中搅拌过夜，他克莫司最终浓度为10mg/mL，然后透析除去未包合药物，流延得到改性β-环糊精/壳聚糖载药复合膜。
[0049]实施例3
[0050](1)制备中间产物环糊精与丙烯酸的反应。在蒸馏水中加热溶解环糊精，加入少量聚乙二醇混合物(PEG-1000和PEG-400按摩尔比1:1混合)改性和少量催化剂NaH2P04，然后加入交联剂(丙烯酸)，70°C回流反应3h，经丙酮沉淀和洗涤得到中间产物；所述的环糊精与交联剂的摩尔比为2.5:1。
[0051](2)复合物的制备:将壳聚糖溶解于2%的乙酸溶液中，加入步骤⑴得到的中间产物，加入少量催化剂，70°C回流反应5h，收集产物，得到改性β -环糊精/壳聚糖复合物；所述的壳聚糖中的壳聚糖单体与中间产物的摩尔比为3:1。
[0052](3)将他克莫司溶解于乙醇，加入步骤(2)得到的改性β -环糊精/壳聚糖复合物中搅拌过夜，他克莫司最终浓度为8mg/mL，然后透析除去未包合药物，流延得到改性β -环糊精/壳聚糖载药复合膜。
[0053]实施例4
[0054](1)制备中间产物:β -环糊精与环氧氯丙烷的反应。在蒸馏水中加热溶解β -环糊精，加入少量聚乙二醇(PEG-5000)改性和少量催化剂NaH2P04，然后加入交联剂(环氧氯丙烷)，50°C回流反应lh，经丙酮沉淀和洗涤得到中间产物；所述的β-环糊精与交联剂的摩尔比为2:1。
[0055](2)复合物的制备:将壳聚糖溶解于2%的乙酸溶液中，加入步骤⑴得到的中间产物，加入少量催化剂，50°C回流反应3h，收集产物，得到改性β -环糊精/壳聚糖复合物；所述的壳聚糖中的壳聚糖单体与中间产物的摩尔比为2:1。
[0056](3)将他克莫司溶解于乙醇，加入步骤(2)得到的改性β -环糊精/壳聚糖复合物中搅拌过夜，他克莫司最终浓度为5mg/mL，然后透析除去未包合药物，流延得到改性β -环糊精/壳聚糖载药复合膜。
[0057]实施例5
[0058](1)制备中间产物:β-环糊精与丙烯酸和环氧氯丙烷的混合物(按摩尔比1:1混合)的反应。在蒸馏水中加热溶解环糊精，加入少量聚乙二醇混合物(PEG-400和PEG-5000按摩尔比1:1混合)改性和少量催化剂NaH2P04，然后加入交联剂(按摩尔比1:1混合的丙烯酸和环氧氯丙烷的混合物)，50°C回流反应lh，经丙酮沉淀和洗涤得到中间产物；所述的环糊精与交联剂的摩尔比为2:1。
[0059](2)复合物的制备:将壳聚糖溶解于2%的乙酸溶液中，加入步骤⑴得到的中间产物，加入少量催化剂，50°C回流反应3h，收集产物，得到改性β -环糊精/壳聚糖复合物；所述的壳聚糖中的壳聚糖单体与中间产物的摩尔比为4:1。
[0060](3)将他克莫司溶解于乙醇，加入步骤(2)得到的改性β -环糊精/壳聚糖复合物中搅拌过夜，他克莫司最终浓度为5mg/mL，然后透析除去未包合药物，流延得到改性β -环糊精/壳聚糖载药复合膜。
[0061]实施例6药物缓释实验
[0062]按照实施例1的方法制备的改性β -环糊精/壳聚糖载药复合膜，用透析袋除去未负载的药物后，转入另一透析袋；置于pH 7.4的PBS溶液中，37°C下恒温孵育，设置三个平行组。每组定时取出2mL PBS溶液，再向其补入2mL新鲜的PBS溶液。所取液检测光吸收值，从而探究释放量的变化，lh累积缓释量25%，10h累积缓释量45%，24h累积缓释量60 %，48h累积缓释量71 %，120h累积缓释量79 %，之后趋于稳定，可以得出，缓释量慢慢增加，最后趋于稳定，缓释效果良好。
[0063]实施例7抑菌试验
