br>[0227] 在第一方面，本发明提供了一种微囊组合物，包括一种含洗涂剂酶的微囊，其中该 微囊的膜通过一种具有高于IkDa分子量的多支化的多胺的交联而产生，并且其中该洗涂 剂酶选自下组，该组由W下各项组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶 酶、及其组合。
[022引在第二方面，本发明提供了一种液体洗涂剂组合物，包括总浓度按重量计是至少 3%的表面活性剂和洗涂剂助洗剂，和含洗涂剂酶的微囊，其中该微囊的膜通过具有高于 IkDa分子量的多支化的多胺的交联而产生。
[0229] 在本发明第一和第二方面组合物的一个实施例中，该多支化的多胺的运些反应性 氨基构成至少15%的分子量。优选地，该多支化的多胺的分子量高于IkDa,例如至少为 1.SkDaO
[0230] 在运些组合物的一个实施例中，通过使用一种酷基氯作为交联剂生成该微囊。
[0231] 在运些组合物的一个实施例中，该微囊的直径大于50微米。
[0232] 在运些组合物的一个实施例中，该微囊包含至少1%活性酶。
[0233] 在一个实施例中，运些组合物进一步包括醇，例如多元醇。
[0234] 在运些组合物的一个实施例中，该表面活性剂是阴离子表面活性剂。
[0235] 在一个实施例中，运些组合物是液体衣物或自动餐具洗涂剂。
[0236] 在一个实施例中，运些组合物包含少于90 %的水。
[0237] 在运些组合物的一个实施例中，该洗涂剂酶是淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露聚 糖酶、果胶酶、DNA酶、氧化还原酶（例如，漆酶、过氧化物酶、面代过氧化物酶、过水解酶）、 或其任何组合。
[023引在运些组合物的一个实施例中，该洗涂剂酶是蛋白酶，例如金属蛋白酶或碱性丝 氨酸蛋白酶（例如，枯草杆菌蛋白酶）。
[0239] 在运些组合物的一个实施例中，该洗涂剂酶是淀粉酶或脂肪酶；优选一种与SEQ IDNO: 1具有至少70%氨基酸序列一致性的淀粉酶，或一种与SEQIDN0:2或3具有至少 70%氨基酸序列一致性的脂肪酶。
[0240] 在运些组合物的一个优选实施例中，通过界面聚合使用一种酷基氯作为交联剂生 成该微囊。
[0241] 在运些组合物的一个优选实施例中，该多支化的多胺是一种聚乙締亚胺。
[0242] 在另一个方面中，本发明提供了一种用于制备（液体）洗涂剂组合物的方法，包括 将如上所述的微囊组合物与表面活性剂和洗涂剂助洗剂组合。优选地，表面活性剂和洗涂 剂助洗剂的总浓度为按重量计该洗涂剂组合物的至少3%。该表面活性剂可W是阴离子表 面活性剂。
[0243] 在又另一个方面中，本发明提还供了一种微囊用于改进洗涂剂酶在液体洗涂剂组 合物中稳定性的用途，其中该洗涂剂组合物包括表面活性剂和洗涂剂助洗剂，W至少3%的 总浓度，并且其中其中该微囊通过一种多支化的多胺的交联而产生，并且其中根据实例2 中的方法活性损失降低至少10%，并且其中根据实例3中的方法该微囊能够在3分钟之内 释放至少50%的酶。
[0244] 根据本发明的用途的实施例与如上所描述的本发明运些组合物的实施例相同。
[0245] 在另一个方面中，本发明还提供了本发明运些组合物（如W上所描述的）用于衣 物洗涂或自动餐具洗涂中的用途。
[0246] 本发明的运些微囊可W用于具有高或低储备碱度的组合物中（参见WO 2006/090335)。运些微囊还与具有高或低水平的沸石、憐酸盐或其他用于与化和Mg离子 相互作用的强或弱助洗剂（馨合剂、馨合剂、沉淀剂）的组合物相容。
