液 共孵育的方式装载到exosome内部。
[0026] 进一步，所述抗癌药物选自阿霉素、阿司匹林、替莫唑胺、紫杉醇、柔红霉素、秋水 仙碱、长春新碱；负载有上述药物的递送组合物用于治疗与靶向肽相配合的组织疾病。
[0027] 进一步，装载有抗癌药物的所述载体部分还被装载有分子探针。
[0028] 进一步，所述分子探针为带焚光标记的分子信标、核酸分子或量子点，并优选为 PKH67标记。
[0029] 在一些技术方案中，所述载体部分被装载有外源遗传物质，所述载体优选为 exosome，即该递送组合物为外源遗传物质的递送组合物，该外源遗传物质可通过电击转化 法或利用阳离子脂质体转染剂装载到exosome内部。
[0030] 进一步，所述外源遗传物质选自外源质粒DNA、siRNA或反义寡核苷酸药物，并优 选为反义寡核苷酸药物。
[0031] 进一步，装载有外源遗传物质的所述载体部分还被装载有分子探针。
[0032] 进一步，所述分子探针为带焚光标记的分子信标、核酸分子或量子点，并优选为 PKH67标记。
[0033] 在一些技术方案中，所述载体部分仅被装载有分子探针。
[0034] 进一步，所述分子探针为带焚光标记的分子信标、核酸分子或量子点，并优选为 PKH67标记。
[0035] 当上述小肽用以连接载体部分和具有促进免疫功能的短肽时，即由该小肽连接形 成了一种具有倶进免疫功能的组合物。
[0036] 进一步，所述小肽的筛选方法为包括但不限于以下三种，第一种方法为直接以载 体为底物，进行噬菌体肽库的筛选，所得小肽通过与载体共孵育的方式连接到载体表面蛋 白上；第二种方法为体外重组跨膜蛋白，并以此为底物进行噬菌体肽库筛选，所得小肽通过 与载体共孵育的方式连接到载体表面跨膜蛋白上；第三种方法为体外重组跨膜蛋白loop 区，并以此为底物进行噬菌体肽库筛选，所得小肽通过与载体共孵育的方式连接到载体表 面跨膜蛋白的loop区上；并优选第三种方法。
[0037] 进一步，所述载体为生物纳米材料或非生物纳米材料。
[0038] 进一步，所述生物纳米材料选自细胞或纳米粒。
[0039] 进一步，所述纳米粒选自脂质体、囊泡或exosome，并优选为exosome。
[0040] 进一步，所述exosome具有促进免疫或促进免疫系统的活性。
[0041] 进一步，所述exosome具有以下一种或多种活性：（i)招募DC细胞（树突状细胞）； (ii)激活DC细胞；（iii)激活免疫系统。
[0042]进一步，所述跨膜蛋白选自CD63、CD81、CD82、CD9、Lamp-1、Lamp-2、CD13、CD86、 阀蛋白、突触融合蛋白-3、⑶2、⑶36、⑶40、⑶40L、⑶41a、⑶44、⑶45、ICAM-1、整联蛋白 a4、LiCAM、LFA-l、Mac-la和 0、Vti-lA和B、CD3e和G、CD18、CD37、CD53、CXCR4、FcR、 GluR2/3、HLA-DM(MHCII)、免疫球蛋白、MHC-I或MHC-II成分、TCR0 或四旋蛋白。
[0043] 进一步，所述小肽的筛选方法为，体外重组exosome表面⑶63的loop区，重组的 该loop区的氨基酸序列为SEQIDN0:41，以该重组的loop区为底物进行噬菌体肽库筛选， 所得小肽通过与exosome共孵育的方式连接到exosome表面⑶63的loop区上。
[0044] 进一步，筛选所得小肽的氨基酸序列包括与SEQIDN0:2或SEQIDN0:4或SEQID NO:6 或SEQIDNO:8 或SEQIDNO: 10 或SEQIDNO: 12 或SEQIDNO: 14 或SEQIDNO: 16 或SEQIDNO:18 或SEQIDNO:20 或SEQIDNO:22 或SEQIDNO:24 或SEQIDNO:26 或 SEQIDNO: 28 或SEQIDNO: 30 或SEQIDNO: 32 或SEQIDNO: 34 或SEQIDNO: 36 或SEQ IDN0:38或SEQIDN0:40具有至少80%同源性的序列。
[0045] 进一步，筛选所得小肽的氨基酸序列为SEQIDNO:2或SEQIDNO:4或SEQID NO:6 或SEQIDNO:8 或SEQIDNO: 10 或SEQIDNO: 12 或SEQIDNO: 14 或SEQIDNO: 16 或SEQIDNO:18 或SEQIDNO:20 或SEQIDNO:22 或SEQIDNO:24 或SEQIDNO:26 或 SEQIDNO: 28 或SEQIDNO: 30 或SEQIDNO: 32 或SEQIDNO: 34 或SEQIDNO: 36 或SEQ IDNO: 38 或SEQIDNO: 40,并优选为SEQIDNO: 2 或SEQIDNO: 4。
[0046] 进一步，所述具有促进免疫功能的短肽为HMGN1蛋白的N端片段（简称N1ND)。
