胞碎片，将血红蛋白溶液装入透析袋中，置于流动自来水中透析11.4h，之后在51.6°C恒温下水浴11.5h，最后冷冻干燥得到血红蛋白粗制品，所述抗凝剂包含:柠檬酸47g，柠檬酸钠121g，葡萄糖155g，加水lOOgo
[0056]实施例23:—种以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，选取600g的血红蛋白粗制品，加水稀释到浓度为5.08%，之后加入125g的风味蛋白酶进tx—次酶解，风味蛋白酶为24400U/g，ph = 7.09，温度53.4°C环境下，水解5.31h，一次酶解后，降温至
45.6°C，ph调节至8.95后，加入65g的碱性蛋白酶进行二次酶解，碱性蛋白酶为43600U/g，酶解时间5.33h，之后高温灭酶:水浴灭酶18分钟，在3900r/min转速下离心lOmin后弃去沉淀，得到上清液，为牛血红蛋白酶解液并冷冻干燥，得到血红蛋白多肽。
[0057]上述血红蛋白粗制品使用如下方法制备:选用新鲜牛血和抗凝剂，抗凝剂和鲜牛血按照1:6.2的比例混合后过滤，过滤后的血液在3000r/min下一次离心18.5min后，弃去上清液，收集下层红细胞，将收集的红细胞用4.9体积冷生理盐水，洗涤4次，之后进行超声波破碎，超声波破碎时加入0.15% NaHS03，加适当体积的水，放入超声波细胞破碎机中超声破碎一定时间，得到破碎的红细胞溶液，将得到的红细胞溶液在8000r/min下二次离心32min，弃去下层细胞碎片，将血红蛋白溶液装入透析袋中，置于流动自来水中透析12h，之后在53.5°C恒温下水浴11.3h，最后冷冻干燥得到血红蛋白粗制品，所述抗凝剂包含:柠檬酸49g，柠檬酸钠131g，葡萄糖170g，加水100g。
[0058]实施例24: —种以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，选取600g的血红蛋白粗制品，加水稀释到浓度为5.39%，之后加入135g的风味蛋白酶进tx—次酶解，风味蛋白酶为24600U/g，ph = 7.15，温度53.6°C环境下，水解5.lh，一次酶解后，降温至45。。，ph调节至9后，加入65.5g的碱性蛋白酶进行二次酶解，碱性蛋白酶为44000U/g，酶解时间
5.15h，之后高温灭酶:水浴灭酶18.2分钟，在3980r/min转速下离心10.5min后弃去沉淀，得到上清液，为牛血红蛋白酶解液并冷冻干燥，得到血红蛋白多肽。
[0059]上述血红蛋白粗制品使用如下方法制备:选用新鲜牛血和抗凝剂，抗凝剂和鲜牛血按照1:6.7的比例混合后过滤，过滤后的血液在3100r/min下一次离心19min后，弃去上清液，收集下层红细胞，将收集的红细胞用4.85体积冷生理盐水，洗涤1次，之后进行超声波破碎，超声波破碎时加入0.14% NaHS03，加适当体积的水，放入超声波细胞破碎机中超声破碎一定时间，得到破碎的红细胞溶液，将得到的红细胞溶液在9000r/min下二次离心33min，弃去下层细胞碎片，将血红蛋白溶液装入透析袋中，置于流动自来水中透析9.7h，之后在58.6°C恒温下水浴9.4h，最后冷冻干燥得到血红蛋白粗制品，所述抗凝剂包含:柠檬酸51g，梓檬酸钠141g，葡萄糖165g，加水lOOgo
[0060]实施例25: —种以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，选取600g的血红蛋白粗制品，加水稀释到浓度为6%，之后加入145g的风味蛋白酶进彳丁一次酶解，风味蛋白酶为24800U/g，ph = 7.25，温度54.5°C环境下，水解5.33h，一次酶解后，降温至45.5°C，ph调节至9.5后，加入67g的碱性蛋白酶进行二次酶解，碱性蛋白酶为44400U/g，酶解时间
5.5h，之后高温灭酶:水浴灭酶19.2分钟，在4000r/min转速下离心llmin后弃去沉淀，得到上清液，为牛血红蛋白酶解液并冷冻干燥，得到血红蛋白多肽。
[0061]上述血红蛋白粗制品使用如下方法制备:选用新鲜牛血和抗凝剂，抗凝剂和鲜牛血按照1:7的比例混合后过滤，过滤后的血液在3200r/min下一次离心19.5min后，弃去上清液，收集下层红细胞，将收集的红细胞用6体积冷生理盐水，洗涤3次，之后进行超声波破碎，超声波破碎时加入0.2% NaHS03，加适当体积的水，放入超声波细胞破碎机中超声破碎一定时间，得到破碎的红细胞溶液，将得到的红细胞溶液在7200r/min下二次离心34min，弃去下层细胞碎片，将血红蛋白溶液装入透析袋中，置于流动自来水中透析8h，之后在60°C恒温下水浴8.5h，最后冷冻干燥得到血红蛋白粗制品，所述抗凝剂包含:柠檬酸55g，梓檬酸钠150g，葡萄糖158g，加水100g。
【主权项】
