一种根皮苷衍生物合成方法
【专利说明】-种根皮昔衍生物合成方法 -、技术领域：
[0001] 本发明设及一种生物催化制备根皮巧衍生物的方法，具体设及一种根皮巧衍生物 合成方法。 二、【背景技术】：
[0002] 根皮巧是由根皮素和葡萄糖巧结合而成的一种天然产物，属于自然界很少存在的 "少数黄酬"一二氨查尔酬类，其被证实具有多种生物活性，如降血糖、抗氧化、延缓衰老、治 疗高尿酸血症、抑制黑色素和抑菌作用等。
[0003] 黄酬类物质对生物体的有效性与其达到生物体活性部位的有效剂量密切相关。在 生物体内，根皮巧会被乳糖-根皮巧水解酶（LPH)水解成为根皮素，降低或者失去其生物 活性，因此，改善或者修饰黄酬类物质的结构，是提高其生物利用率的有效途径。目前黄酬 类物质结构修饰的方法有化学法、微生物法和酶法，化学催化成本较低，但反应位点不易 控制，反应副产物较多；微生物法生成的产物不易分离；酶法反应条件溫和，且位点选择性 高，是结构复杂的黄酬巧类结构修饰的普遍方法。 Ξ、
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种反应条件溫和，溫度低，生产能耗小，环境污染少的根皮巧衍生物 的合成方法。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种根皮巧衍生物合成方法，其特征 在于：所述的合成方法为：根皮巧与酷基供体在脂肪酶Novozym? 435的存在下反应得到 根皮巧衍生物；
[0006] 所述的根皮巧衍生物的反应式为：
[0007]
阳00引 a为反应条件：溶剂丙酬，脂肪酶Novo巧m'K435,47°C真空恒溫揽拌3化~4她；
[0009] R为酷基供体，酷基供体为C17H35COOH，。品iCOOH或C13H27COOH。
[0010] 所述的一种根皮巧衍生物合成方法，其特征在于：所述的具体合成方法为：
[0011] (1)根皮巧、酷基供体、分子筛3A、催化剂和丙酬在反应器内混合均匀，在45~ 48°C惰性气体条件下保溫，同时不断揽拌，反应36~4化后终止反应；
[0012] (2)然后采用丙酬作为洗脱剂将反应物洗脱入离屯、管中离屯、，将所有的反应产物 洗脱干净，收集上清液，将收集的上清液旋转蒸发至干，并称量旋干后的粗产物，采用硅胶 柱层析，合并含根皮巧衍生物的流份；
[001引做将合并的含根皮巧衍生物的流份真空浓缩，干燥，得产品。
[0014] 步骤1)中催化剂是脂肪酶Novo巧mK' 435,浓度0. 17~0. 26g/mL;
[0015] 根皮巧纯度> 98 %，反应体系中根皮巧的浓度0. 071~0.Ig/mL;
[0016] 揽拌W100~12化/min的速度进行。
[0017] 步骤似中硅胶柱层析方法为：采用干法上样，W丙酬-甲苯为洗脱剂进行4次梯 度洗脱，4次洗脱剂体积比比例为1:6、30:75、1:1、2:3，全程TLC板检测。
[0018] 步骤（3)中真空浓缩溫度为55~60°C，真空度为-0. 09MPa;
[0019] 干燥方法为：将浓缩物放在真空干燥箱中，在溫度55~60°C下真空干燥到产品恒 重。
[0020] 与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果： W21] 本发明采用酶法合成6" -0-豆違酸根皮巧醋、6" -0-硬脂酸根皮巧醋、6" -0-软脂酸根皮巧醋，确定了酶法合成的工艺路线和条件，产品质量符合产品质量控制 标准。
[0022] 本发明采用硅胶柱层析对反应产物中6" -0-豆違酸根皮巧醋、6" -0-硬脂酸根 皮巧醋、6" -0-软脂酸根皮巧醋进行分离纯化，确定了洗脱剂组成等条件对分离效果的影 响，分离出纯度高的根皮巧衍生物。 四、【具体实施方式】：
[0023] 一种根皮巧衍生物合成方法为：根皮巧与酷基供体在脂肪酶Novozym'w435的 存在下反应得到根皮巧衍生物；
[0024] 所述的根皮巧衍生物的反应式为： 阳0巧]
[0026] a为反应条件：溶剂丙酬，脂肪酶Novo巧nr"· 435,47°C真空恒溫揽拌3化~4她；
