序列的νλ共有序列：SEQ ID NO. 16和17;以及 c. 基于νλ的序列，其与用于框架区IV的最接近的人νλ种系序列相比具有一个或两个突 变，特别是一个突变； 条件是，如果在b.或c.的情况下，框架区IV具有序列FGQGTKLTVLG(SEQ ID Νο.15)， (w) 所述人Vk框架区I至III不同于以下克隆列表中所示的框架区：FW1.4gen(SEQ ID N0:4)、375-FW1.4opt、435-FWl.4opt、509-FWl.4opt、511-FWl.4opt、534-FWl.4opt、567-FW1.4opt、578-FW1.4opt、l-FW1.4opt、8-FW1.4opt、15-FW1.4opt、19-FW1.4opt、34-FW1 · 4opt、35-FW1 · 4opt、42-FW1 · 4opt 以及43-FW1 · 4opt; (x) 所述人Vk框架区I至III不同于通过从如以下克隆列表中所示的框架区序列重新排 列而可获得的序列：FWl·4gen(SEQIDN0:4)、375-FWl·4opt、435-FWl·4opt、509-FW1.4opt、511-FW1.4opt、534-FW1.4opt、567-FW1.4opt、578-FW1.4opt、l-FW1.4opt、8-FW1 · 4opt、15-FW1 · 4opt、19-FW1 · 4opt、34-FW1 · 4opt、35-FW1 · 4opt、42-FW1 · 4opt 以及 43-Fffl.4opt； (y) 所述人Vk框架区I至III不同于通过使序列FW1.4gen(SEQ ID N0:4)在15、22、48、 57、74、87、88、90、92、95、97以及99中的一个或多个位置处进行突变而获得的序列;或 (z) 与具有SEQ ID N〇:8的人Vk序列中的相应区域相比，所述人Vk框架区I至III包含不 超过五个突变，特别是与具有SEQ ID N〇:8的人Vk序列相比，少于五个、少于四个、少于三 个、特别是仅一个或没有突变。2. 根据权利要求1所述的抗体VL结构域，其特征在于，框架区III的AHolOl位的氨基酸 残基为人νλ共有序列中所述位置处所存在的氨基酸残基，特别是其中所述氨基酸残基不同 于苯丙氨酸，更特别是其中所述氨基酸残基为谷氨酸。3. 根据权利要求1或2所述的抗体VL结构域，其特征在于，所述Vk框架区I至III是来自V κ?家族。4. 根据权利要求3所述的抗体VL结构域，其特征在于，所述Vk框架区I至III为选自以下 的序列中所存在的框架区：SEQ ID Ν0:2和SEQ ID Ν0:8,特别是SEQ ID Ν0:8。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的抗体VL结构域，其特征在于，所述CDR结构域 CDR1、roR2以及⑶R3独立地选自：（i)⑶R结构域⑶Rl、roR2以及⑶R3，其来自对目的抗原具 有特异性的亲本非人抗体，特别是来自亲本兔抗体或来自亲本啮齿动物抗体，特别是亲本 小鼠或大鼠抗体；（i i)CDR结构域CDR1、CDR2以及CDR3，其来自包含Vk结构域的亲本人或人 源化抗体，特别是来自批准用于治疗或以其他方式商业化的抗体；（iii)CDR结构域CDR1、 CDR2以及CDR3，其得自根据(i)或（i i)的CDR结构域，特别是通过优化根据(i)或(i i)的一个 或多个CDR结构域而获得的CDR结构域；以及(i v)将被根据(i)、（ i i)和/或（i i i)的一个或多 个CDR结构域置换的CDR结构域。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的抗体VL结构域，其特征在于，所述框架区I至IV为 选自以下的序列中所存在的框架区的组合:SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:11、SEQ ID NO: 12以及SEQ ID NO: 13。7. -种分离的抗体或其功能片段，其包含根据权利要求1至6中任一项所述的抗体VL结 构域。