专利名称：4-脱氧-4-表鬼臼毒素衍生物的制备方法
技术领域：
本发明涉及具有抗肿瘤活性并作为抗肿瘤剂而有用的新的4—脱氧—4—表鬼臼毒素衍生物或其药学上所允许的盐。
具有抗肿瘤作用的鬼臼毒素衍生物早为已知，作为其代表性的化合物可以举出鬼臼毒素的半合成衍生物如表鬼臼毒吡喃葡糖甙、表鬼臼毒噻吩糖苷等。但是这些化合物具有减少白血球、减少血小板、脱发、恶心、呕吐等较强的副作用，临床上存在着问题，尚未得到特别满意的化合物。
鉴于上述现有技术中存在的问题，本发明者们反复进行精心研究，结果发现，以下述通式(I)表示的新的4—脱氧—4—表鬼臼毒素衍生物或其药学上允许的盐具有很强的抗肿瘤活性，并可用作药物，从而完成了本发明。
也就是说，本发明提供了由通式(I)表示的4—脱氧—4—表鬼臼毒素衍生物或其药学上允许的盐。
由通式(I)表示的本发明化合物具有优异的抗肿瘤活性，能有效地治疗各类肿瘤。
因此，本发明提供一种含有有效量的上述通式(I)化合物或其药学上允许的盐和药物载体的抗肿瘤剂。
另外，本发明提供将上述通式(I)化合物或其药学上允许的盐给药于哺乳动物，以此治疗哺乳动物肿瘤的方法。
在上述通式(I)中，以R1表示的低级烷酰基可以是碳原子数为2—5的直链或支链的链烷酰基，如乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、三甲基乙酰基等，作为卤素原子可以例举氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。以Rx，Ry，Rz，R2，R3，Ra，Rb，Rc及Rd表示的低级烷基可以是碳原子数为1—6的直链或支链的烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基等。以R表示的低级链烯基可以是碳原子数为2—6的直链或支链的链烯基，如乙烯基、1—丙烯基、异丙烯基、烯丙基、2—丁烯基、2—甲基—2—丁烯基、3—戊烯基、4—己烯基等。具有羟基的低级烷基可以是具有1或2个羟基的碳原子数为1—6的直链或支链烷基，如羟甲基、2—羟乙基、2—羟丙基、3—羟丙基、2，3—二羟基丙基、2，3—二羟基丁基、2，3—二羟基戊基、2，3—二羟基己基等。具有酮醛基的低级烷基可以是具有α—或β—酮醛基的碳原子数为1—6的烷基，如2—氧代—2—甲酰基—1—乙基、2—氧代—3—甲酰基—1—丙基、3—氧代—3—甲酰基—1—丙基、3—氧代—4—甲酰基—1—丁基等。
另外在上述通式(I)中，以R2及R3表示的低级烷氧基可以是碳原子数为1—6的直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基，正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。环烷基可以是碳原子数为3—6的环烷基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。六员含氮杂环基可以举例如吡啶基、1—哌啶基、吗啉代基等杂环基。R2和R3相互结合形成环状结构并在此环状结构中进一步含有氧原子或氮原子的环状结构可以举例如吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪等。
作为本发明的4—脱氧—4—表鬼臼毒素衍生物的药学上允许的盐可以举出，例如甲酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、草酸等有机酸的盐，及盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等无机酸的盐。
在上述通式(I)化合物中较好的化合物是R1为氢原子或苄氧基羰基，R为—(CH2)nNR2R3所表示的化合物。
此外更好的化合物中，R1为氢原子，R为—(CH2)nNR2R3基，其中n表示2或3，R2及R3可以相同或不同，表示氢原子，—N(Ra)(Rb)基(Ra及Rb表示相同或不同的低级烷基，或Ra和Rb也可以相互结合形成低级烷基取代的哌嗪基)，被六员含氮杂环基或—N(Rc)(Rd)基(Rc及Rd可以相同或不同，表示低级烷基)取代的低级烷基，或也可以R2和R3相互结合形成环状结构，并在此环状结构中进一步含有氧原子或氮原子，在此环状结构上也可以进一步具有低级烷基或1—哌啶基。
以通式(I)表示的本发明化合物可以按照例如下列反应流程式1制备。
<反应流程式1> 下面对上述反应流程式中各步骤进行说明。
<A步骤>
