积浓度为13%的燃煤电厂烟气促进藻株生长，在气体流量为60ml/min、光照强度3200LUX、温度为26 0C的条件下，培养目标藻株8天，通过测量藻细胞个数计算得其生长速率为0.43/d；
[0043](4)将步骤(3)培养结束后的目标藻株，置于高光照强度SOOOLux下继续培养，并持续通入CO2体积浓度为13 %的燃煤电厂烟气胁迫提高藻株中的虾青素含量，培养条件为:气体流量为120ml/min、培养温度为26 °C，培养12天后，将藻液离心和冷冻干燥得到雨生红球藻干藻粉，测得其生物质干重为2.4g/L和虾青素含量22mg/g。
[0044]在本实施例中，液体BG-1l培养基的成分组成为:1.5g/L NaN03、0.2g/L Na2C03、0.075g/L MgS04.7H20、0.4g/L K2HP04、0.036g/L CaCl2.2H20、2.2 X 10—4g/L ZnSO4.7H20、1.8X10—3g/L MnCl2.4H20、2.1X10—5g/L NaMoOh0.8 X 10—5g/L C11SO4.5H20、2.8X10-3g/L H3BO3、0.001 g/L EDTA、0.006g/L 柠檬酸。
[0045]实施例3
[0046](I)按接种量20%将雨生红球藻液体接种到400ml液体BG-1I培养基中，然后将接种后的培养基置于容积为600ml的圆柱光合反应器，再向光合反应器中通入体积浓度为6%的高浓度⑶2气体，在气体流量为60ml/min、光照强度为3500LUX、温度28°C条件下，培养4天;将上述6%CO2培养的藻株以20%的接种量转接入新的液体BG-1I培养基中，然后通入体积浓度为10%的高浓度CO2气体，在气体流量为60ml/min、光照强度为3500LUX、温度28°C条件下，培养4天；
[0047](2)取上述10 % CO2气体中培养4天后的藻液，以20 %的接种量转接入新的液体BG-11培养基中，然后将接种后的培养基置于容积为600ml的圆柱光合反应器，再向光合反应器中通入CO2体积浓度为15%的燃煤电厂烟气，在气体流量为60ml/min、光照强度为3500LUX、温度为28°C条件下，连续培养10代，即获得在燃煤电厂烟气条件下快速生长的目标藻株；
[0048](3)取对数生长期的目标藻株，以20%的接种量接种到400ml液体BG-1I培养基中，然后将接种后的培养基置于容积为600ml的圆柱光合反应器，再向光合反应器中通入CO2体积浓度为15%的燃煤电厂烟气促进藻株生长，在气体流量为60ml/min、光照强度3500LUX、温度为28 0C的条件下，培养目标藻株7天，通过测量藻细胞个数计算得其生长速率为0.38/d；
[0049](4)将步骤(3)培养结束后的目标藻株，置于高光照强度7500LUX下继续培养，并持续通入CO2体积浓度为15 %的燃煤电厂烟气胁迫提高藻株中的虾青素含量，培养条件为:气体流量为120ml/min、培养温度为28°C，培养10天后，将藻液离心和冷冻干燥得到雨生红球藻干藻粉，测量得其生物质干重为2.7g/L和虾青素含量为24mg/g。
[0050]在本实施例中，液体BG-1l培养基的成分组成为:1.5g/L NaN03、0.2g/L Na2C03、0.075g/L MgS04.7H20、0.4g/L K2HP04、0.036g/L CaCl2.2H20、2.2 X 10—4g/L ZnSO4.7H20、1.8X10—3g/L MnCl2.4H20、2.1X10—5g/L NaMoOh0.8 X 10—5g/L C11SO4.5H20、2.8X10-3g/L H3BO3、0.001 g/L EDTA、0.006g/L 柠檬酸。
[0051]最后，需要注意的是，以上列举的仅是本发明的具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容中直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
1.烟气(:02驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法，燃煤电厂烟气中含有12?15%的高体积浓度C02，其特征在于，所述烟气0)2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法具体包括下述步骤: (1)按10?20%的接种量将雨生红球藻液体接种到400ml液体BG-1I培养基中，然后将接种后的培养基置于光合反应器中，再向光合反应器中通入体积浓度为6%的高浓度0)2气体，在气体流量为60ml/min、光照强度为3000?3500Lux、温度25?28°C的条件下，培养4?6天； 