8. 根据权利要求7所述的分离的抗体或其功能片段，其包含VH结构域，所述VH结构域属 于选自以下的VH结构域亚家族:VH1A、VH1B、VH2、VH3、VH4、VH5以及VH6，特别是属于VH结构 域亚家族VH3或VH4、特别是属于VH结构域亚家族VH3。9. 根据权利要求7或8所述的分离的抗体或其功能片段，其选自：IgG抗体、Fab片段、 scFv片段、单链双抗体(scDb)、串联scDb(Tandab)、线性二聚scDb(LD-scDb)、环状二聚scDb (CD-scDb)、双特异性T细胞衔接子(BiTE;串联二scFv)、串联三scFv、三抗体、双特异性 ?8匕2、二微型抗体、四抗体、8。？￥-?(3-8〇?￥融合体、二双抗体、0￥0-]^、]^6-8〇?&13、8〇?&13-dsscFv、Fv2_Fc、IgG_scFv融合体，如bsAb(联接至轻链的C末端的scFv)、BslAb(联接至轻链 的N末端的scFv)、Bs2Ab(联接至重链的N末端的scFv)、Bs3Ab(联接至重链的C末端的scFv)、 TslAb(联接至重链与轻链两者的N末端的scFv)、Ts2Ab(联接至重链的C末端的dsscFv)，以 及孔中纽(Knob-int〇-Holes，KiHs)(通过KiH技术制备的双特异性IgG)和双重抗体(通过 Duobody技术制备的双特异性IgG) 〇10. -种药物组合物，其包含根据权利要求7至9中任一项所述的分离的抗体或其功能 片段，和任选地药学上可接受的载体和/或赋形剂。11. 一种核酸序列或核酸序列集合，所述核酸序列或核酸序列集合(i)编码根据权利要 求1至6中任一项所述的抗体VL结构域，或根据权利要求7至9中任一项所述的分离的抗体或 其功能片段;或（ii)能通过根据权利要求17所述的方法获得的分离的抗体或其功能片段。12. -种载体或载体集合，所述载体或载体集合包含根据权利要求11所述的核酸序列 或核酸序列集合。13. -种宿主细胞，特别是表达宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求11所述的核 酸序列或核酸序列集合，或根据权利要求12所述的载体或载体集合。14. 一种方法，所述方法用于产生根据权利要求1至6中任一项所述的抗体VL结构域，或 根据权利要求7至9中任一项所述的分离的抗体或其功能片段，所述方法包括以下步骤:表 达根据权利要求11所述的核酸序列或核酸序列集合，或根据权利要求12所述的载体或载体 集合，或根据权利要求13所述的宿主细胞，特别是表达宿主细胞。15. -种用于产生人源化兔或啮齿动物抗体的方法，所述方法包括以下步骤： a. 用目的抗原使兔或啮齿动物免疫； b. 分离至少一种目的抗体；以及 c. 将所述至少一种目的抗体的VL CDR区克隆到编码根据权利要求1至6中任一项所述 的抗体VL结构域的核酸序列中。16. 根据权利要求15所述的方法，其还包括以下步骤中的一个或多个： aa. 克隆分离与目的抗原相互作用的亲和力成熟的记忆B细胞，特别是通过使用荧光激 活细胞分拣； ab. 在不要求单个B细胞克隆永生化的共培养系统中培养单个B细胞； ac. 在基于细胞的ELISA中筛选B细胞培养物上清液，以鉴别结合至目的抗原的至少一 种抗体;和/或 ad. 将至少一种抗体的VH CDR区克隆到编码人抗体VH结构域的核酸序列中。17. -种方法，所述方法用于产生编码根据权利要求1至6中任一项所述的抗体VL结构 域的核酸序列，或编码根据权利要求7至9中任一项所述的分离的抗体或其功能片段的一个 或多个核酸序列，所述方法包括在一个或多个步骤中将编码以下各项的核酸序列进行组 合：⑴人Vk框架区I至III;(ii)CDR结构域CDR1、CDR2以及CDR3;以及（iii)框架区IV，所述 框架区IV选自： a. 用于框架区IV的人νλ种系序列，特别是选自以下的νλ种系序列：SEQ ID NO.16至22; b. 