将通式(II)表示的已知的4—表鬼臼毒素与通式(III)表示的低级链烯基硅烷，在适当的溶剂中在路易斯酸存在下进行反应，得到通式(I)中R为低级链烯基的可以通式(Ia)表示的衍生物。对于溶剂没有特殊限制，只要其不参与反应。例如，可以使用二氯甲烷、氯仿、1，2—二氯乙烷等卤化烃类，四氢呋喃、二噁烷等醚类的非质子性溶剂。可以使用的路易斯酸如四氯化钛、三甲基硅烷三氟甲磺酸盐、溴化锌、三氟化硼乙基醚等。所使用的反应物比例最好是，通式(III)化合物的用量为通式(II)化合物用量的1—5倍摩尔量，路易斯酸用量为通式(II)化合物用量的0.5—3倍摩尔量。而且，反应温度为—100～100℃，最好是—20—20℃。
<B步骤>
将由A步骤所得的以通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶剂中进行氧化，得到通式(I)中R为具有羟基的低级烷基的可用通式(Ib)表示的目的衍生物。可将例如四氯化碳、乙腈、乙酸、水、吡啶等单独或混合使用作为溶剂。可以使用氧化钌、高碘酸钠、四氧化锇等作为氧化剂。所使用的反应物比例最好是，对于通式(Ia)化合物为0.1—2倍摩尔量的氧化剂。反应温度为—10—80℃，较好的为0—20℃。
<C步骤>
将由A步骤所得的以通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶剂中同时进行氧化还原，得到通式(I)中R为具有—(CH2)mCHO基或酮醛基的低级烷基的可用通式(Ic)表示的目的衍生物。可将例如四氯化碳、二氯甲烷、乙酸、水、四氢呋喃、吡啶等单独或混合使用作为溶剂。可以使用例如硼烷—二甲基硫、硫戊基硼烷—二甲基硫等作为还原剂，可以使用例如铬酸、氯化铬酸吡啶鎓等作为氧化剂。所使用的反应物比例最好是，对于通式(Ia)化合物为0.5—2倍摩尔量的还原剂，1—3倍摩尔量的氧化剂。反应温度为—10—50℃，较好的是0—20℃。
<D步骤>
将由B步骤所得的以通式(Ib)表示的衍生物在惰性溶剂中进行氧化，也可以得到通式(I)中R为具有—(CH2)mCHO基或酮醛基的低级烷基的可用通式(Ic)表示的目的衍生物。可将例如四氯化碳、二氯甲烷、乙酸、四氢呋喃、乙醚、苯等单独或混合使用作为溶剂。可以使用高锰酸钾、四乙酸铅、氯化铬酸吡啶鎓等作为氧化剂。所使用的反应物比例最好是，对于通式(Ib)化合物为0.8—3倍摩尔量的氧化剂。反应温度为0—50℃，较好的是0—20℃。
<E步骤>
将由C步骤或D步骤所得的以通式(Ic)表示的衍生物，在惰性溶剂中在催化剂存在下进行还原，可以得到通式(I)中R为—(CH2)mCHO基的由通式(Id)表示的目的衍生物。对于溶剂没有特殊限制，只要其不参与反应，例如可将乙酸乙酯、甲醇、四氢呋喃等单独或混合使用。可以使用例如钯黑、白金等作为催化剂。氢气为常压至3个大气压，较好的是常压至2个大气压。反应温度为0—40℃，较好的是室温。
<F步骤>
将由E步骤所得的以通式(Id)表示的衍生物，在惰性溶剂中在碱存在下与酰化剂或硅烷基化剂进行反应，可以得到由通式(Ie)表示的目的衍生物。对于溶剂没有特殊限制，只要其不参与反应，例如可将四氯化碳、二氯甲烷、四氢呋喃、苯、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等单独或混合使用。可以使用例如吡啶、二甲基氨基吡啶、吡唑等作为碱。可以使用的酰化剂如乙酸酐、丙酸酐、丁酸酐、异丁酸酐、戊酸酐、氯乙酸酐等酸酐、乙酰氯、丙酰氯、正己酰氯、氯乙酰氯、二氯乙酰氯、三氯乙酰氯、苄氧羰基氯等酰基卤，等等。可以使用的硅烷基化剂如叔丁基二甲基氯硅烷、三异丙基氯硅烷、叔丁基三苯基氯硅烷等。所使用的反应物比例最好是，对于通式(Id)化合物为0.01-7倍摩尔量的碱，1—5倍摩尔量的酰化剂或硅烷基化剂。反应温度为0—50℃，较好的是0—20℃。
<G步骤>
将由C步骤或D步骤所得的以通式(Ic)表示的衍生物与以通式(Iv)表示的胺化合物，在惰性溶剂中进行还原胺化，可以得到通式(I)中R为—(CH2)nNR2R3基的由通式(If)表示的目的衍生物。对于溶剂没有特殊限制，只要其不参与反应。例如可将甲醇、乙醇等醇类，四氢呋喃、二噁烷等醚类，乙酸、甲酸等有机酸、水等单独或混合使用。可以使用例如硼氢化钠、氰基硼氢化钠等作为还原剂。所使用的反应物比例最好是，对于通式(Ic)化合物为0.9—3倍摩尔量的通式(Iv)表示的胺化合物，1—3倍摩尔量的还原剂。反应温度为0—50℃，较好的是0—20℃。
<H步骤>
将由G步骤所得的以通式(If)表示的衍生物在惰性溶剂中在催化剂存在下进行接触还原，可以得到由通式(Ig)表示的目的衍生物。对于溶剂没有特殊限制，只要其不参与反应，例如，可将乙酸乙酯、甲醇、四氢呋喃、乙腈等单独或混合使用。可以使用钯黑、白金等作为催化剂。氢气压力为常压至3个大气压，较好的是常压至2个大气压。反应温度为0—40℃，较好的是室温。
另外，用已知的方法将上述反应所得的本发明化合物与上述有机酸或无机酸，在如二氰甲烷、1，2—二氯乙烷、四氢呋喃、乙酸乙酯等溶剂中。在室温左右的温度下进行反应，可以形成盐。
