atttacaagacaactcgtgtaaatcaaccatctatagaagggacaactacatttgat 420
[0101]cagtattggagtgttagaacatcaaaaagaacaagtggaactgtcactgtgactgatcat 480
[0102]tttaaagcatgggctgcgaagggtctgaacttgggtacaattgaccagattacactctgt 540
[0103]gtagaaggttaccagagcagtggttcagctaatataacacaaaatactttctctataaca 600
[0104]aatgattcaactggtggtggctctactacaccaacaactacgaaggttgaatgcgaaaat 660
[0105]atgtcactgagcggtcagtatgcttcaaagatttcttcgccattctcaggagtagcatta 720
[0106]tatgcaaacaatgataaagcttactatactcaatactttgctaattcaacacatactttt 780
[0107]tcactccgcggttgttcaagtaattccaacagggcagcggttgacttgcgaattggtggt 840
[0108]acaaaggttggaacgttctactttacagggacaacacctacggtgcagacgttgagcaat 900
[0109]atttcacatccaacgggtaatcaaacaattgaactagtagtaacatcggataatggtaca 960
[0110]tgggatgtataccttgattatttggagattaagtaa996
[0111]〈210〉2
[0112]〈211〉358
[0113]〈212〉PRT
[0114]〈213〉热解纤维素菌(Caldicellulosiruptorkronotskyensis)
[0115]〈400〉2
[0116]Met Arg Phe Lys Lys Phe Leu Lys Val Leu lie Ala Val Leu Met Cys
[0117]151015
[0118]Phe Val Leu Gly Asn Pro Phe Tyr Ala Gln Ala Ala lie Thr Leu Thr
[0119]202530
[0120]Ser Asn Ala Ser Gly Thr Tyr Asp Gly Tyr Tyr Tyr GluLeu Trp Lys
[0121]354045
[0122]Asp Ser Gly Asn Thr Thr Met Thr Val Asp Thr Gly Gly Arg Phe Ser
[0123]505560
[0124]Cys Gln Trp Ser Asn lie Asn Asn Ala Leu Phe Arg Thr Gly Lys Lys
[0125]65707580
[0126]Phe Ser Thr Ala Trp Asn Gln Leu Gly Thr Val Lys lie Thr Tyr Ser
[0127]859095
[0128]Ala Thr Tyr Asn Pro Asn Gly Asn Ser Tyr Leu Cys lie Tyr Gly Trp
[0129]100105110
[0130]Ser Arg Asn Pro Leu Val Glu Phe Tyr lie Val Glu Ser Trp Gly Thr
[0131]115120125
[0132]Trp Arg Pro Pro Gly Ala Thr Ser Leu Gly Thr Val Thr lie Asp Gly
[0133]130135140
[0134]Gly Thr Tyr Asp lie Tyr Lys Thr Thr Arg Val Asn Gln Pro Ser lie
[0135]145150155160
[0136]Glu Gly Thr Thr Thr Phe Asp Gln Tyr Trp Ser Val Arg Thr Ser Lys
[0137]165170175
[0138]Arg Thr Ser Gly Thr Val Thr Val Thr Asp His Phe Lys Ala Trp Ala
[0139]180185190
[0140]Ala Lys Gly Leu Asn Leu Gly Thr lie Asp Gln lie Thr Leu Cys Val
[0141]195200205
[0142]Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ala Asn lie Thr Gln Asn Thr Phe
[0143]210215220
[0144]Ser lie Thr Asn Asp Ser Thr Gly Gly Gly Ser Thr Thr Pro Thr Thr
[0145]225230235240
[0146]Thr Lys Val Glu Cys Glu Asn Met Ser Leu Ser Gly Gln Tyr Ala Ser
[0147]245250255
[0148]Lys lie Ser Ser Pro Phe Ser Gly Val Ala Leu Tyr Ala Asn Asn Asp
[0149]260265270
[0150]Lys Ala Tyr Tyr Thr Gln Tyr Phe Ala Asn Ser Thr His Thr Phe Ser
[0151]275280285
[0152]Leu Arg Gly Cys Ser Ser Asn Ser Asn Arg Ala Ala Val Asp Leu Arg
[0153]290295300
[0154]lie Gly Gly Thr Lys Val Gly Thr Phe Tyr Phe Thr Gly Thr Thr Pro
[0155]305310315320
[0156]Thr Val Gln Thr Leu Ser Asn lie Ser His Pro Thr Gly Asn Gln Thr
[0157]325330335
[0158]lie Glu Leu Val Val Thr Ser Asp Asn Gly Thr Trp Asp Val Tyr Leu
[0159]340345350
[0160]Asp Tyr Leu Glu lie Lys
[0161]355
【主权项】
1.一种耐高温木聚糖内切酶基因xynllA，其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；来源于热解纤维素果汁杆菌(Caldicellulosiruptor kronotskyensis)。2.权利要求1所述的耐高温木聚糖内切酶基因表达的耐高温木聚糖酶XynllA，其特征在于:其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。3.权利要求2所述的耐高温木聚糖酶Xynl1A，其氨基酸序列SEQ ID N0:2中的氨基酸经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失及添加形成的具有木聚糖酶活性的衍生蛋白质。4.一种用于扩增如权利要求1所述的耐高温木聚糖内切酶基因xynllA的方法，其特征在于:所使用引物对为:xynllA-F:5，-GCC GCG CGG CAG CAT GGC AAT AAC CCT CAC AT-3，xynllA-R:5’-GCG GCC GCA AGC GTT TAC TTA ATC TCC AAA TAA TCA AG-3’ 。5.一种重组体系，其特征在于:在所述的重组体系有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述重组体系包括重组质粒和重组菌。6.一种制备耐高温木聚糖内切酶XynllA的方法，其特征在于: (1)用权利要求5的重组质粒转化宿主细胞，得重组菌株； (2)培养权利要求6.(I)的重组菌株，诱导XynllA表达； (3 )回收和纯化所表达的耐高温木聚糖内切酶Xyn IIA。7.权利要求2所述的高温木聚糖内切酶XynllA在酶解天然木聚糖和木质纤维素原料上的应用，其酶解温度和PH分别为60°C -75°C和5.5-7.0。
【专利摘要】本发明属于生物工程及工业酶制剂领域，涉及了一种耐高温木聚糖内切酶基因xyn11A及其蛋白Xyn11A的表达与应用。耐高温木聚糖内切酶基因xyn11A来源于热解纤维素果汁杆菌（Caldicellulosiruptor kronotskyensis）。Xyn11A具有优良的耐高温性能和较好的PH稳定性，并且在特定的条件下有极高的活性。其最适反应温度为75℃，最适反应PH为6.0。70℃条件保温6h，酶活力仍为100%。室温下置于不同pH的缓冲液（pH4.0-8.5）中,17h内能维持80%以上活性。以不溶性榉木木聚糖为底物，其酶活可达1752.0IU/mg。Xyn11A完全水解木聚糖的最终产物主要为木二糖，以及少量的木糖。耐高温木聚糖内切酶Xyn11A良好的热稳定性和极高的酶活，预示着其广阔的工业应用前景。
【IPC分类】C12P19/14, C12N9/42, C12N15/63, C12N15/56, C12N15/11
【公开号】CN104928306
【申请号】CN201410103426
【发明人】韩业君, 乔玮博, 彭小伟, 米朔甫, 贾晓静
【申请人】中国科学院过程工程研究所
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2014年3月19日