接受组合物可改 变Src活性。
[0180] 因此，本发明的另一个实施方式涉及在有需要的患者中改变Src活性的方法，其 中所述方法包括向患者施用草药制备物或其药物可接受组合物。
[0181] 另一个实施方式涉及在有需要的患者中抑制Src的活性的方法，其中所述方法包 括向患者施用草药制备物或其药物可接受组合物。
[0182] 在特定实施方式中，草药制备物包含植物和/或植物提取物的混合物。这种草药 制备物提供了附加的及协同的效应，其中每种植物和/或植物提取物中不同激动剂或拮抗 剂的性质提供了有益的效应，而不会通过引起这些植物和/或植物提取物中其他成分的剂 量过大而不利地影响患者。
[0183] 通过评估各草药制备物的受体Na/K-ATPase/Src复合物的激动剂/拮抗剂的有效 量，而达到了有疗效且具有平衡性的处理方法。具体而言，本文描述的本方法提供了用于确 定具体植物、植物提取物或草药制备物中激动剂/拮抗剂的量的精确方法。因此，包含有受 体Na/K-ATPase/Src复合物的激动剂或拮抗剂的一种或读者原料药材的草药药物制备物 以所需的有效量存在。
[0184] 在特定非限制性实例中，有效量在约0. 1至约IOnM的范围内。在其他实施方式中， 有效量以不超过IOnM的量施用。在其他实施方式中，有效量以不超过InM的量施用。在其 他实施方式中，施用有效量至少约5小时。在其他实施方式中，有效量以不超过InM的量施 用。在其他实施方式中，施用有效量至少约5小时。
[0185] 所述草药制备物及其药物可接受组合物可用于处理已有的症状（即，减少这些症 状的严重度、强度和/或病程）。在这些情况下，在症状已经开始后，将配方或其组合物施用 于个体。
[0186] 备选地或此外地，所述草药制备物可用于防止或延缓之前曾有过某些症状的个体 中症状的发生，或减少后续发展的症状的严重度、强度或病程。
[0187] 也可在障碍发展之前施用草药制备物及其组合物。
[0188] 在本发明的其他实施方式中，可将所述草药制备物与一种或多种其他的治疗剂组 合施用。例如，所述草药制备物可与一种或多种强心类固醇组合施用。
[0189] 在特定实施方式中，所述草药制备物是在药物可接受组合物内进行施用，由此形 成了单一剂型。在其他实施方式中，所述草药制备物作为独立的剂型与一种或多种其他药 物可接受组合物同时施用。
[0190] 还要清楚的是，所述草药制备物和药物可接受组合物可在组合疗法中使用，即，草 药制备物及其药物可接受组合物可在一种或多种其他期望的治疗剂或医疗步骤进行的同 时施用，或在其之前或之后施用。
[0191] 在联合治疗方案中要采用的疗法（治疗剂或步骤）的具体组合要考虑期望的治疗 剂和/或步骤之间的兼容性以及要达到的期望疗效。还要清楚的是所采用的疗法可对相同 的障碍达到期望效应（例如草药制备物可与另一种用于处理相同障碍的试剂同时施用）或 是会起到不同的效应（例如，控制任何副作用的发生）。
[0192] 如本文所使用的，通常进行施用以处理或预防具体疾病或病况，或减轻其严重度 的其他治疗剂被称作"适合用于进行处理的疾病或病况"。
[0193] 可将草药制备物与一种或多种其他治疗性处理方式组合施用于受试者。例如，强 心类固醇的施用是一项已建立并得到认可的用于心脏肥大、组织硬化、充血性心脏衰竭、癌 症和伤口或皮肤损伤的处理方法。因此，可取地，所述草药制备物可与标准的或减量的处理 方法组合施用，可以是口服或全身性施用。
[0194] 在另一方面，本文描述了草药药物制备物，其含有有效量的一种或多种原料药 材，选自：党参、血参根、丹参（radix salvia miltiorrhizae)、当归、西当归（angelica sinensis)、黄苗和黄耆（astragalus)，其中在每种原料药材中发现的受体Na/K-ATPase/ Src复合物的激动剂或拮抗剂以约0.1 nM至约IOnM范围内的有效量存在。
[0195] 在所述草药药物制备物的特定实施方式中，所述激动剂包括乌本苷、地高辛、海蟾 蜍毒素（MBG)、油酸、二十二碳六烯酸（DHA)、谷胱甘肽二硫化物（GSSG)和异硫氰酸烯丙酯 中的一种或多种。