[0247] 根据本发明的用途可W在W下溫度下进行：从5至90摄氏度，优选从5至70摄氏 度，更优选从5至60摄氏度，甚至更优选从5至50摄氏度，甚至更优选从5至40摄氏度， 最优选从5至30摄氏度，并且特别是从10至30摄氏度。
[024引W下实例进一步描述本发明，运些实例不应当解释为限制本发明的范围。
[0249]实例
[0巧0] 用作缓沖液和底物的化学品至少是试剂等级的商品。淀粉酶1具有SEQIDNO: 1 中所示的氨基酸序列（描述于WO2001/066712中）。脂肪酶1具有SEQIDNO: 2中所示的 氨基酸序列（描述于WO2000/060063中）。脂肪酶2具有SEQIDNO: 3中所示的氨基酸序 列。
[0巧1] 实例1 。巧引 液体发物滿絡剂的制备
[0253] 液体衣物标准洗涂剂；洗涂剂A和洗涂剂B分别从W下组合物中制备（所有百分 比均为w/w):
[0巧4]
[0巧6] 此外，一种可商购的无酶洗涂剂；"宝奎少量且有利型非生物液（PersilSmall andMi曲tyNon-biological)"于2010年六月购于英国。运种洗涂剂称为"洗涂剂C"。
[0巧7] 实例2 。巧引 具有不同聚賺W胺聚合物（分子量）的奪的制备
[0巧引 由BASF提供了具有商品名Lupaso倾多种不同的聚乙締。制造者所述的一些规 格总结于下表中：
[0260]
[0261] 通过将脂肪酶1 (120mg活性酶/克）的一种水溶液与根据下表所列的聚乙締亚胺 混合来制备屯种水相溶液。
[0262]
[0264] 通过将1000血的石蜡油（由Statoil提供的怖iteway巧）与苯乙締、甲基丙締 酸十八烷基醋W及马来酸酢=元共聚物乳化剂在石蜡油中的高MW水解共聚物的IOg20% 溶液通过揽拌混合制备一个油相（参见WO99/01534,实例5)。
[0265] 在连续磁性揽拌下，将运些水相中的每个添加至IOOmL油相W形成具有200ym和 600ym之间的平均液滴尺寸的油包水乳剂。
[026引通过将2. 4g的对苯二甲酯氯（来自西格玛奥德里奇（SigmaAl化ich))用加至 400g的石蜡油溶解并且在连续磁性揽拌下加热至85°C来制备一个反应物油相。
[0267] 向每个油包水乳剂中添加50mL热反应物油相来引发界面聚合反应和囊形成。允 许在揽拌下1小时完成该反应。
[026引然后，允许囊沉降大约5分钟，弃去上清液并且用石蜡油（来自Statoil的Whiteway 15;或来自埃克森美孚巧xxonMobil)的Isopar M)冲洗运些囊两次。尽可能多 的排出最终的囊产品中的油。
[0269] 用100血洗涂剂A与每一批囊混合。
[0270] 通过将0.IOg的脂肪酶1溶液（120mg活性酶/克）与100g洗涂剂A在磁揽拌下 混合来制备参照。
[0271] 将参照和囊批次分装入密闭小瓶，每一瓶中大约5g并在5°C或37°C下储存1周 (加速条件）。
[0272] 在储存之后，通过使用标准酶分析方法（在37°C下，pH= 8.0水解对硝基苯基栋 桐酸醋），在脱矿质水中初始1:100稀释（W便促进酶从囊中释放）之后测量活性。相对于 在5°C下储存的样品计算残余活性。相对于参照计算活性损失减少。
[0273]
[0275] 结果证明，相比于非囊化参照样品，由分子量1. 3kDa至2000kDa的聚乙締亚胺交 联形成的囊显示出在衣物洗涂剂中显著改进的酶稳定性。
[0276]实例 3 阳277] 酶活忡的释放
[027引为了证实酶在模拟衣物洗涂中足够快地释放，大部分的酶活性需要在2-3分钟内 释放。
[0279] 将通过实施例2中所描述的方法生成的囊样品与洗涂剂A中LupasolG20W化按 1:100在去离子水中稀释。该混合物被称为"洗涂液"。
