法包括使所述肾癌细胞中的FBXW7基因表达 上调的步骤。该方法是基于发明人体外试验发现FBXW7基因高表达能够抑制肾癌的增殖以 及诱导肾癌细胞凋亡而作出的。FBXW7基因表达上调能够抑制肾癌的增殖或者诱导肾癌细 胞凋亡，FBXW7基因能够用于治疗肾癌的潜在靶点。
[0017] 根据本发明的实施例，利用FBXW7质粒转染所述肾癌细胞，使肾癌细胞中的FBXW7 基因过表达，以实现其中的FBXW7基因表达上调。
[0018] 上述本发明的FBXW7基因/蛋白在肾癌相关检测试剂盒、药物制备中的用途，抑制 肾癌细胞增殖和/或诱导细胞凋亡的方法以及装置，是发明人基于体外试验研究探讨在肾 癌组织中FBXW7蛋白的表达水平和临床病理特点的相关性，研究FBXW7基因过表达对肾癌 细胞的凋亡、增殖、细胞周期的影响，并评估其对肾细胞癌生长和肾细胞癌患者预后的影响 之后而作出的。检测或者定量FBXW7基因/蛋白，能够用于辅助肾癌检测诊断以及预后情 况判断。
【附图说明】
[0019] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施方式的描述中将 变得明显和容易理解，其中：
[0020] 图1是本发明一个实施例中的FBXW7在肾透明细胞癌和癌旁正常组织的表达的示 意图；图1A显示FBXW7在肾癌组织的阴性染色照片（400X)，图1B显示FBXW7在肾癌组织 的弱阳性染色照片（400X)，图1C显示FBXW7在癌旁组织的中等强染色照片（400X)，图 1D显示FBXW7在肾癌旁组织的强染色照片（400X)，图1E显示正常组织和肾透明细胞癌中 FBXW7蛋白表达量的箱式图（n= 105,P〈0. 0001)。
[0021] 图2是本发明一个实施例中的肾透明细胞癌病人的生存分析示意图（n= 81);图 2A显示肾透明细胞癌FBXW7低表达组（n= 22)和高表达组（n= 59)的术后的生存率对比 曲线；图2B显示TWI期病患FBXW7低表达组和高表达组的术后生存率对比曲线；图2C显 示丁匪II期病患FBXW7低表达组和高表达组的术后生存率对比曲线；图2D显示TWIII-IV期病患FBXW7低表达组和高表达组的术后生存率对比曲线。
[0022] 图3是本发明一个实施例中的四种肾癌细胞系ACHN、A498、ACHN和A704中的 FBXW7mRNA和蛋白的表达量示意图；图3A显示四种肾癌细胞系中的FBXW7mRNA的表达量 检测结果，图3B显示westernblot检测四种肾癌细胞系中的FBXW7蛋白表达量结果，图 3C显示转染后的肾癌细胞系A704和ACHN中的FBXW7mRNA的表达量检测结果，图3D显示 westernblot检测转染后的肾癌细胞系A704和ACHN中的FBXW7蛋白的表达量结果。
[0023] 图4是本发明一个实施例中的FBXW7高表达对细胞活性和细胞增殖的影响示意 图；图4A显示FBXW7质粒和空载体转染后的ACHN和A704细胞的细胞活性变化，图4B显示 FBXW7质粒和空载体转染后的ACHN和A704细胞的平板克隆的实验结果。
[0024] 图5显示本发明一个实施例中的流式细胞仪PI法检测FBXW7质粒和空载体转染 后肾癌细胞系的细胞周期和细胞凋亡的变化示意图。
【具体实施方式】
[0025] 以下结合附图和具体实施例对本发明的FBXW7基因和/或FBXW7蛋白在制备肾癌 检测试剂、制备抑制肾癌细胞增殖和/或诱导肾癌细胞凋亡的药物中的用途，抑制肾癌细 胞增殖和/或诱导肾癌细胞凋亡的非治疗目的的方法或装置等进行详细的描述。下面示 例，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。在本发明的描述中，除非另有说明， "多个"的含义是两个或两个以上。
[0026] 除另有交待，以下实施例中涉及的未特别交待技术手段为本领域技术人员所熟知 的常规手段，可以参照《分子克隆实验指南》第三版或者相关产品说明书进行，未特别交待 的试剂、序列、载体和细胞等也均为可商业获得的。未详细描述的各种过程和方法是本领域 中公职的常规方法，所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现 时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
[0027] 实施例一
[0028] 1、样本
