一种从珠子参中制备20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从珠子参中制备20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的方法，属于天然药物化学领域。
【背景技术】
[0002]珠子参系五加科植物珠子参Panax japonicus C.A.Mey.var.major (Burk.)C.Y.ffu et Κ.M.Feng或羽叶三七Panax japonicus C.A.Mey.var.bipinnatif idus (Seem.)
C.Y.ffu et Κ.M.Feng的干燥根茎。秋季采挖，除去粗皮和须根，干燥；或蒸(煮)透后干燥。具有补肺养阴，祛瘀止痛，止血之功能；用于气阴两虚，烦热口渴，虚劳咳嗽，跌扑损伤，关节痹痛，咳血，吐血，衄血，崩漏，外伤出血。
[0003]到目前为止人们从珠子参中分得多种皂苷类化合物，其中主要包括人参皂苷Ro，竹节参皂苷IVa，竹节参皂苷V，人参皂苷Re，人参皂苷Rd，人参皂苷Rgl、人参皂苷Rg2，珠子参苷F1、F2、F3、F4、F5、F6，20-葡萄糖-人参皂苷Rf等皂苷类化合物，其中人参皂苷Ro、竹节参皂苷Iva、竹节参皂苷V、人参皂苷Re、人参皂苷Rd研究得较多，而关于20-葡萄糖-人参皂苷Rf的报道则很少。
[0004]因为不同的皂苷单体具有不同的生物活性，比如说人参皂苷1?&是所有人参皂苷中抗疲劳活性最强的人参皂苷，而人参皂苷Rb2具有最强的降血脂作用。在研制开发新药或保健食品的过程中往往涉及设法获得各种皂苷单体，因此发明能够简单地获得单体皂苷的新方法是一件非常有意义的工作。
[0005]利用柱层析的方法可以从珠子参中分得20-葡萄糖-人参皂苷Rf，但其过程较为繁琐，使用的有机溶剂较多，且得到的单体纯度较低，产率低。
【发明内容】
[0006]本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种从珠子参中制备20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的方法，该方法得到的单体纯度较高，产率高。
[0007]为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案:
[0008]—种从珠子参中制备20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的方法，制备含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的组分，利用高速逆流色谱方法从含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的组分中分离20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体，其中高速逆流色谱条件为:以体积比为4?6:1:5?7的正丁醇-乙酸乙酯-水作为高速逆流色谱分离的溶剂系统。
[0009]在上述方案中优选的是，其中高速逆流色谱条件为:以体积比为4: 1: 5的正丁醇-乙酸乙酯-水作为高速逆流色谱分离的溶剂系统。
[0010]在上述方案中优选的是，高速逆流色谱分离的条件还包括:流速为2mL.min \转速为800r.min \检测波长为203nm。
[0011]在上述方案中优选的是，利用高速逆流色谱分离20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的具体操作为:取正丁醇1200mL，乙酸乙酯300mL，水1500mL，置2000mL的分液漏斗中，振荡摇匀，静置过夜，以上相为固定相，下相为流动相，精确称取所述含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的组分170mg，用10mL下相溶解，作为样品溶液，以30mL.min 1将固定相充入高速逆流色谱中，运行20min，以2mL *min 1导入流动相，至流出的体积恒定为止，注入样品溶液，收集含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf的流出液，减压回收溶剂，得所述20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体。
[0012]在上述任一方案中优选的是，制备所述含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的组分的方法为:取珠子参提取物用以体积比为5?7:1:0.4?1的二氯甲烷:甲醇:水为流动相进行硅胶柱层析，得到含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf部分；再将含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf部分以体积比为1:1.5?2.5的甲醇-水为流动相进行0DS柱层析分离，得到含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf组分。