[0196] 在所述草药药物制备物的特定实施方式中，拮抗剂包含3, 4, 5-三羟基咕吨酮 (MB5)、3, 4, 5, 6-四羟基咕吨酮（MB7)、姜黄素、双脱甲氧基姜黄素、丹参酮I、丹参素钠、黄 芪甲苷IV、阿魏酸和丹参酮IIA中的一种或多种。
[0197] 在所述草药药物制备物的特定实施方式中，拮抗剂包括丹参酮I、丹参素钠、黄芪 甲苷IV和阿魏酸中的一种或多种。
[0198] 在特定实施方式中，所述草药药物制备物用于处理与一种或多种以下情况相关的 障碍：心脏肥大、组织纤维化、充血性心脏衰竭、癌症、伤口或皮肤损伤。
[0199] 施用模式
[0200] 在特定实施方式中，所述草药组合物被配制成用于口服施用。
[0201] 草药制备物可以作为"茶"的形式施用于患者，无需和其他任何物质组合，或无需 进行其他操作；或者所述草药制备物作为药物组合物施用，其中提取物与合适的载体或辅 料相混合。施用治疗有效量的所述提取物以处理显示目的障碍症状的患者。治疗有效量指 提取物的量能使得患者症状缓解或生存期延长。
[0202] 虽然本发明已经参照多种优选的实施方式得到描述，但本领域技术人员应当理 解，在不偏离本发明核心范围的情况下可以对其做出多种改变，且可以用等同物替换其中 的元素。此外，在不偏离本发明核心范围的情况下，可以对本发明所教导的内容做出很多修 饰以适应某些特定情况或材料的需要。
[0203] 因此，旨在本发明不受本文公开的【具体实施方式】（其是为实施本发明而包含在内 的）的限制，而是本发明包括在权利要求范围之内的所有实施方式。
[0204] 本文使用的用于阐明本发明或提供关于本发明的实践的其他详情的出版物和其 他材料都通过引用并入本文，为方便起见，在以下参考文献中提供。
[0205] 对本文提到的任何文档的引用不旨在承认前述任何文献一定是相关的在先技术。 所有对于日期的陈述或对于这些文档内容的表述皆是基于申请人可用的信息，并不包含任 何对这些文档的日期或内容正确性的认可。
【主权项】
1. 鉴定改变Src活性的化合物的方法，所述方法包括： (i) 纯化aINa/K-ATPase以获得Na/K-ATPase，其显示了高于 800ymolPi/mg蛋白质 A的特异活性； (ii) 将步骤⑴中纯化的Na/K-ATPase与Src混合，以形成Src活性受抑制的受体Na/ K-ATPase/Src复合物； (iii) 将步骤（ii)中的受体Na/K-ATPase/Src复合物暴露于化合物，其中该化合物的 结合将受抑制的Src从受体Na/K-ATPase/Src复合物释放，导致Src活性的增加；以及 (iv) 测量Src活性的增加，其中增加的Src活性指示该化合物改变了Src活性。2. 权利要求1的方法，其中测量的步骤包括确定与Src活性的对照水平相比，是否有 Src活性的增强水平， 其中Src活性水平的增加指示该化合物为激动剂，且， 其中相对于对照水平，Src活性水平的降低指示该化合物为拮抗剂。3. 权利要求2的方法，其中受体Na/K-ATPase/Src复合物的激动剂化合物包含至少一 种以下物质：〇4. 权利要求3的方法，其中受体Na/K-ATPase/Src复合物的激动剂包含乌本苷、地高 辛、海蟾蜍毒素（MBG)、油酸、二十二碳六烯酸（DHA)、谷胱甘肽二硫化物（GSSG)和异硫氰酸 烯丙酯中的至少两种。5. 权利要求2的方法，其中受体Na/K-ATPase/Src复合物的拮抗剂化合物包含至少一 种以下物质：O6. 权利要求5的方法，其中受体Na/K-ATPase/Src复合物的拮抗剂包含3, 4, 5-三羟基 咕吨酮（MB5)、3, 4, 5, 6-四羟基咕吨酮（MB7)、姜黄素、双脱甲氧基姜黄素、丹参酮I、丹参素 钠、黄芪甲苷IV、阿魏酸和丹参酮IIA中的两种或更多种。7. 权利要求2的方法，其中受体Na/K-ATPase/Src复合物的拮抗剂包括以下物质的组 合：丹参酮I、丹参素钠、黄芪甲苷IV和阿魏酸。