检测试剂盒具有合适的检出限和较高的灵敏度,在一实施例中,上述高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的单位面积含量为0.5?2.0mg/cm2。
[0055]步骤b中,在一实施例中,对聚合物酶联板进行浸泡溶胀处理方法为:将经老化处理后的聚合物酶联板置于溶剂中进行震荡,使得高分子铕荧光探针充分溶胀。在一具体实施例中,当聚合物酶联板为聚苯乙烯酶联板时,将该聚苯乙烯酶联板置于甲醇溶液中进行震荡溶胀12小时。在进一步具体实施例中,该甲醇溶液的浓度可以是50% v/v?
[0056]对溶胀处理后的聚合物酶联板洗涤处理过程中,高分子铕荧光探针中的磺草酮模板分子被洗脱,从而在高分子铕荧光探针留下磺草酮的结合位点。为了有效除去该磺草酮模板分子,在一实施例中,该甲酸的体积浓度控制为0.1-1.0%,在一具体实施例中,该甲酸的体积浓度为1.0%。
[0057]上述磺草酮农药检测试剂盒由于含有上述的且磺草酮模板分子被洗脱的高分子铕荧光探针,因此,该磺草酮农药检测试剂盒对磺草酮农药具有特异性,高选择性和抗干扰性,能够实现快速的检测磺草酮农药,且灵敏度高,跟现有检测磺草酮方法相比,成本显著降低。另外,通过对被洗脱的高分子铕荧光探针在聚合物酶联板上的结合量的控制,使得本磺草酮农药检测试剂盒对磺草酮的检出限达到20ppb (20 μ g/L)。
[0058]相应地,在上文提供磺草酮农药检测试剂盒的基础上,本发明实施例还提供了一种磺草酮农药的检测方法,包括如下步骤:
[0059]步骤S03.获取含有待测样品的溶液;
[0060]步骤S04.将上文所述的磺草酮农药检测试剂盒中含有高分子铕荧光探针的聚合物酶联板进行浸泡处理;
[0061]步骤S05.将所述含有待测样品的溶液加入经浸泡处理后的聚合物酶联板孔中进行震荡反应10-30min,然后对所述聚合物酶联板进行洗涤;
[0062]步骤S06.将经洗涤处理后的所述聚合物酶联板置于荧光酶标仪测定相应孔的荧光强度,从而得出磺草酮的量。
[0063]具体地,上述步骤S03中,获取含有待测样品的溶液的方法是按照常规对样品进行前处理后
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