:将NaHCO3与MgCl2摩尔比为2:1的溶液加入到丹酚酸B粗提取中，使其溶解，等体积的乙酸乙酯萃取2次除杂，弃去乙酸乙酯层，水层用酸性溶液调pH= 2，再以等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，得浓缩液；
[0041 ]将浓缩液重复上述操作，得纯化的丹酚酸B样品。
[0042](3)MCI纯化:将(2)中纯化的丹酚酸B样品进行MCI柱分离，先以20wt %甲醇溶液洗脱除杂，再30wt %甲醇溶液洗脱丹酚酸B。
[0043]洗脱下来的丹酚酸B洗脱液再重复进行一次MCI柱分离，得到纯度达91%的丹酚酸B样品。
[0044](4)重结晶:将步骤(3)中丹酚酸B样品溶解于甲醇:二氯甲烷=3:8 (体积比)的热溶液中溶解，放置析晶。滤出结晶，再进行二次结晶，得到丹酚酸B含量达98 %。
[0045]实施例2:丹酚酸B镁盐制备
[0046]取MgCl2溶于蒸馏水，配制成浓度为1的％的1%(:12水溶液，然后滴加lwt^^NaOH水溶液，至不再生成白色沉淀为止，过滤沉淀，以蒸馏水洗涤沉淀至中性；取Mg(OH)2加入水中，通入C0260?90min至溶液澄清，并超声1min除去溶液中多余CO2，溶液过滤除去不溶性颗粒，即得碳酸氢镁溶液;碳酸氢镁溶液须现用现配。
[0047]将实施例1制得的98%的丹酚酸B样品20mg加入到新制备的碳酸氢镁溶液中，震荡使其溶解。以等体积乙酸乙酯萃取，合并萃取液，减压浓缩蒸干，即得高纯度丹酚酸B镁盐。lH-NMR(600MHz,D20)5:6.74(dd ,J = 29.3,13.8Hz,3H) ,6.67(t ,J = 9.4Hz , 1H)，6.62(dd，J= 18.9,9.3Hz,2H) ,6.54(t,J = 8.7Hz,2H) ,6.49(d,J = 8.ΙΗζ,ΙΗ) ,6.21(dd,J = 31.4,8.0Ηζ,1Η) ,6.07 (s,lH) ,5.89(d,J = 8.ΙΗζ,ΙΗ), 5.63( t ,J= 12.6Hz, 1H) ,5.60-5.52(m,1H)，4.78(dd，J = 9.6，3.3Hz，lH)，4.73-4.67(m，lH)，3.91(d，J = 4.5Hz，lH)，2.89(dt，J =13.5,6.9Hz,lH),2.83-2.66(m,2H),2.38(dd,J=14.1,11.6Hz,1H).13C-NMR(151MHz,D20)δ:177.4，176.5，172.5，168.3，147.8，146.1,144.0，143.0，142.7，142.1,141.7，130.2，129.3，124.1,122.7,121.7，121.3，120.1,117.93，117.4，116.7，116.4，116.2，116.1，115.8，113.9，112.9，86.I，77.5，76.3，56.6，36.7，36.I.
[0048]实施例3:丹酚酸B镁盐制备
[0049]取MgCl2溶于蒸馏水，配制成浓度为0.05wt %的MgCl2水溶液；将实施例1制备的98%丹酚酸B样品20mg加入到MgCl2水溶液中，室温搅拌，滴加NaHCO3水溶液;滴加完毕后，抽滤，冷冻干燥，即得丹酚酸B镁盐络合物。
[0050]所述的MgCl2溶液中所含有的MgCl2摩尔数与丹酚酸B摩尔数比为1:2。其中，所述的NaHCO3溶液中所含有的NaHCO3的摩尔数与丹酚酸B摩尔数比为1:1。
【主权项】
1.一种丹酚酸B的分离纯化方法，包括以丹参或白花丹参药材为原料，经溶剂提取萃取、镁盐络合法分离纯化、MCI柱纯化、结晶与重结晶步骤，得丹酚酸B; 所述溶剂提取萃取步骤为:将丹参或白花丹参药材粉用70-80wt %乙醇室温下超声提取、过滤，将滤液减压浓缩得浓缩液，浓缩液加水悬浮，以二氯甲烷或乙酸乙酯萃取除去杂质，弃去二氯甲烷或乙酸乙酯层，水层用酸性溶液调PH= I?2，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得丹酚酸B粗提物。2.