由上述步骤得到的化合物(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)及(Ig)可以通过本领域中所用的浓缩、过滤、重结晶、各种色谱法等方法进行分离、提纯。
当将本发明化合物作为包括人在内的哺乳动物的恶性肿瘤的治疗剂使用时，根据目的可以采用各种给药方式，例如口服剂、注射剂、栓剂等任一种形式。而这些给药形式可以通过为本领域技术人员公知的常规配制方法进行制备。
制备口服用固态制剂时，在本发明化合物中加入赋形剂，并根据需要加入粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂、除臭剂等后，按照常规方法可以制成锭剂、被覆锭剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等。所使用的这类添加剂可以是本领域中通常使用的添加剂，例如，用作赋形剂的可以有乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸等；用作粘合剂的可以有水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、淀粉液、明胶液、羧甲基纤维素、羟基丙基纤维素、羟基丙基淀粉、甲基纤维素、乙基纤维素、紫胶、磷酸钙、聚乙烯吡咯烷酮等；用作崩解剂的可以有干燥淀粉、褐藻酸钠、琼脂粉末、碳酸氢钠、碳酸钙、月桂基硫酸钠、硬脂酸甘油单酸酯、乳糖等；用作润滑剂的可以有精制滑石、硬脂酸盐、硼砂、聚乙二醇等；用作调味剂的可以有白糖、橙皮、柠檬酸、酒石酸等。
制备口服用液体制剂时，在本发明化合物中添加调味剂、缓冲剂、稳定剂、除臭剂等，并可按照常规方法制成内服液剂、糖浆剂、甘油香酒剂等。在此所用的调味剂可以是上面列举的调味剂，而作为缓冲剂可以举出柠檬酸钠等，作为稳定剂可以举出西黄蓍胶、阿拉伯树胶、明胶等。
制备注射剂时，在本发明化合物中添加PH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等渗透剂、局部麻醉剂等，并可按照常规方法制成皮下、肌内、静脉内用的注射剂。用作该情况下的PH调节剂及缓冲剂的可以是柠檬酸钠、乙酸钠、磷酸钠等。用作稳定剂的可以是焦亚硫酸钠、EDTA、巯基乙酸、巯基乳酸等。用作局部麻醉剂的可以是盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因等。
制备栓剂时，在本发明化合物中加入本技术领域公知的制剂用载体，例如聚乙二醇、含水羊毛脂、可可油脂、脂肪酸甘油三酸酯、ゥィテッブゾ-ル(注册商标)等，根据需要加入ッィ-二(注册商标)类的表面活性剂等之后，可按常规方法进行制备。
在上述给药单位形式中应配入的本发明化合物的量，随着适用该药的患者的病情或药的剂型而变化，但通常就单位给药形式而言，口服剂为约1—1000mg，注射剂为约0.1～500mg，栓剂为约5～1000mg较为理想。具有上述给药形式的药剂的一日给药量，根据患者的症状，体重，年龄，性别等而不同，不能一概而定，通常成年人的1日量为0.1～5000mg，较好为1～1000mg，并可将其1次或分2～4次左右给药比较好。
下面阐述实施例、药理试验以及制剂例并进一步详细说明本发明。
实施例14—脱氧—4—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素(化合物1)的合成。
在1g(1.87mmol)4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—表鬼臼毒素的15ml二氯甲烷溶液中，加入426mg(3.73mmol)的三甲基烯丙基硅烷，并在-10—0℃下冷却。在该溶液中加入0.6ml三氟化硼乙醚，并搅拌1小时。反应后加入0.6ml吡啶，在冷的稀盐酸中用乙酸乙酯萃取。干燥后馏去有机层，并用柱色谱法(二氧化硅50g，展开溶剂氯仿)纯化，用乙醚结晶，得到1g4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素(化合物1)(收率95.7％)。熔点135-137℃[α]20D＝-70.03°(C＝1.30，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm
7.30-7.43(5H，m，-OCOOCH2Ph)、6.72(1H，s，5位H)、6.46(1H，s，8位H)、6.31(2H，s，2′位，6′位H)、5.94(1H，d，J＝1.5Hz，-OCH2O-)、5.93(1H，d，J＝1.5Hz，-OCH2O－)、5.80(1H，d-d-t，J＝17，10.