基于νλ的序列，其为(bi)来自用于框架区IV的人νλ种系序列的共有νλ序列，特别是 SEQ ID NO.17;或(bii)来自用于框架区IV的重排人νλ序列的共有νλ序列，特别是选自以下 的νλ共有序列：SEQ ID NO. 16和17;以及 c. 基于νλ的序列，其与用于框架区IV的最接近的人νλ种系序列相比具有一个或两个突 变，特别是一个突变； 特别是使用以下方法中的一种： i. 在包含编码人或人源化Vk结构域的核酸序列的核酸构建体，特别是重组载体中通过 框架区IV置换所述Vk框架区IV，所述框架区IV选自： a. 用于框架区IV的人νλ种系序列，特别是选自以下的νλ种系序列：SEQ ID NO.16至22; b. 基于νλ的序列，其为(bi)来自用于框架区IV的人νλ种系序列的共有νλ序列，特别是 SEQ ID NO.17;或(bii)来自用于框架区IV的重排人νλ序列的共有νλ序列，特别是选自以下 的νλ共有序列：SEQ ID NO. 16和17;以及 c. 基于νλ的序列，其与用于框架区IV的最接近的人νλ种系序列相比具有一个或两个突 变，特别是一个突变； ii. 在一个或多个步骤中将编码以下各项的一个或多个核酸序列插入至包含编码框架 区IV的核酸序列的核酸构建体、特别是重组载体：（i)人Vk框架区I至III;以及(ii)CDR结构 域⑶R1、⑶R2以及⑶R3，其中所述框架区IV选自： a. 用于框架区IV的人νλ种系序列，特别是选自以下的νλ种系序列：SEQ ID NO.16至22; b. 基于νλ的序列，其为(bi)来自用于框架区IV的人νλ种系序列的共有νλ序列，特别是 SEQ ID NO.17;或(bii)来自用于框架区IV的重排人νλ序列的共有νλ序列，特别是选自以下 的νλ共有序列：SEQ ID NO. 16和17;以及 c. 基于νλ的序列，其与用于框架区IV的最接近的人νλ种系序列相比具有一个或两个突 变，特别是一个突变； iii. 在编码人或人源化Vk结构域的核酸序列中使所述编码框架区IV的核酸序列突变， 以产生框架区IV，所述框架区IV选自： a. 用于框架区IV的人νλ种系序列，特别是选自以下的νλ种系序列：SEQ ID NO.16至22; b. 基于νλ的序列，其为(bi)来自用于框架区IV的人νλ种系序列的共有νλ序列，特别是 SEQ ID NO.17;或(bii)来自用于框架区IV的重排人νλ序列的共有νλ序列，特别是选自以下 的νλ共有序列：SEQ ID NO. 16和17;以及 c. 基于νλ的序列，其与用于框架区IV的最接近的人νλ种系序列相比具有一个或两个突 变，特别是一个突变;或 iv.在一个或多个步骤中在包含编码包含人VK框架区I至III，⑶R结构域⑶R1、CDR2以 及CDR3以及框架区IV的轻链结构域的核酸序列的核酸构建体，特别是重组载体中，通过编 码来自目的抗体的对应一个或多个CDR结构域的一个或多个核酸序列置换编码所述CDR结 构域的一个或多个核酸序列，其中所述框架区IV选自： a. 用于框架区IV的人νλ种系序列，特别是选自以下的νλ种系序列：SEQ ID NO.16至22; b. 基于νλ的序列，其为(bi)来自用于框架区IV的人νλ种系序列的共有νλ序列，特别是 SEQ ID NO.17;或(bii)来自用于框架区IV的重排人νλ序列的共有νλ序列，特别是选自以下 的νλ共有序列：SEQ ID NO. 16和17;以及 c. 基于νλ的序列，其与用于框架区IV的最接近的人νλ种系序列相比具有一个或两个突 变，特别是一个突变。
【专利摘要】本发明涉及具有有利特性的新型抗体框架。
【IPC分类】A61K45/00, C07K16/46, C07K16/24, C07K16/22, C12N15/00
【公开号】CN105579472
【申请号】CN201480036689
【发明人】塞巴斯蒂安·迈耶, 大卫·乌雷奇
【申请人】努玛有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年6月26日
【公告号】CA2914829A1, EP3013864A1, US20160130326, WO2014206561A1, WO2014206561A8