[0280] 通过使用标准酶分析方法，W30秒的间隔，测量过滤的（玻璃纤维0. 65ym过滤 器）洗涂液样品上的酶活性（脂肪酶）
[0281] 10分钟之后，用高剪切混合机扣ItraTurrax)处理该洗涂液一分钟W确保所有 囊的破坏。高剪切混合样品的活性用作下表中指数100%，显示出洗涂液中的释放特性（两 个的平均）。
[0282]
[0283] 运证明了 2分钟内在水中按1:100稀释获得了完全的酶活性释放。
[0284]实例 4 阳2财微奪化淀粉酶放讲的稳定忡
[0286] 使用W下水相组合物，通过实施例2中所描述的方法制备含淀粉酶的囊：
[0287]
[028引将囊与洗涂剂B或洗涂剂C混合，已经向其中添加了 0. 5%非囊化蛋白酶。如在 实例2中描述制备了参照样品。将参照和样品分开并分别在5°C和3(TC下储存八周，然后 用标准淀粉酶酶活性测定（在37°C下，抑=7. 35水解（4, 6-亚乙基（G7)-p-硝基苯基 (Gl) -a，D-麦芽屯糖巧（亚乙基-G7PNP))来分析。在此总结了残余活性：
[0289]
[0290] 该实例证明了运些囊保护了含蛋白酶洗涂剂中的酶，其中蛋白水解是一种重要的 去稳定机制。
[0291]实例 5 阳29引用淀粉酶制备并目含有碳酸钩作为稳定剂的奪
[0293] 根据下表制备两种水相溶液（囊I和囊II):
[0294]
阳29引淀粉酶：淀粉酶1浓缩物（1Img活性酶/克）。
[0296]碳酸巧：CaC03是一种化化来源，并且是一种非常难溶性的盐。
[0297]油相：594gWhiteway15与6.Og如实例2中的高分子乳化剂。
[029引反应物油相：在85°C下，230g怖iteway15与4.Ig间苯二甲酯氯（来自西格玛奥 德里奇（SigmaAl化ich))。
[0299] 在连续磁性揽拌下，将运些水相中的每个的20ml添加至SOmL油相W形成具有 200ym和600ym之间的平均液滴尺寸的油包水乳剂。
[0300] 向每个油包水乳剂中添加50mL热反应物油相来引发界面聚合反应和囊形成。允 许在揽拌下1小时完成该反应。
[030。 然后，允许囊沉降大约5分钟，弃去上清液并且用Whiteway15冲洗运些囊两次。 尽可能多的排出最终的囊产品中的油。
[0302] 将0. 6克排油后的产品添加至150ml洗涂剂A。
[0303] 通过将0. 4ml淀粉酶浓缩物与125g洗涂剂A在磁揽拌下混合来制备参照。
[0304] 将参照和囊批次分装入密闭小瓶，每一瓶中大约5g并在5°C和37°C下储存8周。
[0305] 在储存之后，通过使用如实例4中的标准酶分析方法测量活性。
[0306] 在37°C下8周后，洗涂剂A中残余的淀粉酶活性（相对于在5°C下储存的样品的 残余活性）：
[0307]
[030引运些结果显示，淀粉酶的囊化改进了稳定性；而且添加化C03作为稳定剂甚至进 一步改进了淀粉酶的稳定性。
[0309]实例6 惦10] 滿絡剂中胎化酶奪的储存稳定忡
[0311] 水相溶液：将50g脂肪酶2溶液（80mg活性酶/克）、20gLupasolGlOO(50 % )W 及30g自来水混合。
[031引油相：90gWhiteway15与IOg如实例2中的高分子乳化剂。
[031引反应物油相：在85°C下，47. 5g怖iteway15与2. 5g间苯二甲酯氯（来自西格玛 奥德里奇（SigmaAl化ich))。
[0314] 使用SilversonL4RT高剪切混合机在1000巧m下连续混合15分钟，将运些水相 添加至该油相W形成具有约50ym的平均液滴尺寸的油包水乳剂。
