细胞中释放而不被宿主细胞干扰，以及使细胞凋亡减少来生产。
[0039]如本文所用，术语“生产能力”是指在细胞存活期间，在产病毒细胞系中增殖的病毒被释放到培养基中，以增加培养基中的病毒滴度。
[0040]如本文所用，术语“缺乏功能”是指在细胞中突变Bst-2基因的一个或多个核苷酸并从细胞释放病毒。优选地，该术语指Bst-2基因的外显子I区域的缺失或插入，或Bst-2基因的敲除或沉默。
[0041]如本文所用，术语“病毒”是指能够引起人或动物疾病的病毒。优选地，该术语是指流感病毒。更优选地，是指由P/H1N1、A/H1N1和A/H3N2组成的组之一。
[0042]在本发明中，“病毒”不限于流感病毒，并且可以包括其它致病病毒，优选单纯疱疹病毒。
[0043]如本文所用，术语“细胞凋亡”是指细胞主动地消耗生物能量ATP，导致死亡的过程。典型的细胞凋亡过程包括细胞的收缩，DNA的常规裂解和细胞膜的片段化。当细胞由于异常的细胞分裂、辐射、紫外线、细菌感染或病毒感染而不能保持它们的正常功能时，可以诱发细胞凋亡。
[0044]在一个方面，本发明涉及在具有病毒生产能力的细胞系中缺乏Bst-2基因功能的产病毒突变细胞系，其中该突变细胞系由于缺乏所述Bst-2基因的功能而具有增加的病毒生产能力。
[0045]作为具有病毒生产能力的细胞系，可以使用任何用于流感疫苗开发的细胞系。优选地，可以使用动物细胞系，并且更优选地，可以使用MDCK细胞、VERO细胞或成纤维细胞。
[0046]在本发明中使用的MDCK(Madin-Darby犬肾)细胞是从犬肾得到的表皮样细胞，并且VERO细胞是从猴肾得到的细胞。两种细胞系显示出对肝炎病毒、牛痘病毒和流感病毒的敏感性，并且因此最经常用于病毒研究。
[0047]突变细胞系可以具有一部分Bst-2基因的插入、缺失、重复、倒置、取代或易位，整个Bst-2基因的缺失，或Bst-2基因的沉默。
[0048]突变细胞系可具有从Bst-2基因的外显子I区域的1-15个核苷酸缺失或在外显子I区域中的1-15个核苷酸插入。
[0049]突变细胞系可具有Bst-2基因的外显子I区域的位置45至50的1_4个核苷酸缺失或外显子I区域的位置45至50的1-3个核苷酸插入。
[0050]突变细胞系可具有Bst-2基因的外显子I区域的位置116至130的1_12个核苷酸缺失。
[0051]突变细胞系可具有Bst-2基因的外显子I区域的位置4至90的核苷酸缺失。
[0052]在本发明中，从由SEQ ID NO:1或2表示的Bst_2基因的外显子I区域中插入或缺失1-15个核苷酸，以产生突变细胞系。
[0053]在本发明的一个例子中，从由SEQ ID N0:1表示的MDCK Bst_2基因的外显子I区域中插入或缺失一个或多个核苷酸，以产生包含突变的等位基因并具有增加的病毒生产能力的突变细胞系。
[0054]SEQ ID NO:1:
[0055]ATGGCACCTACGCTTTACCACTACTACTGGCCTGTGCCCATAACTGACGAGTCAGAGTCAATGTCATCAAGTCAGAAGCTGAGCTGGCTGGAGTGGCTGGGCATCTTGGGGATCCCAGTGGTGATGGGTCTGTCTGTGGCTCTGATCATCTTTGTTGTCAAGACCAACAGCAAAGCCTGCGGGGATGGCCTCCTAGTAGAGCAGGAGTGTCACAATGTCACCAGCCTCCTGGAGCGCCAACTAACCCAAACCCGGCAAGCGTTACAGGGGACCATGGACCAGGCTACCACCTGCAACAAGACTGTG
[0056]在本发明的另一个例子中，通过从Bst-2基因的外显子I区域中缺失1-4个核苷酸或插入1-3个核苷酸来生产缺乏Bst-2基因功能的突变细胞系。这些突变细胞系可包括具有SEQ ID N0:3至8的核苷酸序列中任一种的细胞系，并且优选可以是K-E4、J-C10、J-D10、D-E2、K-G3、J-E2 和 H-G5。
[0057]SEQ ID NO:3:
[0058]ATGGCACCTACGCTTTACCACTACTACTGGCCTGTGCCCATAACTGAAGTCAGAGTCAATGTCATCAAGTCAGAAGCTGAGCTGGCTGGAGTGGCTGGGCATCTTGGGGATCCCAGTGGTGATGGGTCTGTCTGTGGCTCTGATCATCTTTGTTGTCAAGACCAACAGCAAAGCCTGCGGGGATGGCCTCCTAGTAGAGCAGGAGTGTCACAATGTCACCAGCCTCCTGGAGCGCCAACTAACCCAAACCCGGCAAGCGTTACAGGGGACCATGGACCAGGCTACCACCTGCAACAAGACTGTG
[0059]SEQ ID NO:4:
[0060]ATGGCACCTACGCTTTACCACTACTACTGGCCTGTGCCCATAACACGAGTCAGAGTCAATGTCATCAAGTCAGAAGCTGAGCTGGCTGGAGTGGCTGGGCATCTTGGGGATCCCAGTGGTGATGGGTCTGTCTGTGGCTCTGATCATCTTTGTTGTCAAGACCAACAGCAAAGCCTGCGGGGATGGCCTCCTAGTAGAGCAGGAGTGTCACAATGTCACCAGCCTCCTGGAGCGCCAACTAACCCAAACCCGGCAAGCGTTACAGGGGACCATGGACCAGGCTACCACCTGCAACAAGACTGTG