[0029] 涉及的105对石蜡样本来自广东省第二人民医院。所有组织学诊断和病理分级由 广东省二院病理学系独立的两位高级病理医生完成。所有病变未经任何手术前化疗和放疗 处理。所有的临床信息皆从患者病历资料中收集得到。
[0030] 2、免疫组织化学
[0031] 手术标本固定于10%福尔马林中，石蜡包埋。对石蜡块进行4ym连续切片制片。 切好的薄片在67°C下放置2h，在二甲苯中脱蜡，梯度酒精中脱水，在加有0. 01M柠檬酸盐 缓冲液（pH值6. 0)的高压釜中加热进行抗原修复。切片在37°C的3%过氧化氢下培养10 分钟灭活内源性过氧化物酶，并在正常山羊血清中，37°C下孵育10分钟以防止非特异性染 色。滴加第一抗体？8乂17(1:500，六13(^111，美国），并在4°(：下孵育过夜。以抗体稀释液取代 一抗作为阴性对照。Elivisionplus试剂盒（迈新、福建、中国）检测抗体结合。切片经二 氨基联苯胺（DAB)染色，流水冲洗，再进行苏木精染色，脱水、透明、干燥和封片。所有肿瘤 切片由2名独立的观察者随机审查。每个切片选取五个区域观察，每个区域在400倍镜下 观察100个细胞。FBXW7的免疫分数由每个切片的染色强度和阳性细胞百分比确定。FBXW7 染色强度分级为0 (阴性）、1 (弱阳性）、2 (中度）和3 (强阳性）。阳性细胞百分比分级为 1(1-5% )、2(5-25% )、3(25-50% )、4(50-75% )和 5(75-100% )。每个切片的最终分级为 上述两种分级的乘积，范围为0-15。最后数值彡4被视为FBXW7低表达，数值>4则为FBXW7 高表达。
[0032] 3、结果
[0033] 3. 1统计分析
[0034]采用Prism5(GraphPad，圣地亚哥，CA公司，美国）及SPSS18.0(SPSS，芝加 哥，IL公司，USA)统计软件进行分析，计量资料以均值土标准差（Ji：s)表示。根据数据 处理的不同方法及统计学处理的不同要求，选用方差分析或t检验进行分析，以P〈0. 05为 差异有统计学意义。
[0035] 3. 2FBXW7在肾细胞癌、癌旁组织中的表达及与临床病理因素的联系
[0036] 我们通过免疫组化染色研究了FBXW7在105对肾癌组织中的表达。FBXW7主要表 达于肾细胞癌癌细胞和癌旁组织的细胞核中，如图1所示，肿瘤染色明显低于癌旁正常组 织。图1显示FBXW7在肾透明细胞癌和癌旁正常组织的表达，FBXW7主要位于细胞核。图 1A显示FBXW7在肾癌组织的阴性染色照片（400X)，图1B显示FBXW7在肾癌组织的弱阳 性染色照片（400X)，图1C显示FBXW7在癌旁组织的中等强染色照片（400X)，图1D显示 FBXW7在肾癌旁组织的强染色照片（400X)，FBXW7在肾癌组织和癌旁组织的染色形成了强 烈的对比。图1E显示出正常组织FBXW7蛋白表达增多，正常组织FBXW7蛋白表达远远高于 肾透明细胞癌（n= 105,P〈0. 0001)，箱式图的两端分别是上四分位数和下四分位数，中间 横线是中位数，两端的连线分别是除了离群值外的最大值和最小值。
[0037] 癌旁正常组织中FBXW7蛋白表达水平比肾癌组织高得多，如图le所示（N= 105， P< 0. 0001)。105例肾细胞癌标本中，77例强阳性染色，28例为弱阳性染色。我们分析了 FBXW7过表达与肾癌细胞临床病理因素的联系。如表1所示，FBXW7蛋白表达上调与RCC(肾 细胞癌）临床病理分级之间具有高度相关性（P= 〇. 0094)。肿瘤-淋巴结-转移（TNM)阶 段也与FBXW7表达上调（p= 0. 0080)间有很强的相关性。然而，年龄，性别，肿瘤大小（小： 小于7厘米，大：>7cm)和FBXW7蛋白表达水平之间无相关性。所有上述FBXW7的表达与肾 透明细胞癌临床病理的相关性内容被总结在表1中。
[0038]表1
[0039]
[0040] 实施例二
[0041] 1、免疫组织化学
[0042] 手术标本固定于10%福尔马林中，石蜡包埋。对石蜡块进行4ym连续切片制片。 切好的薄片在67°C下放置2h，在二甲苯中脱蜡，梯度酒精中脱水，在加有0. 01M柠檬酸盐 缓冲液（pH值6. 0)的高压釜中加热进行抗原修复。切片在37°C的3%过氧化氢下培养10 分钟灭活内源性过氧化物酶，并在正常山羊血清中，37°C下孵育10分钟以防止非特异性染 色。滴加第一抗体？8乂17(1:500，六13(^111，美国）