5，6.5Hz，-CH2CH＝CH2)、5.25(2H，s，-OCOOCH2Ph)、5.12(1H，d-d-t，J＝17，2，1.5Hz，-CH2CH=CH2)、5.11(1H，d-q，J＝10.5，1.5Hz，-CH2CH＝CH2)、4.58(1H，d，J＝5Hz，1位H)、4.25(2H，m，11位H)、3.68(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.27(1H，m，4位H)、3.07(1H，d-d，J＝14.5，5Hz，2位H)、2.93(1H，m，3位H)、2.57(1H，m,-CH2CH＝CH2)、2.42(1H，m，-CH2CH＝CH2)实施例24—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2，3—二羟基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物2)的合成在实施例1得到的1g(1.79mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素的2ml吡啶溶液中加入455mg(1.79mmol)的四氧化锇，并在室温搅拌1小时。反应后，加入0.80g亚硫酸氢钠的吡啶水溶液，搅拌30分钟。用乙酸乙酯萃取反应混合物，用稀盐酸、水洗涤之后，进行干燥。浓缩有机层后，将所得的残余物用柱色谱法(二氧化硅50g，展开溶剂；氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化。将浓缩所得的残余物，用乙醚结晶，得到1.0g4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2，3—二羟基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物2)(收率94.2％)。熔点170.5-172℃[α]20D＝-62.25°(C＝0.66，DMSO)1H-NMR(DMSO-d6)δppm7.40(5H，s，-OCOOCH2Ph)、6.94，6.84(1H，s，5位H)、6.44(1H，s，8位H)、6.34，6.32(2H，s，2′位，6′位H)、5.96(2H，s，-OCH2O-)、5.23(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.78(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)、4.58(1H，d，J＝6.0Hz，1位H)、4.52(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)、4.35(1H，m，11α位H)、4.17(1H，m，11β位H)、3.62(6H，s，3′位，5′位－OCH3)、3.17-3.69(4H，m，-CH2CH(OH)CH2OH，4位H)、2.94-3.02(1H，m，2位H)、2.19(1H，m，3位H)、1.67(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)、1.24-1.32(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)
实施例34—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物3)的合成在实施例2得到的1g(1.69mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2，3—二羟基—1—丙基)-4-表鬼臼毒素的80ml苯溶液中，加入795mg(1.79mmol)四乙酸铅，并在室温搅拌30分钟。反应后进行过滤，将滤液浓缩后得到残余物，用柱色谱法(二氧化硅70g，展开溶剂∶氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化，用乙醚结晶，得到934mg4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—甲酰甲基—4—表熔点180-182℃[α]20D＝-71.04°(C＝1.32，DMSO)1H—NMR(DMSO-d6)δppm9.73(1H，s，-CHO)、7.39(5H，s，-OCOOCH2Ph)、6.88(1H，s，5位H)、6.46(1H，s，8位H)、6.35(2H，s，2′位，6′位H)、5.96(2H，s，-OCH2O-)、5.23(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.54(1H，d，J＝3.6Hz，1位H)、3.96-4.32(1H，m，11α位H)、3.63(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.48-3.92(1H，m，11β位H)、2.56-3.40(5H，m，2位，3位，4位H，-CH2CHO)实施44—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物4)的合成在实施例1得到的4g(7.17mmol)的4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素的40ml四氢呋喃熔液中，在冰冷下滴入2M的硼烷—二甲基硫化物的4.3ml(8.6mmol)四氢呋喃溶液后，在室温下反应1小时，将浓缩反应液所得的残余物溶解于80ml二氯甲烷中，并加入3.0g(13.9mmol)氯化铬酸吡啶鎓，在室温下进行搅拌。反应后加入100ml乙酸乙酯，并用硅藻土进行过滤。将滤液进行浓缩，并把所得的残余物用柱色谱法(二氧化硅50g，展开溶剂∶己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)进行纯化，用乙醚结晶，得到1.85g4—脱氧-4′-脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物4)(收率44.9％)。