一种细胞分层共培养的装置及方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种细胞分层共培养的装置及方法。
【背景技术】
[0002]动物体内的脂肪组织是决定动物产品生产性能及其肉的品质的主要因素。按照脂肪在动物体内分布位置的不同，脂肪组织可以分为皮下脂肪、内脏脂肪和肌内脂肪，不同部位脂肪沉积主要来自于前体脂肪细胞的增殖和分化。随着对动物发育规律的不断研究和认识，人们发现动物体内的前体脂肪细胞可以分化为成熟脂肪细胞，而成熟脂肪细胞还可以去分化为前体脂肪细胞，甚至可以向肌肉细胞，成骨细胞进行转化。
[0003]将同一动物的脂肪细胞和其它细胞在同一培养液中共培养，可以更好的模拟动物体内环境，便于更好地观察细胞与细胞、细胞与培养环境之间的相互作用以及探讨药物的作用机制和可能作用的靶点，填补了单层细胞培养的整体动物实验的鸿沟。针对于此，现有技术中已公开利用两种细胞浮力的差异在培养瓶中进行共培养的方法，称为“天花板”法。但该培养方法存在明显的缺点，一是耗费较大，需要将整个培养瓶都充满细胞培养液，容易造成浪费;二是培养过程瓶口盖子必须拧紧，否则液体会漏出，不利于细胞培养过程中气体内外交换;三是操作过程中容易出现漏液，加大了细胞污染的危险。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种细胞分层共培养的装置及方法，发明提供的细胞分层共培养的装置不仅提供了一种将不同浮力细胞共同培养的方法，成本低、气体交换好、细胞污染风险小，还能够实现动物细胞内环境的模拟，使实验环境更接近于体内状态，从而提高细胞与细胞、细胞与培养环境之间的相互作用以及探讨药物的作用机制和可能作用的靶点结果的精准性与可信度。
[0005]本发明提供了一种细胞分层共培养的装置，包括培养瓶(I)和设置在培养瓶(I)内的隔板(2)，所述隔板(2)与所述培养瓶(I)侧壁相接，所述隔板(2)平行于培养瓶瓶底(4)。
[0006]优选的是，所述隔板与培养瓶除瓶口方向的三侧侧壁相接。
[0007]优选的是，所述隔板将培养瓶内空间隔为上部的气体交换空间和下部的细胞培养空间，所述细胞培养空间的体积与所述气体交换空间的体积之比为4:1?1:1，更优选为2:1o
[0008]优选的是，所述培养瓶侧壁设置有瓶口，所述瓶口与相接隔板的侧壁相对设置，与瓶口临近的隔板侧边缘低于所述瓶口的底边缘(3)且，垂直距离为O?lcm。
[0009]优选的是，所述隔板的水平长度为培养瓶水平长度的2/3?5/6，更优选为3/4，所述隔板的厚度为0.3?Icm，更优选为0.5cm。
[0010]本发明提供了细胞分层共培养的装置在培养两种不同浮力的细胞中的应用。
[0011]优选的是，所述细胞分层共培养装置设置有瓶盖(5)，所述瓶盖通过旋转来保证瓶内的通气，移动培养装置时，旋紧瓶盖，进行细胞培养时，旋转瓶盖使瓶内气体与瓶外气体能够流通。
[0012]本发明还提供了细胞分层共培养的装置进行细胞培养的方法，包括以下步骤:
[0013]I)通过离心的方法分离待培养细胞，得到不同浮力的细胞；
[0014]2)在培养瓶中预先加入不含细胞的培养液，使液面不溢过隔板且垂直距离隔板0.5?2cm，进行孵育；
[0015]3)在培养装置中加入浮力小的细胞悬液和浮力大的细胞悬液，使培养装置中的液面接触但不溢过隔板，培养24?48h，两种悬液的加入顺序没有限制；
[0016]所述步骤I)和步骤2)没有时间顺序限制。
[0017]优选的是，所述孵育是在37?39°C、5?6%C02，更优选为37°C，5%C02培养箱中静置4?6h，更优选为5h。
[0018]优选的是，所述待培养细胞在加入到所述细胞分层共培养装置内之前，先分别进行2?5h的预培养。