[0047] 本发明还提供上述所述的具有促进免疫功能的组合物的应用，主要用于制备预防 和/或治疗免疫系统疾病的药物组合物。
[0048] 进一步，所述的药物组合物为疫苗组合物。
[0049] 进一步，所述免疫系统性疾病包括但不限于肿瘤、类风湿性关节炎、红斑狼疮、皮 肤真菌病、膜肾球肾炎、炎性肠病和自身免疫性溶血贫血。
[0050] 综上，本发明提供了一种exosome表面修饰的新方法，即利用exosome膜表面稳定 表达的跨膜蛋白CD63位于exosome膜外的loop区蛋白进行菌体展示文库筛选，获得与 CD63的loop区蛋白特异性结合的小肽，该小肽与exosome表面的CD63的的loop区蛋白 具有特异结合的能力，并能够与靶向肽或具有促进免疫功能的短肽共价结合，即使得靶向 肽或具有促进免疫功能的短肽连接到exosome表面，达到exosome表面修饰的目的；本发明 进行噬菌体肽库筛选的底物为体外重组的⑶63的loop蛋白，较重组整个⑶63蛋白简单方 便，与小肽的连接稳定性强，且使得小肽与CD63结合位点明确，为后续exosome表面修饰提 供便利；上述修饰方法克服了现有的质粒转染等表面修饰方法存在的转染效率低的问题， 为后续研究提供一种高效、简便的修饰手段；另外，利用上述修饰手段合成的递送组合物及 具有促进免疫功能的组合物稳定性好，具有较好的临床应用前景。
【附图说明】
[0051] 图1本发明实施例一及实施例二中小肽与细胞表面CD63蛋白的结合特异性及结 合效率检测。（a)免疫荧光染色显示组氨酸标记的小肽CP05(SEQIDN0:2)、CP07(SEQID NO: 4)分别与细胞膜表面⑶63蛋白的结合情况，并以组氨酸标记的短肽scramble(SEQID N0:46)作对照。分别以⑶63抗体和组氨酸抗体标记，并以不同荧光二抗显示二者相互结合 情况；(b，c)免疫沉淀法检测CP05、CP07分别与CD63蛋白的结合情况。利用免疫沉淀法富 集⑶63蛋白，将组氨酸标记的CP05和CP07分别与⑶63蛋白共孵育，利用组氨酸抗体分别 检测两种小肽与CD63蛋白的结合能力；（d)小肽CP05、CP07与细胞裂解物中CD63蛋白特 异性结合情况检测。利用组氨酸标记的两种短肽与细胞裂解物进行共孵育，利用组氨酸抗 体分别检测两种小肽与CD63蛋白的结合特异性。
[0052] 图2本发明实施例一及实施例二中小肽与exosome表面⑶63蛋白的结合特异性 及结合效率检测。（a)流式细胞术检测小肽CP05、CP07与exosome结合效率。将荧光标记 的两条小肽CP05、CP07分别与exosome共孵育，然后与能够结合蛋白的磁珠（beads)孵育， 利用流式细胞仪检测小肽与exosome的结合效率；(b)荧光共振转移法（FRET)检测CP05、 CP07与exosome结合情况。将罗丹明B标记的两条小肽CP05、CP07分别与cellmaskdeep red标记的exosome共孵育，并以罗丹明B标记的随机短肽Scramble(Scr)为对照，将孵育 产物加入细胞中，利用FRET法检测二者的结合效率；（c)免疫沉淀法检测CP05、CP07分别 与⑶63蛋白的结合效率检测。利用免疫沉淀法富集exosome中的⑶63蛋白，将组氨酸标 记的CP05和CP07分别与⑶63蛋白共孵育，利用组氨酸抗体分别检测两种小肽与exosome 中CD63蛋白的结合能力；（d)小肽CP05、CP07与exosome裂解物中CD63蛋白特异性结合 情况检测。利用组氨酸标记的两种短肽与exosome裂解物进行共孵育，利用组氨酸抗体分 别检测两种小肽与exosome中CD63蛋白的结合特异性。
[0053] 图3本发明实施例一中小肽CP05与exosome结合血清稳定性检测。（a)流式细胞 术检测不同时间点20%FBS血清消化后CP05与exosome结合稳定性。将焚光标记的两条 小肽CP05、CP07分别与exosome共孵育，20%FBS中37°C消化，收集不同时间点的孵育产 物，并将其与磁珠偶联，然后利用流式细胞仪检测小肽与exosome的结合稳定性；(b)FRET 法检测不同时间点20%FBS血清消化后荧光共振转移强度。
[0054]图 4 本发明实施例一中小肽CP05 介导M12(SEQIDN0:43)、RVG(SEQIDN0:42) 和SP94(SEQIDN0:44)三种靶向短肽分别对exosome的靶向修饰效率检测。（a)M12-CP05 修饰后exosome(M12_CP05+EX0)在小鼠体内的组织分布检测。TA:tibialisanterior(腔 骨前肌），Q:quadriceps(股四头肌），G:gastrocnemius(腓肠肌），T:triceps(三头 肌），H:heart