[0027] R为酷基供体，酷基供体为C17H35COOH，。品iCOOH或C13H27COOH。
[0028] 所述的具体合成方法为：
[0029] (1)根皮巧、酷基供体、分子筛3A(3A分子筛）、催化剂和丙酬在反应器内混合均 匀，在45~48°C惰性气体条件下保溫，同时不断揽拌，反应36~4化后终止反应；
[0030] 似然后采用丙酬作为洗脱剂将反应物洗脱入离屯、管中离心将所有的反应产物 洗脱干净，收集上清液，将收集的上清液旋转蒸发至干，并称量旋干后的粗产物，采用硅胶 柱层析，合并含根皮巧衍生物的流份；
[0031] (3)将合并的含根皮巧衍生物的流份真空浓缩，干燥，得产品。 阳0巧步骤1)中催化剂是脂肪酶Novozym'K435,浓度0. 17~0. 26g/mL;
[0033] 根皮巧纯度> 98 %，反应体系中根皮巧的浓度0. 071~0.Ig/mL;
[0034] 揽拌W100~120;r/min的速度进行。
[0035] 步骤（2)中硅胶柱层析方法为：采用干法上样，W丙酬-甲苯为洗脱剂进行4次梯 度洗脱，4次洗脱剂体积比比例为1:6、30:75、1:1、2:3，全程TLC板检测。
[0036] 步骤（3)中真空浓缩溫度为55~60°C，真空度为-0. 09MPa;
[0037] 干燥方法为：将浓缩物放在真空干燥箱中，在溫度55~60°C下真空干燥到产品恒 重。
[003引为了便于理解本发明，特列举W下实施例。 阳0例 实施例1
[0040] 取纯度为98 %的根皮巧0. 5g，脂肪酶Novozym*· 435 1. 2g，硬脂酸2.llg，分 子筛200mg溶于5血丙酬中，混合均匀后置于恒溫振荡器内（47°C，lOOr/min)，36h后用 薄层层析法判断反应终点，经硅胶柱层析得到硬脂酸根皮巧醋化642g产率为82% )。 古醒R(DMS0-de;500MHz) :5 10.62 (s，lH，Ar0H)，9.10 化rS，lH，Ar0H)，7.02 (d，2H，J =8. 0Hz，H-2，H-6)，6. 65(d，2H，J=8. 0Hz，H-3，H-5)，6. 02(s，lH，H-3 ' )，5. 83(s， )，5. 4Ubrs，lH，0H)，5. ：M化rs，2H，20H)，4. 96(d，lH，J=6. 9Hz，H-l")， 4. 28 化rd，lH，J= 11.OHz，H-6a" )，4. 14(dd，lH，J= 10. 4Hz，6. 7Hz，H-6b" )，3. 58 化r t，J= 7.9Hz，H-4")，3.31-3.21(m，細，2XH。，H-2"，H-3"，H-5"，0H)，2.75化rt， 2H，J=6.細z，2XHp)，2. 25(t，2H，J=6. 9Hz，2XH-2" ' )，1.44(m，2H，2XH-3"')， 1.22-1. 14(m，2 細，2(邸2))，0.88(brt，3H，J=6. 9Hz，邸3) ;1化NMR(DMS0-d6;125MHz): δ205. 09 (CO),173. 26 (OCO),165. 85 (C-4 ' ),164. 93 (C-6' ),161. 10 (C-2 ')， 155. 76(C-4)，131. 93(C-1)，129. 55(C-2,C-6)，115. 41 (C-3,C-5)，105. 64(C-1 ')， 101.09(C-1 " )，97.40(C-3 ' ),95.01 (C-5 ' )，76.90(C-3 " )，74.39(C-5 ")， 73. 58(C-2" )，70. 28(C-4" )，63. 52(C-6" )，45. 43(CJ，33. 87(C-2" ' )，31.77(Cp)， 29. 42,29. 35,29. 13 (C-4" '，C-5" '，C-6" '，C-7" '，C-8" '，C-9" '，C-10"'， C-n" '，C-12" '，C-13" '，C-14" '，C-15" '，C-16" ' )，24.85(C-3"')， 22. 55 (C-17" ' ),14.38 (C-18"')