>[0071]S24、所述第三次盐析包括:向所述上清液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为2-3mol/L，静置，离心收集所述上清液的沉淀，得到所述胶原蛋白盐析沉淀。
[0072]通过第三次盐析，可以对所述抽提混合液中的I型胶原蛋白进行最终纯化，将所述胶原沉淀二中的ΠΙ型胶原分离出来，得到I型胶原(胶原沉淀三)。
[0073]优选的，本发明实施例第三次盐析时，向所述上清液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为2-3mol/L。这样，可以防止所述上清液中的ΠΙ型胶原析出，提高最终获得的I型胶原蛋白的纯度，又可以使得所述上清液中的I型胶原尽可能多的析出，提高最终获得的I型胶原蛋白的产率，并且可以减少最终获得的胶原蛋白中由于盐析纯化所带入的无机盐杂质。进一步优选的，向所述上清液中加入无机盐至所述无机盐溶液的质量浓度为2.5mol/L。
[0074]需要说明的是，对抽提混合液进行三次以上的盐析纯化方式与上述进行三次盐析纯化的方式相同，本发明实施例在此不再赘述。
[0075]为了保证胶原蛋白的活性，在步骤S21、S23、S24中进行盐析纯化时，盐析纯化后的静置温度为2-6°C，为了保证盐析纯化后胶原蛋白能够完全溶解，便于获取沉淀和上清液，本发明盐析纯化所静置的时间为18_30h，优选的，该盐析纯化所静置的时间为24h。
[0076]进一步的，为了获取纯度更高的胶原蛋白，本发明实施例步骤S2中的至少两次盐析纯化可以采用无机盐，优选的，本发明实施例的无机盐采用氯化钠，经过氯化钠的多次盐析纯化，可使所得胶原蛋白的纯度为不低于95%的具有胶原蛋白活性的高纯度I型胶原蛋白。
[0077]如图4所示，本发明的一优选实施例中，S3可以具体通过以下步骤实现:
[0078]S31、将所述胶原蛋白盐析沉淀溶解于酸性溶液中，获取胶原蛋白溶液；
[0079]S32、将所述胶原蛋白溶液经过超滤系统等倍透析，去除所述胶原蛋白溶液中的杂质及小分子胶原蛋白；
[0080]S33、将所述去除杂质及小分子胶原蛋白的胶原蛋白溶液冻干，得到所述胶原蛋白。
[0081]为了减少所得胶原蛋白中的杂质及小分子胶原蛋白，同时也可缩短获取胶原蛋白的周期。在实际操作中按照胶原蛋白盐析沉淀与乙酸溶液体积比为1: (5-15)的比例将所述胶原蛋白盐析沉淀溶解于所述乙酸溶液中，优选的，可以胶原蛋白盐析沉淀与乙酸溶液体积比1:10，可选的，步骤S31中的酸性溶液可以采用乙酸溶液，乙酸溶液的体积浓度为0.3-1.0%，优选的，步骤S31中的酸性溶液可以采用体积浓度为0.5%的乙酸溶液。
[0082]为了去处抽提过程中多余的酸性物质及盐析纯化过程中的无机盐杂质或者其他小分子物质，本发明实施例通过超滤系统进行等倍透析，其中，等倍透析是指将NL的提取液进行透析，在透析过程中会加入NL透析液，在透析完成后，所得溶液仍为NL，保证透析前后提取液的体积不变。
[0083]需要说明的是，本发明实施例对透析液的体积不进行限定，可以在实际操作过程中根据需要进行选择，只要使得最终获取的提取液的体积与透析之前的体积一致即可。
[0084]需要说明的是，采用本发明实施例的胶原蛋白提取方法提取的胶原蛋白由于其具有良好的生物相容性、无毒、弱抗原性、可降解性及安全性等优点，可广泛应用于化妆品或生物医药。
[0085]例如，可将含该胶原蛋白的活性胶原蛋白溶液与纯棉无纺布复合制成敷料贴类产品敷于脸部，能够将活性胶原蛋白能直接渗入肌肤底层，与周围组织的亲和性好，可加快胶原蛋白的生成速度，促进皮肤细胞正常生长。