根据权利要求1所述的丹酚酸B的分离纯化方法，其特征在于，溶剂提取萃取步骤中:丹参或白花丹参药材粉的质量与70-80wt %乙醇的体积比为1: (8-12) g/mL。3.根据权利要求1所述的丹酚酸B的分离纯化方法，其特征在于，镁盐络合法分离纯化步骤为:将MgCl2溶于蒸馏水，配制成浓度为0.0lwt %?lwt %的MgCl2水溶液;将MgCl2水溶液加入到溶剂提取萃取步骤所得的丹酚酸B粗提物中，室温下搅拌，滴加浓度为0.1wt %?Iwt %的他!10)3溶液，滴加完毕后，继续搅拌I?2分钟；加入等体积的二氯甲烷或乙酸乙酯萃取2次，萃取后的水溶液，以IN?2.5N的盐酸调pH=l?2，再以乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩； 将该浓缩液重复上述操作，再纯化I次，得纯化后丹酚酸B样品。4.根据权利要求3所述的丹酚酸B的分离纯化方法，其特征在于，镁盐络合法分离纯化步骤中:所述的MgCl2溶液中所含有的MgCl2摩尔数为丹酚酸B粗提物中丹酚酸B摩尔数的二分之一； 优选的，所述的NaHCO3溶液中所含有的NaHCO3的摩尔数等于丹酚酸B粗提物中丹酚酸B摩尔数，所用的NaHCO3与MgCl2的摩尔数比为2:1。5.根据权利要求1所述的丹酚酸B的分离纯化方法，其特征在于，MCI柱纯化步骤为:将镁盐络合法分离纯化后的丹酚酸B样品，过MCI柱子，1wt %-20wt%甲醇溶液除杂质，30wt%-60wt%甲醇溶液洗脱丹酚酸B样品，浓缩丹酚酸B样品洗脱液； 将浓缩后的丹酚酸B样品洗脱液再重复上述MCI柱纯化步骤，得进一步纯化后的丹酚酸B样品。6.根据权利要求5所述的丹酚酸B的分离纯化方法，其特征在于，MCI柱纯化步骤中:所述除杂用洗脱液为20wt%甲醇水溶液;所述洗脱丹酚酸B样品所用溶液为30wt%甲醇溶液。7.根据权利要求1所述的丹酚酸B的分离纯化方法，其特征在于，结晶与重结晶步骤为:将MCI柱纯化步骤所得丹酚酸B样品溶解于二氯甲烷:甲醇体积比=1:9?9:1的混合溶液中进行结晶与重结晶，得到丹酚酸B。8.根据权利要求7所述的丹酚酸B的分离纯化方法，其特征在于，结晶与重结晶步骤中，所述的二氯甲烷:甲醇的体积比为(2?3): (8?7)。9.一种丹酚酸B镁盐络合物的制备方法，步骤如下: (1)氢氧化镁及碳酸氢镁的制备: 取皿8(:12溶于蒸馏水，配制成浓度为1^%?5^%的1^(:12水溶液，然后滴加1的％?5wt %的他0!1水溶液，至不再生成白色沉淀为止，过滤沉淀，以蒸馏水洗涤沉淀至中性;取Mg(OH)2加入水中，通入C0260?90min至溶液澄清，并超声10?20min除去溶液中多余CO2，溶液过滤除去不溶性颗粒，即得碳酸氢镁溶液;碳酸氢镁溶液须现用现配。 (2)丹酚酸B镁盐络合物的制备: 将权利要求1-8任一项制备的丹酚酸B样品加入碳酸氢镁溶液中，搅拌使其溶解；以等体积二氯甲烷或乙酸乙酯萃取2次，除脂溶性杂质，萃取后的水层在40°C条件下减压浓缩，除去水层中残留的二氯甲烷或乙酸乙酯，水溶液冷冻干燥，即得丹酚酸B镁盐络合物。10.一种丹酚酸B镁盐络合物的制备方法，步骤如下: 取MgCl2溶于蒸馏水，配制成浓度为0.01wt% ?lwt%的1%(:12水溶液;将权利要求卜8任一项制备的丹酚酸B加入到MgCl2水溶液中，室温搅拌，滴加NaHCO3水溶液;滴加完毕后，抽滤，冷冻干燥，即得丹酚酸B镁盐络合物。
【专利摘要】本发明涉及一种丹酚酸B的分离纯化方法及丹酚酸B镁盐的制备方法，所述丹酚酸B的分离纯化方法包括以丹参或白花丹参药材为原料，经溶剂提取萃取、镁盐络合法分离纯化、MCI柱纯化、结晶与重结晶步骤。本发明采用丹酚酸B镁盐络合法，可以省去大孔吸附树脂或聚酰胺柱色谱的层析过程，纯化方法更简单和省时，成本更低。丹酚酸B镁盐的制备方法简单，成本低，而且收率高，纯度高，纯度可达98％，更适合于大生产。
【IPC分类】C07D307/86
【公开号】CN105481809
【申请号】CN201511017754
【发明人】孙隆儒, 张紫茹, 张愉, 陈奕名, 季梅
【申请人】山东大学
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月29日