[0061]SEQ ID NO:5:
[0062]ATGGCACCTACGCTTTACCACTACTACTGGCCTGTGCCCATAACTAGTCAGAGTCAATGTCATCAAGTCAGAAGCTGAGCTGGCTGGAGTGGCTGGGCATCTTGGGGATCCCAGTGGTGATGGGTCTGTCTGTGGCTCTGATCATCTTTGTTGTCAAGACCAACAGCAAAGCCTGCGGGGATGGCCTCCTAGTAGAGCAGGAGTGTCACAATGTCACCAGCCTCCTGGAGCGCCAACTAACCCAAACCCGGCAAGCGTTACAGGGGACCATGGACCAGGCTACCACCTGCAACAAGACTGTG
[0063]SEQ ID NO:6:
[0064]ATGGCACCTACGCTTTACCACTACTACTGGCCTGTGCCCATAACTGAGTCAGAGTCAATGTCATCAAGTCAGAAGCTGAGCTGGCTGGAGTGGCTGGGCATCTTGGGGATCCCAGTGGTGATGGGTCTGTCTGTGGCTCTGATCATCTTTGTTGTCAAGACCAACAGCAAAGCCTGCGGGGATGGCCTCCTAGTAGAGCAGGAGTGTCACAATGTCACCAGCCTCCTGGAGCGCCAACTAACCCAAACCCGGCAAGCGTTACAGGGGACCATGGACCAGGCTACCACCTGCAACAAGACTGTG
[0065]SEQ ID NO:7:
[0066]ATGGCACCTACGCTTTACCACTACTACTGGCCTGTGCCCATAACGAGTCAGAGTCAATGTCATCAAGTCAGAAGCTGAGCTGGCTGGAGTGGCTGGGCATCTTGGGGATCCCAGTGGTGATGGGTCTGTCTGTGGCTCTGATCATCTTTGTTGTCAAGACCAACAGCAAAGCCTGCGGGGATGGCCTCCTAGTAGAGCAGGAGTGTCACAATGTCACCAGCCTCCTGGAGCGCCAACTAACCCAAACCCGGCAAGCGTTACAGGGGACCATGGACCAGGCTACCACCTGCAACAAGACTGTG
[0067]SEQ ID NO:8:
[0068]ATGGCACCTACGCTTTACCACTACTACTGGCCTGTGCCCATAACTGACGACGAGTCAGAGTCAATGTCATCAAGTCAGAAGCTGAGCTGGCTGGAGTGGCTGGGCATCTTGGGGATCCCAGTGGTGATGGGTCTGTCTGTGGCTCTGATCATCTTTGTTGTCAAGACCAACAGCAAAGCCTGCGGGGATGGCCTCCTAGTAGAGCAGGAGTGTCACAATGTCACCAGCCTCCTGGAGCGCCAACTAACCCAAACCCGGCAAGCGTTACAGGGGACCATGGACCAGGCTACCACCTGCAACAAGACTGTG
[0069]在本发明的又另一个例子中，包含突变的等位基因并具有增加的病毒生产能力的突变细胞系是通过从SEQ ID N0:2表示的VERO Bst_2基因的外显子I区域缺失核苷酸来生产的。
[0070]SEQ ID NO:2:
[0071]ATGGCACCTATTTTGTATGACTATTGCAAAATGCCCATGGATGACATTTGCAAGGAAGACAGGGACAAGTGCTGTAAACTGGCCGTAGGAATTCTGGGGCTCCTGGTCATAGTGCTTCTGGGGGTGCCCCTGATTTTCTTCATCATCAAGGCCAACAGCGAGGCCTGCCAGGATGGCCTCCGGGCAGTGATGGAGTGTCACAATGTCACCTATCTCCTGCAACAAGAGCTGGCCGAGGCCCAGCGGGGCTTTCGGGACGCAGAGGCCCAGGCTGTCACCTGCAACCAGACTGTG
[0072]在本发明的又另一个例子中，通过从Bst-2基因的外显子I区域的位置116至130中缺失1-12个核苷酸来生产缺乏Bst-2基因功能的突变细胞系。这些突变细胞系可包括具有SEQ ID NO:9和10的核苷酸序列中任一种的细胞系，并且优选可以是D-D8和G-D5。
[0073]SEQ ID NO:9:
[0074]ATGGCACCTATTTTGTATGACTATTGCAAAATGCCCATGGATGACATTTGCAAGGAAGACAGGGACAAGTGCTGTAAACTGGCCGTAGGAATTCTGGGGCTCCTGGTCATAGTGCCCCTGATTTTCTTCATCATCAAGGCCAACAGCGAGGCCTGCCAGGATGGCCTCCGGGCAGTGATGGAGTGTCACAATGTCACCTATCTCCTGCAACAAGAGCTGGCCGAGGCCCAGCGGGGCTTTCGGGACGCAGAGGCCCAGGCTGTCACCTGCAACCAGACTGTG
[0075]SEQ ID NO: 10:
[0076]ATGGC