[0086]此外，该胶原蛋白作为生物医药，具有引导上皮细胞迀入缺损区的能力，诱导产生趋化因子如血小板生长因子和纤维连接蛋白等，对细胞的生长有趋化作用，对细胞的分化、运动、化学趋向性结缔组织的修复等均起重要作用，从而改善表皮细胞微环境和促进皮肤组织新陈代谢，达到消炎和更新肌肤的作用。进而起到缩短术后恢复时间的效果。
【具体实施方式】
[0087]
[0088]以下，将参照本发明的实施例详述本发明。这些实施例仅是为了具体说明本发明而提出的示例，本领域技术人员可以知道的是本发明的范围不受这些实施例的限定。
[0089]在所述实施例中，原料选用牛皮。
[0090]实施例1
[0091]预处理原料:将牛皮解冻清洗后剔除牛毛和皮下组织，绞切成牛皮颗粒，按照中性清洗液与牛皮颗粒体积重量比为2.5的比例向牛皮颗粒中加入中性清洗液，离心清洗牛皮颗粒3次，收集沉淀，获取预处理的原料；
[0092]抽提:按照所述预处理后的原料与所述酸性溶液的体积比为1:15将所述预处理后的原料沉淀溶解于体积浓度为3%的酸性溶液中，搅拌均匀后6°C条件下，静置48h，离心收集上清液一和原胶原蛋白沉淀二，将所述原胶原蛋白沉淀二溶解于与第一次抽提等量的体积浓度为3%的酸性溶液中，在6°C条件下，静置48h进行重复抽提，抽提结束后离心收集上清液二，将所述上清液一和所述上清液二混合，得到所述抽提混合液；
[0093]盐析纯化:向所述抽提混合液中加入氯化钠至所述氯化钠溶液中的质量浓度为5%，在2°C条件下，静置24h，离心收集胶原沉淀一；按照胶原沉淀一与缓冲液的体积比为1:25将所述胶原沉淀一溶解于所述缓冲液中，获取原胶原蛋白溶液；向所述原胶原蛋白溶液中加入氯化钠至所述氯化钠溶液的质量浓度为1.7mol/L，在5°C下静置24h，离心收集上清液；向所述上清液中加入氯化钠至所述氯化钠溶液的质量浓度为2.5mol/L，在2°C条件下，静置24h，离心收集所述上清液的沉淀，得到所述胶原蛋白盐析沉淀；
[0094]等倍透析:按照所述胶原蛋白盐析沉淀与所述乙酸溶液的体积比为1:10的比例将所述胶原蛋白盐析沉淀溶解于体积浓度为0.5%酸性溶液中，获取胶原蛋白溶液，将所述胶原蛋白溶液经过8个洗滤体积的超滤系统等倍透析，去除所述胶原蛋白溶液中的杂质及小分子胶原蛋白；将所述去除杂质及小分子胶原蛋白的胶原蛋白溶液冻干，得到所述胶原蛋白O
[0095]本发明实施例提供一种胶原蛋白的提取方法，在对预处理后的原料利用酸性溶液进行抽提能够保证预处理后的原料中的胶原蛋白的产率，对抽提混合液采用至少两次盐析纯提取出的胶原蛋白为具有胶原蛋白活性的高纯度I型胶原蛋白，所得胶原蛋白的纯度为95%，采用超滤法去除胶原蛋白中杂质及非I型胶原蛋白蛋白质，在缩短生产周期的同时降低了冻干成本，采用本发明实施例提取的胶原蛋白由于其具有良好的生物相容性、无毒、弱抗原性、可降解性及安全性等优点，可作为天然生物材料用于生物医学领域。更重要的是可以作为支架材料用于组织工程医学领域，引导组织再生，促进伤口修复愈合。
[0096]实施例2
[0097]预处理原料:将牛皮解冻清洗后剔除牛毛和皮下组织，绞切成牛皮颗粒，按照中性清洗液与牛皮颗粒体积重量比为3的比例向牛皮颗粒中加入中性清洗液，离心清洗牛皮颗粒5次，收集沉淀，获取预处理的原料；
[0098]抽提:按照所述预处理后的原料与所述酸性溶液的体积比为1:10将所述预处理后的原料沉淀溶解于体积浓度为0.5%的酸性溶液中，搅拌均匀后2°C条件下，静置48h，离心收集上清液一和原胶原蛋白沉淀二，将所述原胶原蛋白沉淀二溶解于与第一次抽提等量的体积浓度为0.5%的酸性溶液中，在2°C条件下放置48h进行重复抽提，抽提结束后离心收集上清液二，将所述上清液一和所述上清液二混合，得到所述抽提混合液；
[0099]盐析纯化:向所述抽提混合液中加入氯化钠至所述氯化钠溶液的质量浓度为4%，在2°C条件下，静置30h，离心收集胶原沉淀一；按照胶原沉淀一与缓冲液的体积比为I: 20所述胶原沉淀一溶解于所述缓冲液中，获取原胶原蛋白溶