[0315] 在磁性揽拌下，向100mL的乳剂中添加50mL热反应物油相来引发界面聚合反应和 囊形成。允许在揽拌下1小时完成该反应。所得囊具有50ym的平均直径。
[031引将0. 84克的囊产品添加至210ml的宝奎小与强大生物液（PersilSmall&Mi曲ty Bio)中，于2013年在英国商购的液体衣物洗涂剂，包含〉15%表面活性剂W及其他助洗剂 和蛋白酶。通过将0. 35ml脂肪酶浓缩物与175g的液体洗涂剂在磁揽拌下混合来制备参照。 [0317]将1. 6克的囊产品添加至250ml的单位剂量洗涂剂（白色液相取自汰溃舱白相 (Tide化dsWhite化ase)(于2012年在美国商购）最大的腔室）。通过将0. 45ml脂肪酶 浓缩物与225g的液体洗涂剂在磁揽拌下混合来制备参照。
[031引将参照和囊批次分装入密闭小瓶，每一瓶中大约5 g并在5 °C和3 (TC下在Small&Mi曲ty中储存8周，并且并在5°C和35°C下在汰溃舱白相灯ide化ds怖ite化ase) 中储存8周。
[0319] 在储存之后，通过使用如实例2中的标准酶分析方法测量活性。
[0320] 8周后的残余活性（相对于在5°C下储存的样品的残余活性）：
[0321]
[0322] 运些结果显示，囊化的脂肪酶比非囊化的参照明显地在更为稳定。此外，具有非囊 化脂肪酶的汰溃舱白相灯ide化dsWhite化ase)在存储时视觉上地相分离，而具有囊化 脂肪酶的洗涂剂和不含添加脂肪酶的参照洗涂剂在视觉上不受影响。
[0323] 运表明，当存在游离脂肪酶时，洗涂剂中的脂肪酶敏感组分降解，但当脂肪酶被囊 化或不存在时不会降解。该汰溃舱白相灯ide化dsWhite化ase)洗涂剂含有氨化藍麻油， 其是一种脂肪酶敏感成分。
[0324]实例7 防3巧]将稳定剂添加牵胎化酶奪
[0326] 通过将脂肪酶1 (120mg活性酶/克）的一种水溶液与根据下表所列的聚乙締亚胺 混合来制备屯种水相溶液：
[0327]
[0328] 对于每个囊，通过将100mLWhiteway 15与Iml的如实例2中的高分子乳化剂混 合制备一个油相。
[0329] 在连续磁性揽拌下，将运些水相中的每个的2ml添加至该油相W形成具有200 ym 和600 ym之间的平均液滴尺寸的油包水乳剂。
[0330] 通过将1. Sg的对苯二甲酯氯用300g Whiteway 15油溶解并且在连续磁性揽拌下 加热至85°C来制备一个反应物油相。
[033。 向每个油包水乳剂中添加50mL热反应物油相来引发界面聚合反应和囊形成。允 许在揽拌下1小时完成该反应。
[0332] 然后，允许囊沉降大约5分钟，弃去上清液并且用Isopar M油冲洗运些囊两次。尽 可能多的排出最终的囊产品中的油。
[033引将125血洗涂剂A与每一批囊混合。
[0334] 将囊批次分装入密闭小瓶，每一瓶中大约5g并在5°C和30°C下储存8周。
[0335] 在储存之后，通过使用标准酶分析方法（在37°C下，pH= 8. 0水解对硝基苯基栋 桐酸醋），在脱矿质水中初始1:100稀释（W便促进酶从囊中释放）之后测量活性。相对于 在5°c下储存的样品计算残余活性。相对于参照计算活性损失减少。
[0336]
[0337] 结果证明，将不同的稳定剂添加至运些囊可W改进储存稳定性。
【主权项】
