一种高度氧化的二萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于药物领域，具体涉及从干燥的杜仲叶中分离得到的一种高度氧化的二 萜化合物及其制备方法和医药用途。
【背景技术】
[0002] 杜仲Eucommia ulmoides Oliv.属被子植物门，杜仲科，杜仲属，落叶乔木，高达 20m，树皮灰褐色，连同枝、叶、根均含胶，折断有银白色细丝。叶椭圆或椭圆伏卵型，长6~ 18cm，边缘有锯齿，下边脉上有毛，叶柄长1~2cm，果为翅果扁平而薄，内含一种子。杜仲作 为中药在我国已有2000多年的药用历史，《神农本草经》和《本草纲目》均将其列为上品，其 具有多种功效，主要用于治疗肾虚腰痛，筋骨无力，妊娠漏血，胎动不安，高血压症。
[0003] 近年来，各国学者对杜仲化学成分进行了大量研究，目前分离得到并经鉴定的有 机化合物有70种以上，无机矿物元素不少于15种。研究发现，杜仲皮、花、叶和枝条等各 部分中含有相似的化学成分，主要包括木脂素类、环烯醚萜类、黄酮类和留体类等有机化合 物。现代药理学证明，杜仲具有多种功能活性，如降血压、抗衰老、抗癌、抗菌、镇痛、消炎， 利尿、镇静、安神，抗病毒作用，增强机体非特异免疫力，并能对细胞免疫进行双相调节等功 效，另外对神经中枢也有一定作用。杜仲也因其显著的生理活性得到了众多学者的关注。
[0004] 现代研究表明，有些植物不但具有调节机体的免疫功能，还具有非特异性的抗病 毒功能。S-腺苷-L-高半脫氨酸水解酶（S-Adenosyl-L-homocysteine hydrolase，SAH 水 解酶）是一类具有独特广谱抗病毒活性的腺苷衍生物的作用靶，尤其是抗出血热病毒抑制 剂的目的靶，广泛存在于脊椎动物（如人、牛、狗、兔、大鼠、小鼠）、植物、真菌及其他微生物 细胞内，具有重要的生理功能。SAH水解酶与转甲基作用密切相关，真核细胞及病毒mRNA 5'-末端必须具有甲基化的帽状结构，才能进行翻译。mRNA 5'-末端甲基化依赖于腺苷甲 硫氨酸的多种甲基转移酶催化，SAH是酶反应产物，亦是该酶的竞争性反馈抑制剂。SAHA 解酶可将SAH水解成腺苷及L-高半胱氨酸，该反应是可逆的，体外趋向合成，体内趋向水 解。体内转甲基化产生的SAH被SAH水解酶不断水解，使转甲基反应继续进行，无SAH的累 积。如SAH水解酶被抑制，细胞内SAH积累，抑制转甲基酶，进而影响mRNA功能，病毒蛋白 不能合成，也就不能生成子代病毒，病毒复制受到抑制。大多数病毒mRNA需甲基化的帽状 结构，且对转甲基酶的抑制比细胞mRNA敏感，细胞内SAH浓度稍有增加，便首先受到波及， 此特点赋于SAH水解酶抑制剂有选择性。因此，SAH水解酶在国际上被用于作为筛选抗出 血热病毒抑制剂的体外筛选模型。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种从干燥的杜仲叶中分离得到的一种高度氧化的二萜 化合物；
[0006] 本发明的另一目的在于提供该新化合物的制备方法；
[0007] 本发明的再一目的在于提供该化合物用于制备抗病毒药物的医药用途。
[0008] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0009] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0010]
[0011] 所述的化合物（I )的制备方法，包含以下操作步骤：（a)干燥的杜仲叶用75%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃 取物用大孔树脂除杂，依次用10%乙醇和75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩 得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积 比为90:1、45:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c) 中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集9-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到 纯的化合物（I)。
[0012] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I )和药学上可接受的载体。
[0014] 所述的化合物（I )在制备抗病毒药物中的应用。
[0015] 所述的药物组合物在制备抗病毒药物中的应用。
[0016] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0017] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0018] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0019] 说明书附图
[0020] 图1为化合物（I )结构式；
[0021] 图2为化合物（I )理论E⑶值与实验E⑶值比较；
[0022] 图3为空白对照曲线及SAH水解酶活性测定结果；
[0023] 图4为化合物（I )对SAH水解酶的抑制作用。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0025]实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0026] 药材和试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海 凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。干燥的杜仲叶购 自安徽亳州中药材市场，产地湖北。
[0027] 制备方法：（a)干燥的杜仲叶（8kg)用75%乙醇热回流提取（25LX 3次），合并提 取液，浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和的正丁 醇（6LX3次）萃取，浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（288g)和正丁醇萃取 物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用纯净水溶解至1. 5L，医用脱脂棉过滤，滤液用AB-8型 大孔树脂（1. 5kg)分离，依次用10%乙醇（12L)和75% (15L)乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱 液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏（126g) ;(c)步骤（b)中75 %乙醇洗脱浸膏用200-300 目正相硅胶分离，依次用体积比为90:1 (10个柱体积）、45:1 (10个柱体积）、20:1 (8个柱体 积）、10:1 (9个柱体积）和1:1 (4个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分； (d)步骤（c)中组分3(28g)用200-300目正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(5个 柱体积）、20:1 (8个柱体积）和10:1 (5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组 分；（e)步骤（d)中组分2(8g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶0DS-C18分离，用体积百分 浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集9-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的 化合物（I ) (22mg)。
[0028] 结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z 593. 2604,结合核磁特征可得分子式为 C28H42012，不饱和度为 8。核磁共振氢谱数据 5H(ppm，DMS0-d6,500MHz) :H-1(4.77, br，S)， H-2(l. 61，m)，H-2(2. 00，m)，H-3(1. ll，m)，H-3(1. 85，td，J = 14. 5,3. 9)，H-6(5. 42，br，s)， H-7(Not detected)，H-8(1. 90，m)，H-9(3. 43，td，J = 13. 2,4. 6)35，t，J = 12. 5)， 58，m)，H-15(3. 41，d，J = 2. 3)，H-16(5. 53，d，J = 2. 3)，H-17(1. 49，s)，H-18(1. 09， s)，H-19 (1. 10, s)，H-20 (1. 15, s)，l-〇Ac (2. 12, s)，6-0Ac (1. 96, s)，7-0Ac (2. 06, s)， 5-OH(3. 21，s)，15-OH(3. ll，s)，16-OH(3. 06，s)，H-1'（2. 96，m)，H-1'（3. 28，m)，H-2'（1. 00， t，J = 6. 9);核磁共振碳谱数据 S c (ppm，DMS0-d