[0013]在上述任一方案中优选的是，制备所述含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的组分的方法为:取珠子参提取物用以体积比为6:1:0.5的二氯甲烷:甲醇:水为流动相进行硅胶柱层析，得到含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf部分；再将含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf部分以体积比为1:2的甲醇-水为流动相进行0DS柱层析分离，得到含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf组分。
[0014]在上述任一方案中优选的是，所述珠子参提取物的制备方法为:将珠子参粉碎，用水或含水乙醇溶液回流提取，水提取液直接过大孔吸附树脂吸附，乙醇提取液回收乙醇至无醇味后过大孔吸附树脂吸附，乙醇或甲醇解吸，减压回收溶剂得所述珠子参提取物。
[0015]在上述任一方案中优选的是，所述珠子参提取物的制备方法为:取珠子参10公斤，70%乙醇水回流提取3次，乙醇用量分别为10、8、8倍(V/V)，回流时间分别为1.5h、
1.0h、l.0h，合并三次提取液，回收溶剂，干燥后得到所述珠子参提取物1400g。
[0016]本发明的有益效果:发明人发现柱层析结合高速逆流色谱(HSCCC)分离20-葡萄糖-人参皂苷Rf，其过程简单，大大减少有机试剂的用量，且得到单体的纯度大于95%。本发明是首次使用高速逆流色谱(HSCCC)方法分离20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体的新方法。本发明获得的20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体可用于制备药物组合物、保健食品及其他产品Ο
【具体实施方式】
[0017]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0018]实施例1
[0019]珠子参10公斤，70%乙醇水回流提取3次，乙醇用量分别为10、8、8倍(V/V)，回流时间分别为1.5h、l.0h、l.0h，合并三次提取液，回收溶剂，干燥后得到珠子参提取物1400go
[0020]取珠子参提取物50g，用硅胶柱层析分离，流动相为二氯甲烷:甲醇:水(6:1:0.5，体积比)，得到含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf的组分B 10g ;将组分B用0DS柱层析分离，流动相为甲醇-水(1:2，体积比)，得到含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf的组分I 8g ;将组分I用高速逆流色谱(HSCCC)进行分离，以溶剂配比为正丁醇-乙酸乙酯-水(4: 1: 5，体积比)作为制备型逆流色谱分离的溶剂系统，流速为2mL.min \转速为800r.min \检测波长为203nmo
[0021]具体操作如下:取正丁醇1200mL，乙酸乙酯300mL，水1500mL，置2000mL的分液漏斗中，振荡摇匀，静置过夜。以上相为固定相，下相为流动相，精确称取组分I粉末170mg，用lOmL下相溶解，作为样品溶液，备用。
[0022]以30mL.η?η 1将固定相充入HSCCC中，运行20min ;以2mL.η?η 1导入流动相，至流出的体积恒定为止，注入样品溶液。根据HSCCC色谱峰接取每段流份，收集含有20-葡萄糖-人参皂苷Rf的流出液，减压回收溶剂，得所述20-葡萄糖-人参皂苷Rf单体。
[0023]将得到的20-葡萄糖-人参皂苷Rf用HPLC-ELSD检测，其纯度为99.5 %。
[0024]HPLC-ELSD的色谱条件如下。
[0025]色谱柱:AgilentEclipse XDB-C18 (ODS，4.6 X 250mm，5 μ m)；
[0026]流动相:乙腈-水(20:80);流速:1.0mL/min ;柱温:30°C ；
[0027]进样量:20 μ L ;ELSD检测器漂移管温度:109°C ;撞击器状态:关闭；
[0028]载气压力:2.56bar ;放大倍数:1.0倍。
[0029]获得的20-葡萄糖-人参皂苷Rf的核磁数据:
[0030]13C NMR(C5D5N, 150MHz) δ c:39.58 (C_l)，27.91 (C_2)，78.81 (C_3)，40.34 (C_4)，61.53 (C-5)，80.03 (C_6)，45.06 (C_7) ,41.30 (C_8)，50.08 (C_9)，39.79 (C-10)，31.07(C-11)，70.29(C-12)，49.32(C_13)，51.52(C_14)，30.82(C_15)，26.76(C_16)，51.65 (C-17) , 17.71(C-18)，17.64(C-19)，83.40(C-20)，22.43 (C-21)，36.24 (C-22)，23.33 (C-23)，126.12 (C-24)，131.05 (C-25)，25.90 (C-26)，17.89 (C-27)，32.20 (C-28)，16.89(C-29)，17.28(C-30)。6-glu:103.97(C-1 ' )，79.45 (C_2 ' )78.20(C_3 ')，71.83(C-4' ) ,80.07 (C-5r ),63.04(06, )。2' -glu: 103.97 (C_l " )，76.16(C_2")，78.39(C-3" )，72.48(C-4" )，79.71(C_5" )，63.49(C_6" )。20-glu:98.37 (C_l"')，75.26(0-2^ r ) ,78.55(0-3^ r ),71.83(0-4^ r ),78.00(0-5^ r ),63.04(0-6^ r )。
[0031]匪R(C