[0064]茄病镰刀菌(Fusarium solani) (CGMCC3.1829，购自中国医学科学院微生物所中国医学真菌保藏管理中心)和烟曲霉菌(Aspergillus funigatus) (AS3.772，购自中国医学科学院微生物所中国医学真菌保藏管理中心)，28°C下培养。待形成较多菌落后，生理盐水洗脱，并稀释至105cfu/mL，各取15 μ L涂板(LB固体培养基:胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、NaCl 10g/L、琼脂15?20g/L，调pH至7.2，高压灭菌)。取5片实施例1得到的直径8mm的改性β -环糊精/壳聚糖载药复合膜，贴附于涂抹过菌液的平板上，然后置于恒温培养箱中培养。对茄病镰刀菌的抑菌圈直径为12mm，对烟曲霉菌的抑菌圈直径为11mm，说明制剂对细菌有较好的抑菌效果。
[0065]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种改性β -环糊精/壳聚糖复合物的制备方法，其特征在于包含如下步骤: (1)制备中间产物:在水中加热溶解β-环糊精，加入改性剂和催化剂，然后加入交联剂，回流反应，经沉淀和洗涤得到中间产物； (2)复合物的制备:将壳聚糖溶解，再加入步骤(1)得到的中间产物，加入催化剂，回流反应，收集产物，得到改性β -环糊精/壳聚糖复合物。2.根据权利要求1所述的改性β-环糊精/壳聚糖复合物的制备方法，其特征在于:步骤(1)中所述的环糊精与交联剂的摩尔比为(2?4):1。3.根据权利要求1所述的改性β-环糊精/壳聚糖复合物的制备方法，其特征在于:步骤(2)中所述的壳聚糖中的壳聚糖单体与中间产物的摩尔比为(2?4):1。4.根据权利要求1所述的改性β-环糊精/壳聚糖复合物的制备方法，其特征在于: 步骤(1)中所述的改性剂是聚乙二醇中的一种或者至少两种的混合物； 步骤(1)中所述的交联剂为丙烯酸和环氧氯丙烷中的一种或者两种的混合物； 步骤(1)和(2)中所述的催化剂为NaH2P04。5.根据权利要求1所述的改性β-环糊精/壳聚糖复合物的制备方法，其特征在于:步骤(1)中所述的回流反应的条件为50?90°C回流反应1?5h ; 步骤(2)中所述的回流反应的条件为50?90°C回流反应3?6h。6.一种改性β -环糊精/壳聚糖复合物，其特征在于通过权利要求1?5任一项所述的制备方法制备得到。7.权利要求6所述的改性β-环糊精/壳聚糖复合物在载药复合膜领域中的应用。8.一种改性环糊精/壳聚糖载药复合膜，其特征在于:通过如下步骤制备得到:将药物溶解于溶剂，加入权利要求6所述的改性β -环糊精/壳聚糖复合物中搅拌，然后透析，流延得到改性β -环糊精/壳聚糖载药复合膜。9.根据权利要求8所述的改性β-环糊精/壳聚糖载药复合膜，其特征在于: 所述的药物为他克莫司； 所述的他克莫司的最终浓度为5?10mg/mL。10.权利要求8或9所述的改性β-环糊精/壳聚糖载药复合膜在预防移植排斥反应领域中的应用。
【专利摘要】本发明公开一种改性β-环糊精/壳聚糖复合物及其制备方法与应用。本发明的制备方法较为简单，原料易获得，合成成本低廉。本发明采用β-CD负载药物，β-CD具有外腔亲水内腔疏水的特性，因此可以负载多种疏水药物，此载药复合膜在药物负载缓释领域有较大的空间。本发明的复合物可以通过调节壳聚糖(单体)与β-CD的摩尔比制备不同程度透明度的膜，以满足不同药用部位的要求；通过本发明的改性β-环糊精/壳聚糖复合物制备得到的复合膜透明，柔韧，有良好的生物相容性及缓释效果，对人体无毒害作用。
【IPC分类】C08L71/02, C08J5/18, A61K47/48, C08L5/16, C08L51/02, A61P37/06, A61K31/436, C08L5/08, A61K9/70, C08J3/24
【公开号】CN105384973
【申请号】CN201510927045
【发明人】蒋刚彪, 刘永林, 欧阳晓东, 袁进, 曾润萍
【申请人】华南农业大学
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月11日