8. 权利要求2的方法，其中受体Na/K-ATPase/Src复合物的激动剂包含强心类固醇。9. 权利要求2的方法，其中受体Na/K-ATPase/Src复合物的一种激动剂和/或多种激 动剂可见于一种或多种以下物质：党参、血参根、丹参（radixsalviamiltiorrhizae)、当 归、西当归（angelicasinensis)、黄苗和黄耆（astragalus) 〇10. 权利要求1的方法，其中化合物用于处理与心脏肥大、组织硬化、充血性心脏衰竭、 癌症、伤口或皮肤损伤中一项或多项相关的障碍。11. 权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9和10中任何一项的方法，其中的化合物包含化合物 的混合物。12. 权利要求11的方法，其中所述基于细胞的测定法包括来自LLC-PKl的a1敲减的 PY-17细胞、包含Pll的第一种对照细胞以及包含AAC-19的第二种对照细胞。13. 权利要求12的方法，其中第一种对照细胞Pll包含用空载体转染的LLC-PK1，并且 其中第二种对照细胞AAC-19包含大鼠的a1-挽救的PY-17细胞。14. 权利要求11的方法，其中基于细胞的测定法包含一对细胞系，LL-A416P-4和 LL-A420P-20,其中A420突变为P致使所表达的Na/K-ATPase不能结合并形成功能性受体 复合物在A416P-挽救的细胞中作为激活的Src，而在A420P突变体-挽救的细胞中并非如 此。15. 权利要求11的方法，其中基于细胞的测定法包括细胞系（LY-I279A-3、 LY-F286A-19)，其中所表达的I279A或F286A突变体Na/K-ATPase不能进行构象转变。16. 权利要求15的方法，其中I279A和F286A突变体分别不能进行El到E2和E2到El的构象转变。17. 草药药物制备物，其包含有效量的一种或多种原始药材，其选自：党参、血参根、 丹参（radixsalviamiltiorrhizae)、当归、西当归(angelicasinensis)、黄苗和黄耆 (astragalus)， 其中每种原始药材中发现的受体Na/K-ATPase/Src复合物的激动剂或拮抗剂以约 0.InM至约IOnM的有效量存在。18. 权利要求17的制备物，其中激动剂包含乌本苷、地高辛、海蟾蜍毒素（MBG)、油酸、 二十二碳六烯酸（DHA)、谷胱甘肽二硫化物（GSSG)和异硫氰酸烯丙酯中的一种或多种。19. 权利要求17的制备物，其中拮抗剂包含3, 4, 5-三羟基咕吨酮（MB5)、3, 4, 5, 6-四 羟基咕吨酮（MB7)、姜黄素、双脱甲氧基姜黄素、丹参酮I、丹参素钠、黄芪甲苷IV、阿魏酸和 丹参酮IIA中的一种或多种。20. 权利要求17的制备物，其中拮抗剂包含丹参酮I、丹参素钠、黄芪甲苷IV和阿魏酸 中的一种或多种。21. 草药药物制备物，其用于处理与心脏肥大、组织硬化、充血性心脏衰竭、癌症、伤口 或皮肤损伤中一项或多项相关的障碍，且包含权利要求17的草药制备物。22. 权利要求21的草药药物制备物，其中草药组合物被配制成用于口服施用。
【专利摘要】本文描述了测定法及基于互补细胞培养的测试，其用于确定Na/K-ATPase/Src复合物的激动剂或拮抗剂的用途，以及用其进行处理的方法。
【IPC分类】A61P35/00, C12Q1/48, A61K36/481, A61K36/232, A61K36/344, A61P9/04, A61P9/00, A61K36/537, A61P17/02
【公开号】CN104968799
【申请号】CN201380031332
【发明人】Z-J·谢, J·I·夏皮罗, F·赖
【申请人】托莱多大学
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2013年5月8日
【公告号】US20150233925, WO2013169931A2, WO2013169931A3