熔点153-155℃[α]20D＝-69.09°(C＝0.38，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.83(1H，s，-CHO)、7.4O(5H，m，-OCOOCH2Ph)、6.83(1H，s，5位H)、6.45(1H，s，8位H)、6.28(2H，s，2′位，6′位H)、 5.94(2H，s，-OCH2O-)、5.25(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.58(1H，d，J＝4.6Hz，1位H)、4.37(1H.m.11α位H)、4.11(1H，m，11β位H)、3.67(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.04-3.10(1H，m，4位H)、2.86-3.00(2H，m，2位，3位H)、2.49-2.67(2H，m，-CH2CHO)、1.83-2.21(2H，m，-CH2CH2CHO)实施例54—脱氧—4′—脱甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物5)的合成在实施例3得到的100mg(0.178mmol)的4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的10ml乙酸乙酯∶甲醇(1∶1)溶液中加入30mg 5％钯/碳，并在氢气流中(1大气压)进行接触还原。反应后，滤去5％钯/碳，在减压下浓缩滤液。将所得的残余物用乙醚结晶，得到75mg4—脱氧—4′—脱甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物5)(收率98.9％)。熔点237-239℃[α]20D＝-110.12°(C＝0.38，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.72(1H，s，-CHO)、8.22(1H，s，4′-OH)、6.86(1H，s，5位H)、6.43(1H，s，8位H)、6.21(2H，s，2′位，6′位H)、5.96，5.94(2H，s，-OCH2O-)、4.41(1H，d，J＝5.28Hz，1位H)、4.15(1H，d-d，J＝7.9，3.9Hz，11α位H)、3.66-3.73(1H，m，11β位H)、3.62(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、2.56-3.40(5H，m，2位，3位，4位H，—CH2CHO)。
实施例64—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—氧代—2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物6)的合成在实施例2得到的1 00mg(0.17mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2，3—二羟基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素的5ml二氯甲烷溶液中，加入73mg(0.34mmol)氯化铬酸吡啶鎓，并在室温下搅拌1小时。反应后加入乙酸乙酯，用稀盐酸、饱和食盐水洗涤之后，用硫酸镁干燥。蒸馏除去溶剂后，用柱色谱法(二氧化硅20g，展开溶剂氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化，用乙醚结晶，得到45mg 4—脱氧—4′—脱甲基—4′-0-苄氧羰基—4—(2—氧代—2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物6)(收率45.0％)。1H-NMR(CDCl3)δppm9.85(1H，s，-CH2COCHO)、7.38(5H，m，-OCOOCH2Ph)、6.61(1H，s，5位H)、6.45(1H，s，8位H)、6.31(2H，s，2′位，6′位H)、5.93(2H，s，-OCH2O-)、 5.25(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.55(1H，d，J＝3.6Hz，1位H)、4.12-4.4O(1H，m，11α位H)、3.48-4.00(1H，m，11β位H)、3.68(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、2.60-3.08(5H，m，2位，3位，4位H，-CH2COCHO)实施例74—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—氯乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物7)的合成在实施例5得到的50mg(0.117mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的5ml四氢呋喃溶液中，加入50mg(0.292mmol)氯乙酸酐和10mg(0.08lmmol)甲胺基吡啶，并在室温下搅拌1小时。反应后蒸馏除去溶剂，将所得的残余物分别用薄层柱色谱法(展开溶剂氯仿∶甲醇＝30∶1)纯化。将洗脱得到的残余物用乙酸乙酯—正己烷结晶后，进行滤集分别得到50mg4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—氯乙酰—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物7)(收率90.0％)。熔点119-121℃[α]20D＝-85.21°(C＝0.399，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.64(1H，s，-CHO)、6.40(1H，s，5位H)、6.25(1H，s，8位H)、6.10(2H，s，2′位，6′位H)、5.73(1H，s，-OCH2O-)、5.72(1H，s，-OCH2O-)、4.36(1H，d，J＝4.9Hz，1位H)、4.12(2H，s，ClCH2CO-)、4.06(1H，d，J＝7.2Hz，11α位H)、3.61(1H，m，11β位H)、3.46(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.37(1H，t，J＝1O.5Hz，2位H)、2.51-2.85(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)实施例84—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—三氯乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物8)的合成在由实施例5得到的4.26g(10mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的50ml二氯甲烷溶液中，加入2.36g(13mmol)三氯乙酰氯和1.58g(13mmol)二甲胺基吡啶，并在室温下搅拌过夜。