液，用流动相稀释成一系列浓 度，通过HPLC检测其色谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，紫杉醇浓度为横坐标，绘制得到 紫杉醇标准曲线。
[0035] 采用有机溶剂提取法测定HAVES-I包载紫杉醇的药物包封率及载药量。方法如 下：取上述HAVES-I包载紫杉醇清液1.0 mL，用甲醇稀释5倍，快速斡旋5min破坏胶束结构 后，用HPLC法测定并得出紫杉醇的浓度。HAVES-I包载紫杉醇胶束包封率（EE%)和载药量 (DL%)的计算公式分别为如下： 包封率（EE %)=(胶束中的药物量/总投药量）X 100% 载药量(DL %)=(胶束中的药物量/载药胶束总量）X 100% 结果见表1，透明质酸衍生物HAVES-I对紫杉醇（PTX)的包封率和载药量为60. 2%和 3. 0% (5% 的投料），62. 9% 和 6. 3% (10% 的投料）。
[0036] 5.细胞毒性实验 采用四唑蓝比色法（MTT Assay)评价透明质酸衍生物HAVES-2的体外细胞毒性。取 对数生长期的MCF-7细胞和U87-MG细胞，经胰酶消化后，用含10%新生牛血清的1640培 养基调整细胞密度为5X IO3个/mL，接种于96孔培养板（NalgeNunc International， Naperville，IL，USA)，每孔0. 2mL，37°C，5%C02孵箱中培养24小时，待细胞完全贴壁后，加 入不同浓度透明质酸衍生物HAVES-I溶液，以未处理的空白细胞为对照，每孔设3个平行 组。继续培养72h后，每孔加入20 μ L的MTT溶液（浓度为5.0 mg/mL)，于孵箱中继续培 养4 h，弃去上清液，每孔加入200 μ L DMS0,恒温振荡20分钟，用酶标仪测定570 nm处吸 光度，按公式计算细胞存活率：
式中：1%--细胞存活率；Acontrol--空白对照组570nm处的吸光度；Atreat-- 样品组570nm处的吸光度。
[0037] 结果见附图4-1，透明质酸衍生物HAVES-I在lmg/ml高浓度下，对人乳腺癌细胞 (MCF-7)和人脑胶质瘤细胞（U87-MG)共孵育72小时，均未造成细胞超过90%的死亡，说明 其具有优越的生物安全性。
[0038] 实施例2: (1)称取0. 5g维生素 E琥珀酸酯（VES)，0. 45gl-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚 胺盐酸盐（EDC)，0.1 gN-羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS)装入50ml单口烧瓶中，加入25ml二甲 基亚砜（DMS0)，常温下搅拌溶解60min。另称取0. 2g胱胺，用IOmlDMSO溶解，缓慢滴加到 反应液中，常温下搅拌8h以上，得到反应液A。
[0039] 称取 0. 38g 分子量约为 6700(n+m=17)透明质酸钠（HA-Na)，0. 45gl-乙基-(3-二 甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC)，0.1 g珀酰亚胺（NHS)装入100mL单口烧瓶中，加入 60ml水和乙醇混合溶液，常温下搅拌溶解60min，缓慢滴加反应液A，常温下搅拌8h。反应 液在去离子水中透析3-4天除去催化剂及未反应的单体，冷冻干燥得到HAVES-2。
[0040] (f ):以胱胺为连接物的透明质酸维生素 E衍生物（HAVES-2))结构式：
(2)称取0. lgHAVES-2,溶于50ml去离子水中，超声溶解IOmin得到2mg/ml的HAVES-2 胶束水溶液。
[0041] (3) HAVES-2的氢核磁图谱、所形成胶束TEM观察、CMC测定、对紫杉醇的包封绿荷 载药量以及细胞毒性研宄，其结果分别见附图1-6,图中透明质酸衍生物HAVES-2 (f)，同时 出现HA氢核磁图谱（a)中δ =1. 92和VES氢核磁图谱（b)中δ =〇. 98的特征峰，说明VES 成功嫁接到了透明质酸的骨架上。图2-2中可以看出，透明质酸衍生物HAVES-I空白胶束 的微粒形态均为较规则的球形，形态较为均一。图3-2中透明质酸衍生物HAVES-2的CMC 数值为0. 451 g/mL，在水溶液中自发聚集形成胶束，所合成衍生物具有较低的CMC。表2中 透明质酸衍生物HAVES-2对紫杉醇（PTX)的包封率和载药量为90. 7%和4. 54% (5%)，92. 9% 和 9. 3% (10%)。