然后，将上述以体积浓度为6%的CO2培养后的藻株，以10?20%的接种量转接入新的液体BG-1l培养基中，然后通入体积浓度为10%的高浓度CO2气体，在气体流量为60ml/min、光照强度为3000?3500Lux、温度25?28°C的条件下，培养4?6天； (2)取步骤(I)中在以体积浓度为10%的CO2气体中培养4?6天后的藻液，以10?20 %的接种量转接入新的液体BG-1l培养基中，然后将接种后的培养基置于光合反应器中，再向光合反应器中通入C02体积浓度为12?15 %的燃煤电厂烟气，在气体流量为60ml / min、光照强度为3000?3500LUX、温度为25?28°C的条件下，连续培养5?10代，即获得在燃煤电厂烟气条件下快速生长的目标藻株； (3)取对数生长期的目标藻株，以10?20%的接种量接种到400ml液体BG-1I培养基中，然后将接种后的培养基置于光合反应器中，再向光合反应器中通入CO2体积浓度为12?15%的燃煤电厂烟气促进藻株生长，在气体流量为60ml/min、光照强度3000?3500Lux、温度为25?28°C的条件下，培养目标藻株7?10天，能通过测量藻细胞个数计算生长速率； (4)将步骤(3)培养结束后的目标藻株，置于高光照强度7500?lOOOOLux下继续培养，并持续通入CO2体积浓度为12?15%的燃煤电厂烟气胁迫提高藻株中的虾青素含量，培养条件为:气体流量为120ml/min、培养温度为25?28°C，培养10?15天后，将藻液离心和冷冻干燥后，即得到雨生红球藻干藻粉，能测量评价雨生红球藻粉的生物质干重和虾青素含量。2.根据权利要求1所述的烟气0)2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法，其特征在于，所述光合反应器采用容积为600ml的圆柱光合反应器。3.根据权利要求1所述的烟气0)2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法，其特征在于，所述液体BG-1I培养基的成分组成为:I.5g/L NaN03、0.2g/L Na2CO3、0.075g/LMgSO4.7H20、0.4g/L K2HPOl0.036g/L CaCl2.2H20、2.2 X 10—4g/L ZnSO4.7H20、1.8X10—3g/L MnCl2.4H20、2.1X10—5g/L NaMo04、0.8 X 10—5g/L C11SO4.5H20、2.8X 10—3g/L H3BO3、0.0Olg/L EDTA、0.006g/L柠檬酸。4.根据权利要求1所述的烟气0)2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，生长速率的测定计算方法为: 每隔24h取2mL藻液，向藻液中加入0.2mL鲁哥试剂，震荡摇勾，制片，在光学显微镜下观察，利用血球计数板计数，计算藻细胞数N，再利用公式μ= (InN2-1n Nd/Us-ti)计算细胞平均生长速率，作为生长速率； 其中，μ为细胞平均生长速率A1为第t天时的藻细胞数，N2为第t2天时的藻细胞数。5.根据权利要求1所述的烟气0)2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，生物质干重M的测定方法为: 取1mL藻液以SOOOrmp离心10分钟，去上清液，用蒸馏水冲洗获得的藻泥两次，再将藻泥离心脱水后置于-70°C下冷冻24小时后，放入低温真空干燥仪中干燥24小时，对所得藻粉称重并计算生物质干重M。6.根据权利要求1所述的烟气0)2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，虾青素含量的测定方法采用高效液相色谱法。
【专利摘要】本发明涉及生物活性保健品开发技术，旨在提供烟气CO2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法。该烟气CO2驯化促进雨生红球藻生长和虾青素积累的方法包括步骤：将雨生红球藻液体依次用体积浓度为6％的高浓度CO2气体、体积浓度为10％的高浓度CO2气体驯化培养；然后再用燃煤电厂烟气迭代驯化培养，获得目标藻株；将目标藻株用燃煤电厂烟气，依次在3000～3500Lux的低光照强度、7500～10000Lux的高光照强度下培养后，将藻液离心和冷冻干燥得到雨生红球藻干藻粉。本发明显著提高了生长速率和虾青素产量，其生长速率比空气条件下提高了47％，虾青素含量提高了25％。
【IPC分类】C12P23/00, C12N1/12, C12R1/89
【公开号】CN105586262
【申请号】CN201610103822
【发明人】程军, 岑可法, 王智化, 周俊虎, 刘建忠, 黄镇宇, 周志军, 杨卫娟, 张彦威
【申请人】浙江大学
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2016年2月25日