反应后馏去溶剂，将所得的残余物用柱色谱法(展开溶剂乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1)纯化。将洗脱所得的残余物，用甲醇结晶后，滤集，分别得到4.10g 4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—三氯乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物8)(收率71.7％)。[α]20D＝-68.96°(C＝0.58，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.88(1H，s，-CHO)、6.63(1H，s，5位H)、6.47(1H，s，8位H)、6.35(2H，s，2′位，6′位H)、5.96(1H，s，-OCH2O-)、4.61(1H，d，J＝5.2Hz，1位H)、4.30(1H，t，J＝8.9Hz.11α位H)、3.80(1H，m，11β位H)、3.72(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.60(1H，t，J＝9.6Hz，2位H)、2.70-3.10(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)实施例94—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物9)的合成在由实施例5得到的50mg(0.117mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的5ml四氢呋喃溶液中，加入50mg(0.49mmol)乙酸酐和10mg(0.081mmol)二甲胺基吡啶，在室温下搅拌过夜。反应后馏去溶剂，并将所得的残余物分别用薄层色谱法(展开溶剂氯仿∶甲醇＝30∶1)纯化。将洗脱得到的残余物用正己烷结晶后，滤集得到40mg 4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物9)(收率73.0％)。熔点130-133℃[α]20D＝-88.40°(C＝0.5，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.55(1H，s，-CHO)、6.30(1H，s，5位H)、6.16(1H，s，8位H)、5.99(2H，s，2′位，6′位H)、5.63(1H，s，-OCH2O-)、5.62(1H，s，-OCH2O-)、4.27(1H，d，J＝4.9Hz，1位H)、3.98(1H，t，J＝.8.2Hz，11α位H)、3.51(1H，m，11β位H)、3.37(6H.s，3′位，5′位-OCH3)、3.28(1H，t，J＝9.9Hz，2位H)、2.42-2.75(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)、1.97(3H，s，-OCOCH3)实施例104—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—叔丁基二苯基甲硅烷基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物10)的合成在由实施例5得到的50mg(0.117mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的5ml二甲基甲酰胺溶液中，加入33mg(0.12mmol)叔丁基二苯基甲硅烷基氯和79mg(0.64mmol)二甲基吡啶，并在室温下搅拌过夜。反应后，加入乙酸乙酯一水，并进行萃取、干燥。然后蒸馏除去溶剂，将所得的残余物分别用薄层色谱法(展开溶剂氯仿∶甲醇＝30∶1)纯化，将洗脱得到的残余物在减压下进行干燥得到35mg4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—叔丁基二苯基甲硅烷基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物l0)(收率37.4％)。1H-NMR(CDC13)δppm9.71(1H，s，-CHO)、7.71(4H，m， 、7.38(6H，m，-Si 、6.50(1H，s，5位H)、6.38(1H，s，8位H)、6.06(2H，s，2′位，6′位H)、5.87(2H，s，-OCH2O-)、4.40(1H，d，J＝4.9Hz，1位H)、4.16(1H，t，J＝7.5Hz，11α位H)、3.70(1H，m，11β位H)、3.43(1H，t，J＝9.5Hz，2位H)、3.28(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、2.47-2.84(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)、1.05(9H，s，-Si-t-Bu)实施例114—脱氧—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物11)的合成在500mg(1.2mmol)4—表鬼臼毒素的10ml二氯甲烷溶液中，加入274mg(2.4mmol)三甲基烯丙基硅烷，并在-10～0℃下冷却。向该溶液中加入0.35ml三氟化硼乙醚，并搅拌4小时。反应后，加入0.35ml吡啶，并用乙酸乙酯萃取。