一类含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的抗肿瘤化合物的设计、合成及生物活性评价的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化学领域，尤其涉及一类含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的衍生物、 其制备方法及应用。
[0002] 发明简介
[0003] 恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见疾病。寻找有效的抗肿瘤药物与方法，彻底 攻克癌症，是一项世界性的难题。虽然抗肿瘤药物化学结构和作用机制是各种各样，但是目 前临床上常用的抗肿瘤药物普遍存在对实体瘤疗效较差、毒副作用大以及容易产生多药耐 药性等诸多缺点。因此发现高效低毒的新型抗肿瘤药物，仍是一项极其重要的研究课题。
[0004] 微管是细胞骨架的主要组成部分，由α微管蛋白（α-tubulin)和β微管蛋白（β-tubulin)异二聚体组成，具有维持细胞形态、细胞分裂、信号转导及物质输送等过程中起着 重要作用。抗微管药物已经成为一种主要的化疗药物，广泛应用于临床各类肿瘤治疗中。微 管蛋白抑制剂通过与微管蛋白特定位点结合，影响和干扰微管蛋白的聚合和解聚的动力 学，进而阻断Μ期纺锤体的形成。使肿瘤细胞生长停滞于G2/M期。临床上应用的微管蛋白抑 制剂主要有以紫杉醇为代表的抑制微管蛋白解聚药物和以长春碱类为代表的抑制微管聚 合药物。然而，上述药物毒副作用大、易产生耐药性、结构复杂、合成难度大等问题。寻找新 型、高效、低毒的微管抑制剂已成为当今抗肿瘤药物研究的一个热点。直到1987年美国国家 癌症研究所从南非矮生柳树中发现了天然活性产物CA-4XA-4是一类结构简单的顺式二苯 乙烯类化合物，它是目前已知的微管蛋白抑制剂中活性最强的化合物之一。然而CA-4水溶 性差、生物利用度低，而且给药后CA-4很容易转变为无药理活性的结构相对稳定的反式结 构。因此为了克服这一缺点，国际上近年来围绕CA-4的结构进行了改造，作了大量的工作， 已合成了数百个CA-4衍生物，我们这发明就是根据CA-4进行结构改造。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一类肉桂酰腙骨架的多甲氧基的抗肿瘤化合物的制备方 法及其在抗肿瘤药物中的应用。
[0006] 技术方案：
[0007] -类肉桂酰腙骨架的多甲氧基的衍生物，其结构如式所示：
[0009] 其中，心选自：-H、-〇CH3;R2选自：-H、-Br;R3选自：3,4,5-0〇1 3、3,4-0〇13、2-0!1、2-0CH3、3-0CH3、4-0CH3、2，4，5-0CH3、3-OH、4-OH、2-F、3-F、4-F、2-Br、3-Br、4-Br、4-C1、4-N〇2。
[0010] 制备方法包括如下步骤：
[0011]步骤1.室温条件下，向反应容器中依次加入结构A化合物、HOBt和EDC · HC1，在乙 腈中反应2小时。然后把反应物移至0~10°C加入水合肼。TLC跟踪反应，充分反应后，得到结 构如式B所示的化合物。
[0013]步骤2.向反应容器中依次加入结构如式B所示的化合物以及结构如式C所示的化 合物，乙酸作催化，在无水乙醇体系中回流，TLC跟踪反应。充分反应后，得到结构如式D所示 的化合物。
[0015] 式A~D中，Ri选自：-H、-〇CH3;R2选自：-H、-Br;R3选自 ：3,4,5-0CH3、3,4-0CH3、2-OH、 2-OCH3、3-0CH3、4-0CH3、2，4，5-0CH3、3-OH、4-OH、2-F、3-F、4-F、2-Br、3-Br、4-Br、4-C1、4- N〇2〇
[0016] 本发明对人肝癌细胞(HEPG2)，人乳腺癌细胞(MCF-7)，人肺癌细胞(A549)有明显 的抑制作用，因此本发明的含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的衍生物可以应用于制备抗肿瘤药 物。
【具体实施方式】
[0017] 在某个具体的实施例中，本发明的制备过程和相关产物的结构式如下所述：
[0019] -种制备上述含肉桂酰腙骨架的多甲氧基的抗肿瘤化合物的方法，它包括以下步 骤：
[0020] 步骤a .将多羟基取代的肉桂酸（1 Ommo 1)溶于15mL乙腈溶剂中，再加入HOB t (12mmol)和EDC · HC1 (12mmol)，室温搅拌2小时。将反应液移至0~10°C，逐滴滴加水合肼 (36mmol) JLC跟踪反应，反应结束后，将反应液真空旋干，用乙酸乙酯和饱和食盐水萃取， 得到有机层真空旋干等到4a-c。
[0021 ] 步骤b ·将化合物4a_c( 1 .Ommol)和不同取代的苯甲醛（1 · lmmol)溶于20mL的无水 甲醇中，搅拌条件下滴加2滴乙酸催化，回流条件下搅拌反应2小时，直至有明显的沉淀产 生。将反应物倒入冰饱和食盐水中，产生沉淀，过滤，将得到的沉淀水洗和在无水乙醇中重 结晶得到5a-7g。
[0022] 实施例一：
[0023] (E)-N'-( (E)-3,4,5-三甲氧基苄基)-3-(3，4,5_三甲氧基苯基）乙酰肼(5a)的制 备