[0019]本发明提供了一种细胞分层共培养的装置，包括培养瓶(I)和设置在培养瓶(I)内的隔板(2)，所述隔板(2)与所述培养瓶(I)侧壁相接，所述隔板(2)平行于培养瓶瓶底(4)。本发明在传统培养瓶的中间部位加入一层隔板，用隔板代替了“天花板”，有效的减少了利用“天花板”法共培养不同浮力细胞时所用培养液量，既达到了两种细胞在同一体系中共培养的效果又避免了不必要的浪费。同时，由于培养过程中瓶内培养液不会充盈瓶口，使得瓶内外气体交换良好，操作过程中也不会出现漏液等现象，有效的防止了细胞污染。
【附图说明】
[0020]图1为本发明实施例提供的细胞分层共培养装置的结构示意图；
[0021]图2为图1所示装置的俯视图。
【具体实施方式】
[0022]本发明提供了一种细胞分层共培养的装置，包括培养瓶(I)和设置在培养瓶(I)内的隔板(2)，所述隔板(2)与所述培养瓶(I)侧壁相接，所述隔板(2)平行于培养瓶瓶底(4)。
[0023]本发明的细胞分层共培养装置的结构示意图具体参见图1和图2，其中，图1为本发明实施例提供的细胞分层共培养装置的结构示意图:(I)表示培养瓶，(2)为隔板，(3)为瓶口的底边缘，(4)为培养瓶瓶底，(5)为培养瓶瓶盖。
[0024]本发明的培养瓶与隔板一体化制成，所用材料没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的制备动物细胞培养瓶的材料即可。
[0025]本发明对培养瓶的体积没有特殊的限制，本领域技术人员根据需求进行设置。本发明所述的细胞培养瓶的体积是指培养瓶的总体积，包括上部的气体交换空间和下部的细胞培养空间。
[0026]在本发明中，所述隔板(2)与所述培养瓶(I)侧壁相接，所述隔板(2)平行于培养瓶瓶底(4)，所述隔板与培养瓶除瓶口方向的三侧侧壁相接;所述隔板将培养瓶内空间隔为上部的气体交换空间和下部的细胞培养空间，减少了培养液的使用，且提升了瓶内外气体交换的效率，还解决了培养过程中漏液以及细胞污染的问题。在本发明中，所述细胞培养空间的体积与所述气体交换空间的体积之比为4:1?1:1，更优选为2:1。
[0027]在本发明的实施例中，所述隔板的水平长度为培养瓶水平长度的2/3?5/6，更优选为3/4，所述隔板的厚度为0.3?Icm，更优选为0.5cm。
[0028]培养瓶侧壁设置有瓶口，所述瓶口与相接隔板的侧壁相对设置，与瓶口临近的隔板侧边缘低于所述瓶口的底边缘(3)且，垂直距离为O?lcm;上述设置使得细胞培养液的液面始终低于瓶口的底边缘，在细胞培养过程中不会出现漏液的问题，避免了细胞污染。
[0029]本发明提供了细胞分层共培养的装置在培养两种不同浮力的细胞中的应用，实现了在细胞培养瓶更好地模拟动物细胞内环境。
[0030]本发明的细胞分层共培养装置设置有瓶盖(5)，所述瓶盖可通过螺纹连接的方式与瓶口相接。在本发明的实施例中，所述瓶盖通过旋转来保证瓶内的通气，移动培养装置时，旋紧瓶盖，进行细胞培养时，旋转瓶盖使瓶内气体与瓶外气体能够流通。
[0031]本发明还提供了利用上述技术方案所述细胞分层共培养的装置进行细胞培养的方法，包括以下步骤:
[0032]I)通过离心的方法分离待培养细胞，得到不同浮力的细胞；
[0033]2)在培养瓶中预先加入不含细胞的培养液，使液面不溢过隔板且垂直距离隔板
0.5?2cm，进行孵育；
[0034]3)在培养装置中加入浮力小的细胞悬液和浮力大的细胞悬液，使培养装置中的液面接触但不溢过隔板，培养24?48h，两种悬液的加入顺序没有限制；
[0035]所述步骤I)和步骤2)没有时间顺序限制。
[0036]本发明通过离心的方法，优选为差速离心法分离待培养的细胞，得到不同浮力的细胞。本发明的离心速度和时间的选择取决于细胞混合液中各细胞的重力大小，以能