干燥后馏去有机层，用柱色谱法(二氧化硅50g，展开溶剂乙酸乙酯∶己烷＝1∶2)纯化后，用乙醚、己烷结晶，并滤集，得到4—脱氧—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素450mg(收率81.1％).然后在200mg(0.46mmol)的该化合物的4ml吡啶溶液中，加入116mg(0.46mmol)四氧化锇，并在室温搅拌1小时。反应后，加入0.1g亚硫酸氢钠的吡啶水溶液，搅拌30分钟。用乙酸乙酯萃取反应混合物，用稀盐酸、水洗涤之后，进行干燥。将浓缩有机层后得到的残余物，用柱色谱法(二氧化硅50g，展开溶剂氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化。将浓缩所得的残余物用乙醚、己烷结晶，滤集，得到194mg4—脱氧—4—(2，3—二羟基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(收率89.3％)。熔点144—145℃[α]20D＝-73.42°(C＝0.52，CHCL3)然后在100mg(0.21mmol)该化合物的10ml苯溶液中加入113mg(0.25mmol)四乙酸铅，在室温搅拌20分钟。反应后进行过滤，将浓缩滤液得到的残余物用柱色谱法(二氧化硅20g，展开溶剂，氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化，并用乙醚∶己烷(1∶1)结晶，得到90mg4—脱氧—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物11)(收率97.4％)。熔点157—159℃[α]20D＝-105.82°(C＝1.253，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.84(1H，s，-CHO)、6.29(1H，s，5位H)、6.46(1H，s，8位H)、6.28(2H，s，2′位，6′位H)、5.93(2H，s，-OCH2O-)、4.52(1H，d，J＝3.6Hz，1位H)、4.12-4.36(1H，m，11α位H)、3.79(3H，s，4′位-OCH3)、3.74(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.40-3.92(1H，m，11β位H)、2.56-3.24(5H，m，2位，3位，4位H，-CH2CHO)实施例124—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物12)的合成在0.1ml50％二甲胺水溶液、3ml甲醇的混合液中先加入0.1ml乙酸和35mg(0.56mmol)氰基硼氢化钠，然后加入由实施例4得到的300mg(0.52mmol)4—脱氧—4′—0—苄氧羰基—4—(2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素，在室温下反应1小时。反应后，在反应液中加入30ml氯仿之后，用饱和碳酸氢钠水溶液、水洗涤、再用硫酸镁干燥。将馏去溶剂而得到的残余物用柱色谱法(二氧化硅20g，展开溶剂氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化，得到245mg4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物12)(收率78％)。
实施例134—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物13)的合成在15mg(0.167mmol)的50％二甲胺水溶液，5ml甲醇的混合液中，先加入0.1ml乙酸和10mg(0.19mmol)氰基硼氢化钠，然后加入由实施例3得到的100mg(0.178mmol)4—脱氧—4—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素，在室温下反应1小时。反应后，在反应液中加入100ml乙酸乙酯之后，用饱和碳酸氢钠水溶液、水洗涤，再用硫酸镁干燥。将馏去溶剂而得到的残余物用薄层色谱法(展开溶剂氯仿∶甲醇＝5∶1)纯化，得到60mg4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物13)(收率57.2％)。
实施例144—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—N—甲基—N—环己胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物14)的合成在180mg(1.81mmol)环己胺的10ml甲醇溶液中，先加入0.1ml乙酸和85mg(1.35mmol)氰基硼氢化钠，然后再加入由实施例3得到的500mg(0.9mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素，在室温下反应1小时。反应后，在反应液中进—步加入0.1ml37％甲醛水溶液后，在室温下反应1小时。在反应液中加入氯仿，用饱和碳酸氢钠水溶液、水洗涤，并用硫酸镁干燥。将馏去溶剂得到的残余物用柱色谱法(二氧化硅20g，展开溶剂氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化，得到470mg4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—N—甲基—N—环己胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物14)(收率79％)。
实施例154—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物15)的合成在38mg(0.53mmol)二乙胺，10ml甲醇的混合液中加入0.1ml乙酸和52mg(0.82mmol)氰基硼氢化钠，然后加入由实施例3得到的300mg(0.53mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素，在室温下反应1小时。反应后，在反应液中加入氯仿，用饱和碳酸氢钠、水洗涤，并用硫酸镁干燥。将馏去溶剂得到的残余物用柱色谱法(二氧化硅20g，展开溶剂氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化，得到175mg 4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物15)(收率53.5％)实施例16～27用实施例12—15同样的方法合成表1所示的化合物16—27。