[0042] 细胞毒性实验结果见附图4-2,透明质酸衍生物HAVES-2即使在lmg/ml高浓度 下，对人乳腺癌细胞(MCF-7)和人脑胶质瘤细胞（U87-MG)共孵育72小时，均未造成细胞超 过90%的死亡，说明其具有优越的生物安全性。
[0043] 实施例3: (1)称取0. 5g维生素 E琥珀酸酯（VES)，0. 45gl-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚 胺盐酸盐（EDC)，0.1 gN-羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS)装入50ml单口烧瓶中，加入25ml二甲 基亚砜（DMSO)，常温下搅拌溶解60min。另称取0. 2g 3-氨基丙醇，用IOmlDMSO溶解，缓慢 滴加到反应液中，常温下搅拌8h以上，得到反应液A。
[0044] 称取 0· 38g 分子量约为 6700(n+m=17)透明质酸钠（HA-Na)，0. 45gl-乙基-(3-二 甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC)，0.1 g 4-二甲氨基吡啶（DMAP)装入100mL单口烧瓶 中，加入60ml水和乙醇混合溶液，常温下搅拌溶解60min，缓慢滴加反应液A，常温下搅拌 8h。反应液在去离子水中透析3-4天除去催化剂及未反应的单体，冷冻干燥得到HAVES-3。
[0045] (f ):以3-氨基丙醇为连接物的透明质酸维生素 E衍生物（HAVES-3)结构式：
(2)称取0. lgHAVES-3,溶于50ml去离子水中，超声溶解IOmin得到2mg/ml的HAVES-3 胶束水溶液。
[0046] 实施例4: (1) 称取0. 5g维生素 E琥珀酸酯（VES)，Iml氯化亚砜装入25ml单口烧瓶中，加入IOml 1^二甲基甲酰胺（01^)，常温下搅拌溶解60!1^11。另称取0.28丫-氨基丁酸，用10111101^0 溶解，缓慢滴加到反应液中，常温下搅拌8h以上，得到反应液A。
[0047] 称取 0. 38g 分子量约为 6700(n+m=17)透明质酸钠（HA-Na)，0. 45gl-乙基-(3-二 甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC)，0.1 g 4-二甲氨基吡啶（DMAP)装入100mL单口烧瓶 中，加入60ml水和乙醇混合溶液，常温下搅拌溶解60min，缓慢滴加反应液A，常温下搅拌 8h。反应液在去离子水中透析3-4天除去催化剂及未反应的单体，冷冻干燥得到HAVES-4。
[0048] (f ):以γ -氨基丁酸为连接物的透明质酸维生素 E衍生物（HAVES-4)结构：
(2) 称取0. lgHAVES-4,溶于50ml去离子水中，超声溶解IOmin得到2mg/ml的HAVES-4 胶束水溶液。
[0049] 实施例5: 称取0. 5g维生素 E琥珀酸酯（VES)，0. 45gl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐 酸盐（EDC)，0.1 gN-羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS)装入50ml单口烧瓶中，加入25ml二甲基亚 砜（DMSO)，常温下搅拌溶解60min。另称取0. 2g已二胺（或胱胺)，用IOmlDMSO溶解，缓慢 滴加到反应液中，常温下搅拌8h以上，得到反应液A。
[0050] 称取0. 38g分子量约为1000 (n+m=2)透明质酸钠（HA-Na)，0. 45gl-乙基-(3-二 甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC)，0.1 g珀酰亚胺（NHS)装入10