[0025] 将(E)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-丙烯酸（lOmmol)溶于15mL乙腈溶剂中，再加入 H0Bt( 12mmol)和EDC · HC1 (12mmol)，室温搅拌2小时。将反应液移至0~10°C，逐滴滴加水合 肼（36mmol)，TLC跟踪反应，反应结束后，将反应液真空旋干，用乙酸乙酯和饱和食盐水萃 取，得到有机层真空旋干等到4a。再将化合物4a(l. Ommol)和3，4,5-三甲氧基苯甲醛 (1. lmmol)溶于20mL的无水甲醇中，搅拌条件下滴加2滴乙酸催化，回流条件下搅拌反应2小 时，直至有明显的沉淀产生。将反应物倒入冰饱和食盐水中，产生沉淀，过滤，将得到的沉淀 水洗和在无水乙醇中重结晶得到5a。得淡黄色的粉末，产率：89.1 % .m. p . 219-221 °C . 4 NMR(400MHz，DMS0-d6)S: 11.68(s，0.58H)，11.55(s，0.42H)，8·16(s，0.56H)，7.98(s， 0.44H)，7.61(dd，J=18.5,9.3Hz，1.49H)，7. ll(d，J = 3.8Hz，2H)，7.04(s，lH)，6.99(s， lH)，6.67(d，J=15.7Hz，0.51H)，3.85(d，J = 6.1Hz，12H)，3.71(d，J=1.9Hz，6H) .MS(ESI) m/z：431.17(C22H26N2〇7, [M+H] + ) .Anal .Calcd for C22H26N2O7 ： C, 61.39 ； H, 6.09 ； N, 6.51.Found：C,61.48；H,6.09；N,6.49.
[0026] 实施例二：
[0027] 化)-^-(化)-3,4_二甲氧基亚苄基)-3_(3,4,5-三甲氧基苯基）乙酰肼(5e)的制 备
[0029] 制备方法参考实施例一。得黄色粉末，产率：87.7% .1114.208-2101.? NMR (400MHz，DMS〇-d6)S: 11.56(s，0.58H)，11.40(s，0.42H)，8.15(s，0.59H)，7.98(s，0.41H)， 7.68-7.46(m，2H)，7.33(s，0.56H)，7.20(dd，J = 8.3Hz，0.57H)，7.17(d，J = 8.1Hz，0.43H)， 7.n-6.95(m，3H)，6.65(d，J=15.7Hz，0.56H)，3.84(t，J = 4.1Hz，9H)，3.81(d，J = 4.2Hz， 3H)，3 · 70(s，3H) .MS(ESI)m/z:401 · 16(C2iH24N2〇6，[M+H] + ) ·Anal ·Calcd for C21H24N2O6:C， 62.99;H，6.04;N，7.00.Found:C，62.86 ;H，6.02;N，7.01.
[0030] 实施例三：
[0031] (E)-3-(2-溴-3,4,5-三甲氧基苯基^^-("丨^^-三甲氧基苄基丨丙烯酸酰肼 (6a)的制备
[0033] 制备方法参考实施例一。得黄绿色晶体，产率78.4% .1114.241-2431.? NMR (300MHz，DMS〇-d6)S : 11 · 73(s，0·47H)，11.67(s，0.53H)，8.19(s，0.51H)，8·03-7·79(ι?， 1.49H)，7.69(d，J=15.8Hz，0.51H)，7.42(s，0.49H)，7.20(s，0.49H)，7.08(d，J=18.7Hz， 2H)，6 · 71 (d，J= 15 · 6Hz，0· 51H)，3 · 91 (s，3H)，3 ·89-3·77(ι?，12Η)，3· 71 (d，J = 4.0Hz，3H) ?13CMffi(101MHz，DMS0-d6)S:166.17，161.45，153.64，153.59，153.25，150.97，150.89， 147.47,144.62,144.49,143.43,139.97,139.71，139.32,138.79,130.19,130.16,130.04， 123.42，120.34，112.28，111.96，107.26，106.88，104.85，104.56,61.31，61.28,60.60， 60.56,56.56,56.42,56.27,56.15.MS(ESI)m/z:509.08(C22H25BrN2〇7，[M+H] + ) .Anal.Calcd for C22H25BrN2〇7：C,51.88；H,4.95；N,5.50.Found：C,51.92；H,4.94；N,5.51.
[0034] 实施例四：
[0035] (E)-3-(2-溴-3,4,5-三甲氧基苯基甲氧基亚苄基)丙烯酸酰肼(6b) 的制备
[0037] 制备方法参考实施例一。得黄色晶体，产率70.8% .1114.205-2071.4 NMR (300MHz，DMS〇-d6)S: 11.76(s，0.60H)，11.58(s，0.40H)，8.61(s，0.59H)，8.43(s，0.41H)， 8.(n-7.93(m，0.61H)，7.86(dd，J=14.0,5.1Hz，1.39H)，7.56(d，J=15.8Hz，0.46H)，7.42 (q，J = 8.1Hz，lH)，7.33(s，0.41H)，7.18(s，0.59H)，7.15-7.07(m，lH)，7.02(q，J = 7.2Hz， lH)，6.67(d，J=15.6Hz，0.54H)，3.93(d，J=12.1Hz，3H)，3.87(d，J = 4.0Hz，3H)，3.83(d，J = 6.6Hz，6H).13CMlR(101MHz，DMS0-d6)S:166.13，161.30，158.19，158.08，153.32，