表1
实施例284—脱氧—4′—脱甲基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物28)的合成在由实施例12得到的230mg(0.38mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4—0—苄氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素的4ml乙酸乙酯∶甲醇(1∶1)溶液中，加入50mg 10％钯—碳，在1大气压的氢气流中在室温下反应4小时。滤去催化剂之后，将馏去溶液所得的残余物用柱色谱法(二氧化硅5g，展开溶剂；氯仿∶甲醇＝20∶1)进行纯化，进一步在2ml二氯乙烷中溶解，并加入0.2ml4N—盐酸/乙酸乙酯。将减压下浓缩所得的残余物用乙醚结晶，得到110mg4—脱氧—4′—脱甲基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素盐酸盐(化合物28)(收率61.5％)。
实施例294—脱氧—4′—脱甲基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物31)的合成在由实施例15得到的160mg(0.25mmol)4—脱氧—4′—脱甲基—4′—0—苄氧羰基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素的20ml乙酸乙酯∶甲醇(1∶1)溶液中加入20mg 10％钯—碳，在1大气压的氢气流中，并在室温下反应10小时。过滤除去催化剂之后，将在减压下浓缩而得的残余物用乙醚结晶，得到102mg4—脱氧—4′—脱甲基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物31)(收率84.3％)。
实施例30～53
用实施例28及29相同的方法合成表2中所示的化合物29，30，32～53。
表2
药理试验1将P388小鼠白血病细胞，以每孔1×103个细胞(Cells/well)接种于96孔平板上，并培养24小时。将试验化合物溶解于二甲基甲酰胺之后，用媒介物稀释成各种浓度，并添加于各孔中继续进行培养。接触三天之后，将平板以戊二醛进行固定，并通过结晶紫染色法计测细胞数。使控制的细胞数减少50％作为药剂浓度(ED50)表示各化合物的杀菌效果。结果示于表3。
表3
药物试验2将L1210小鼠白血病细胞以每只鼠1×105个细胞(Cells/mouse)移植于7周龄的雄CDF1小鼠(一群6只)的腹腔内。将试验化合物以下表4中所示的量溶解在含有3.5％的二甲亚砜和6.5％的司本80的生理盐水中，之后从移植的第二天起5天内，在腹腔内共给药5次。将只给于含有3.5％的二甲亚砜和6.5％的司本80的生理盐水而控制的情况与之相比，求出寿命延长增加率。结果示于表4。
表4
下面举出用本发明化合物的制剂例。
制剂例1锭剂用下面的配合比例，根据常法制备锭剂。
化合物34 100mg乳糖 47mg玉米淀粉 50mg结晶纤维素50mg羟基丙基纤维素15mg滑石 2mg硬脂酸镁 2mg乙基纤维素30mg不饱合脂肪酸甘油酯 2mg二氧化钛 2mg每1锭300mg
制剂例2颗粒剂以下面的配合比例，用常法制备颗粒剂。
化合物35 200mg甘露糖醇 540mg玉米淀粉 100mg结晶纤维素 100mg羟基丙基纤维素 50mg滑石10mg每1包 1000mg制剂例3细粒剂以下面的配合比例，根据常法制备细粒剂。
化合物43 200mg甘露糖醇 520mg玉米淀粉 100mg结晶纤维素 100mg羟基丙基纤维素 70mg滑石10mg每1包 1000mg制剂例4 胶囊剂以下面的配合比例，根据常法制备胶囊剂。
化合物45 100mg乳糖50mg玉米淀粉47mg结晶纤维素 50mg
滑石 2mg硬酯酸镁 1mg每1胶囊250mg制剂例5 注射剂以下面的配合比例，根据常法制备注射剂。
化合物47 100mg注射用蒸馏水适量每1管中 2ml制剂例6 栓剂以下面的配合比例，根据常法制备栓剂。
化合物53 100mgゥィテップゾ-ルS—55 1400mg(从月桂酸 至硬脂酸的饱和脂肪酸的单一，二一甘油酯混合物，ダィナスィトノ-ベル社制)每1个 1500mg
权利要求
1.一种通式(Ic)表示的衍生物的制备方法 式中，R4表示甲基、苄氧基、也可是有卤原子的低级烷酰基、或-Si(Rx)(Ry)(Rz)基(其中，Rx、Ry和Rz相同或不同，表示低级烷基或苯基)，R7表示-(CH2)mCHO基(其中m为1或2)，所述方法的特征在于，使通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶剂中同时进行氧化还原，由此制得通式(Ic)表示的衍生物，通式(Ia)为 式中，R4的定义同上，R5表示低级链烯基。
2.一种通式(Ic)表示的衍生物的制备方法， 式中，R4和R7的定义同上，所述方法的特征在于，将通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶剂中进行氧化，由此得到通式(Ib)表示的衍生物，使所得的(Ib)表示的衍生物在惰性溶剂中进行氧化，藉此可制得通式(Ic)表示的衍生物，通式(Ia)为 式中R4定义同上，R5表示低级链烯基，通式(Ib)为 式中，R4定义同上，R6表示有羟基的低级烷基。
全文摘要
本发明涉及式(Ic)所示衍生物的两种制法。其一是使式(Ia)所示衍生物在惰性溶剂中同时进行氧化还原制取(Ic)。其二是使式(Ia)所示衍生物在惰性溶剂中进行氧化制得(Ib)，然后使(Ib)衍生物在惰性溶剂中进行氧化制取(Ic)。(Ic)衍生物用于制备(Ig)表示的4-脱氧-4-鬼臼毒素衍生物。后者可作抗肿瘤剂的有效成分。上述通式中各符号含义参见说明书。
文档编号A61K31/357GK1126723SQ9510339
公开日1996年7月17日 申请日期1995年5月18日 优先权日1991年1月25日
发明者寺田忠史, 藤本胜彦, 野村诚, 山下纯一, 武田节夫, 小武内尚, 山口秀夫, W·康斯坦蒂 申请人:大鹏药品工业株式会社