1. 一种微囊组合物，包括含洗涤剂酶的微囊，其中该微囊的膜是通过具有高于IkDa分 子量的多支化的多胺的交联而产生，并且其中该洗涤剂酶选自下组，该组由以下各项组成： 蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶酶、DNA酶、漆酶、过氧化物酶、卤代过 氧化物酶、过水解酶、及其组合。2. -种液体洗涤剂组合物，包括总浓度按重量计是至少3%的表面活性剂和洗涤剂助 洗剂，和含洗涤剂酶的微囊，其中该微囊的膜是通过具有高于IkDa分子量的多支化的多胺 的交联而产生。3. 如权利要求1或2所述的组合物，其中该多支化的多胺的这些反应性氨基构成该分 子量的至少15%。4. 如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中通过使用酰基氯作为交联剂生成该 微囊。5. 如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中该微囊的直径是至少50微米，或大 于50微米。6. 如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中该微囊包含按重量计至少1 %的活 性酶。7. 如权利要求1至6中任一项所述的组合物，该组合物进一步包括醇，例如多元醇。8. 如权利要求2至7中任一项所述的组合物，其中该表面活性剂是阴离子表面活性剂。9. 如权利要求1至8中任一项所述的组合物，该组合物是液体衣物或自动餐具洗涤洗 涤剂组合物。10. 如权利要求1至9中任一项所述的组合物，该组合物包含按重量计少于90%的水。11. 如权利要求2至10中任一项所述的组合物，其中该洗涤剂酶是蛋白酶、淀粉酶、月旨 肪酶、纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶酶、DNA酶、氧化还原酶、或其任何组合。12. 如权利要求1或11所述的组合物，其中该蛋白酶是金属蛋白酶或碱性丝氨酸蛋白 酶，例如枯草杆菌蛋白酶。13. 如权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中使用酰基氯作为交联剂通过界面 聚合来生成该微囊。14. 如权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中该多支化的多胺是聚乙烯亚胺。15. 如权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中该微囊包括Mg2+、Ca2+、或Zn2+ 离子的来源，例如Mg2+、Ca2+、或Zn2+的难溶性盐。16. -种用于制备洗涤剂组合物的方法，该方法包括将如权利要求1至15中任一项所 述的微囊组合物与表面活性剂和洗涤剂助洗剂组合。17. -种微囊用于改进洗涤剂酶在液体洗涤剂组合物中的稳定性的用途，其中该洗 涤剂组合物包括总浓度按重量计是至少3%的表面活性剂和洗涤剂助洗剂，并且其中该微 囊是通过多支化的多胺的交联而产生，并且其中根据实例2中的方法活性损失降低至少 10%，并且其中根据实例3中的方法该微囊能够在3分钟之内释放至少50%的该酶。18. 根据权利要求17所述的用途，其中该多支化的多胺是聚乙烯亚胺。19. 根据权利要求2至15中任一项所述的液体洗涤剂组合物用于衣物洗涤或自动餐具 洗涤中的用途。
【专利摘要】本发明提供了一种(液体洗涤剂)组合物，包括含酶的微囊，该微囊是通过多支化的多胺的交联而产生。
【IPC分类】C11D3/386, C12N9/98, C11D17/00
【公开号】CN105164244
【申请号】CN201480024047
【发明人】K.B.安德森, M.福维斯科夫, T.拉斯马森, O.西蒙森, K.雅各布森, M.诺尔比, L.安德森
【申请人】诺维信公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2014年5月2日
【公告号】WO2014177709A1