分离III得到的第20-35流份合并，回收至溶剂得到Vicenin-2粗品。最后用凝胶色谱分离，即色谱分离IV，用纯甲醇冲柱，分份收集，每5体积份收集一份，共收集20-30个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份；色谱分离IV得到的第12-22流份合并，回收溶剂得到黄色的粉末，利用电喷雾电离质谱(ES1-MS)和光谱法(H1-NMR和C13-NMR)对得到黄色粉末进行鉴定，鉴定黄色粉末为Vicenin-2，纯度为92%。
[0048]实施例3
[0049]选用豆科植物广金钱草45000-50000重量份，切成5_10cm小段，饮用水清洗掉泥沙，沥干，投料。80%乙醇回流提取两次，第一次12倍量2h，第二次10倍量1.5h ;合并两次醇提液，回收乙醇至无醇味。提取浓缩液加水稀释至药材重量的5倍体积；200目滤布过滤；得上柱液；将事先用95%乙醇处理过的净品树脂装柱，纯化水替换；将上柱液用栗打入柱中，吸附，控制流速0.5-1倍BV/h，吸附完毕后，静置2h ;用纯化水冲洗，洗脱流速3-4BV/h，洗脱量1BV ;再用60%乙醇洗脱，洗脱流速2-3BV/h，洗脱量5BV ;60%洗脱液合并，打入浓缩罐，回收乙醇至无醇味，至真空干燥箱中50-70°C干燥，得广金原料药300-400重量份。
[0050]将广金原料药300-400重量份用AB-8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I，乙醇-水混合溶剂20:80, 30:70, 40:60, 60:40梯度洗脱，每个梯度冲到无颜色即可，合并各流份得20%，30%，40%，60%，共四个部位；色谱I得到的30%部位用ODS反相中压色谱分离，SP色谱分离II，用乙醇-水，条件为12%等度30min，12-30%梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每100-150体积份收集一份，共收集40-50个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份；色谱分离II得到的36-45流份合并，进一步用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离III，用乙醇-水，条件为14%等度30min，14-20%梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每100-150体积份收集一份，共收集35-45个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份；色谱分离III得到的第20-30流份合并，回收至溶剂得到Vicenin-2粗品。最后用凝胶色谱分离，即色谱分离IV，用纯甲醇冲柱，分份收集，每5体积份收集一份，共收集20-30个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份；色谱分离IV得到的第10-20流份合并，回收溶剂得到黄色的粉末，利用电喷雾电离质谱(ES1-MS)和光谱法(H1-NMR和C13-NMR)对得到黄色粉末进行鉴定，鉴定黄色粉末为Vicenin-2，纯度为90%。
[0051]实施例2和3的工艺条件生产出的黄色粉末Vicenin-2，纯度显著低于实施例1分离提取的Vicenin-2。
[0052]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0053]尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1.一种提取分离Vicenin-2的方法，其特征在于，包括以下步骤: 利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物； 利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其中包括， 利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一分离部分， 利用第二醇体系对所述第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分， 利用第三醇体系对所述第二分离部分进行第三色谱分离，以获得所述Vicenin-2。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物，包括: 利用浓度50-95%的乙醇对所述广金钱草进行两次回流提取，合并两次回流提取所得的提取液，获得合并提取液， 除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和离子，以及任选的，进行干燥，以获得所述提取物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述两次回流提取，其中 一次的乙醇和广金钱草的重量比为12:1，回流提取的时间为1.5h-3h，任选的为2h， 另一次的乙醇和广金钱草的重量比为10:1，回流提取的时间为lh-2h，任选的为1.5h。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一醇体系为乙醇-水体系，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为30-35 %， 优选的，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为30%， 所述第一色谱为大孔树脂。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二醇体系为乙醇-水体系， 所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为8-30 %， 所述第二色谱为反向色谱。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反向色谱为反向中压色谱， 任选的，所述反向中压色谱为C18柱，其柱压为l-10bar，洗脱流速为5?30ml/min。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述利用第二醇体系对第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分，包括: 利用乙醇浓度为a的乙醇-水体系对所述第一分离部分进行等度洗脱25-40min，接着换用乙醇浓度为[a，b]的乙醇-水体系对所述第一分离部分进行梯度洗脱180-220min，收集以获得所述第二分离部分，其中， a的取值范围为8-14%，b的取值范围为20-30%。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述利用第二醇体系对第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分，包括: 利用乙醇浓度为c的乙醇-水体系对所述第一分离部分进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[c，d]的乙醇-水体系对所述第一分离部分进行梯度洗脱200min，收集获得初级第二分离部分， 利用乙醇浓度为e的乙醇-水体系对所述初级第二分离部分进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[e，f]的乙醇-水体系对所述初级第二分离部分进行梯度洗脱200min，收集获得所述第二分离部分，其中， c和e的取值范围为8-14%，d和f的取值范围为20-30%，e>c，f>d。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第三醇体系为纯甲醇，所述第三色谱为凝胶色谱。10.一种提取分离Vicenin-2的系统，其特征在于，包括: 回流提取装置，用以利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物； 色谱分离装置，用于利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其包括， 第一色谱分离单元，与所述回流提取装置相连，用于利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一分离部分， 第二色谱分离单元，与所述第一色谱分离单元相连，用于利用第二醇体系对所述第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分， 第三色谱分离单元，与所述第二色谱分离单元相连，用于利用第三醇体系对所述第二分离部分进行第三色谱分离，以获得所述Vicenin-2。
【专利摘要】本发明提供了一种提取分离Vicenin-2的方法，该方法包括以下步骤：利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；利用醇体系对提取物进行多级色谱分离，其中包括，利用第一醇体系对提取物进行第一色谱分离，获得第一分离部分，利用第二醇体系对第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分，利用第三醇体系对第二分离部分进行第三色谱分离，以获得所述Vicenin-2。本发明还提供一种实施上述方法的系统。利用本发明的方法和/或系统从广金钱草中分离提取Vicenin-2，工艺操作简单，生产时间短，产品收率高，纯度高，能够获得纯度达到98％以上的Vicenin-2。
【IPC分类】C07D311/40, C07D311/30
【公开号】CN105001190
【申请号】CN201510347362
【发明人】王学海, 李莉娥, 许勇, 杨仲文, 冯芸, 杨婷, 余通, 尹海龙, 黄璐, 曹儒宾, 谢长
【申请人】武汉光谷人福生物医药有限公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年6月19日