1.一种以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于主要包括如下步骤: a、原料准备:选取600g的血红蛋白粗制品，加水稀释到浓度为5%?6%； b、一次酶解:在a步骤的原料中加入100?150g的风味蛋白酶，pH= 6.5?7.5，温度50?55 °C环境下，水解4.5?5.5h ; C、降温:一次酶解后，将温度将为至43?46°C，pH调节至8.5?9.5 ; d、二次酶解:加入60?70g的碱性蛋白酶，酶解4.5?5.5h ; e:高温灭酶:水浴灭酶10?20分钟； f、离心:离心后弃去沉淀，得到上清液，为牛血红蛋白酶解液； g、冷冻干燥:将f步骤得到的上清液冷冻干燥，即得到血红蛋白多肽。2.如权利要求1所述的以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于:上述风味蛋白酶为20000?25000U/g。3.如权利要求1或2所述的以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于:上述碱性蛋白酶为40000?50000U/g。4.如权利要求1或2所述的以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于:上述离心在2000?4000r/min转速下离心5?15min。5.如权利要求1或2所述的以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于:上述a步骤的血红蛋白粗制品使用如下方法制备: 选用新鲜牛血和抗凝剂，抗凝剂和鲜牛血按照1:5?7的比例混合后过滤，过滤后的血液在2500?3500r/min下一次离心10?20min后，弃去上清液，收集下层红细胞，将收集的红细胞用4?6体积冷生理盐水，洗涤I?4次，之后进行超声波破碎，超声波破碎时加入0.1 %?0.2% NaHSO3,加适当体积的水，放入超声波细胞破碎机中超声破碎一定时间，得到破碎的红细胞溶液，将得到的红细胞溶液在7000r?9000/min下二次离心25?35min，弃去下层细胞碎片，将血红蛋白溶液装入透析袋中，置于流动自来水中透析8?12h，之后在50?60°C恒温下水浴8?12h，最后冷冻干燥得到血红蛋白粗制品，所述抗凝剂包含:柠檬酸40?55g，梓檬酸钠100?150g，葡萄糖100?170g，加水10g06.如权利要求3所述的以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于:上述a步骤的血红蛋白粗制品使用如下方法制备: 选用新鲜牛血和抗凝剂，抗凝剂和鲜牛血按照1:5?7的比例混合后过滤，过滤后的血液在2500?3500r/min下一次离心10?20min后，弃去上清液，收集下层红细胞，将收集的红细胞用4?6体积冷生理盐水，洗涤I?4次，之后进行超声波破碎，超声波破碎时加入0.1 %?0.2% NaHSO3,加适当体积的水，放入超声波细胞破碎机中超声破碎一定时间，得到破碎的红细胞溶液，将得到的红细胞溶液在7000r?9000/min下二次离心25?35min，弃去下层细胞碎片，将血红蛋白溶液装入透析袋中，置于流动自来水中透析8?12h，之后在50?60°C恒温下水浴8?12h，最后冷冻干燥得到血红蛋白粗制品，所述抗凝剂包含:柠檬酸40?55g，梓檬酸钠100?150g，葡萄糖100?170g，加水10g07.如权利要求4所述的以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于:上述a步骤的血红蛋白粗制品使用如下方法制备: 选用新鲜牛血和抗凝剂，抗凝剂和鲜牛血按照1:5?7的比例混合后过滤，过滤后的血液在2500?3500r/min下一次离心10?20min后，弃去上清液，收集下层红细胞，将收集的红细胞用4?6体积冷生理盐水，洗涤I?4次，之后进行超声波破碎，超声波破碎时加入0.1 %?0.2% NaHSO3,加适当体积的水，放入超声波细胞破碎机中超声破碎一定时间，得到破碎的红细胞溶液，将得到的红细胞溶液在7000r?9000/min下二次离心25?35min，弃去下层细胞碎片，将血红蛋白溶液装入透析袋中，置于流动自来水中透析8?12h，之后在50?60°C恒温下水浴8?12h，最后冷冻干燥得到血红蛋白粗制品，所述抗凝剂包含:柠檬酸40?55g，梓檬酸钠100?150g，葡萄糖100?170g，加水10g0
【专利摘要】本发明公开了一种以牛血红蛋白为原料制备血红蛋白多肽的方法，其特征在于主要包括如下步骤：a、原料准备：选取600g的血红蛋白粗制品，加水稀释到浓度为5％～6％；b、一次酶解：加入100～150g的风味蛋白酶，pH＝6.5～7.5，温度50～55℃环境下，水解4.5～5.5h；c、降温：一次酶解后，将温度将为至43～46℃，pH调节至8.5～9.5；d、二次酶解：加入60～70g的碱性蛋白酶，酶解4.5～5.5h；e：高温灭酶：水浴灭酶10～20分钟；f、离心：弃去沉淀，得到上清液，并冷冻干燥得到血红蛋白多肽。与现有技术相比，本发明具有生产工艺简单，制备出的多肽产品具有富含血红素、苦味值较低等特点。
【IPC分类】C12P21/06
【公开号】CN105331667
【申请号】CN201510934519
【发明人】卢士玲, 黄超, 郝玉兰, 王斌, 姬华, 张 杰, 张燕丽
【申请人】石河子大学, 新疆绿翔牧业有限责任公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年12月15日