专利名称：细胞的发酵培养方法
技术领域：
本申请涉及生物工程技术，尤其涉及细胞的发酵培养方法。
背景技术：
生物反应器在动物细胞规模化培养中的应用也是生物制药领域的发展趋势，很多公司均致力于开发相关产品的发酵工艺，以满足公司产品能够在低成本大规模情况下进行产品的制备。随着全球对生物制品的需求量的增大，生物反应器的规模也许不断地提高。此时，动物细胞大规模培养也就成了生物制药领域最重要的关键技术之一。但是，在发酵规模不断放大的过程中，细胞生长的微环境发生了很大的变化，随着发酵过程的深入，底物浓度、搅拌速度、溶氧及副产物累积等都会对细胞生长产生巨大影响，因此，发酵过程中的各种工艺参数需要随着发酵进程及时调整，使得细胞的生长代谢保持良好状态，提高其产物表达效率和质量。开发适合于生物反应器动物细胞大规模培养的优化工艺尤为重要。
发明内容
本申请涉及动物细胞的发酵培养方法，特别是根据细胞生长代谢的参数变化，及时调整细胞培养条件，使得细胞培养条件保持在优化状态，便于细胞的生长以及产物的表达。本申请的一方面提供了一种动物细胞的发酵培养方法，包括在适于细胞生长的条件下培养动物细胞，检测细胞生长代谢的参数，计算细胞生长代谢的参数变化值，以及根据细胞生长代谢的参数变化值调节细胞生长条件。在一些实施方式中，检测的细胞生长代谢的参数包括以下的至少一种葡萄糖浓度、谷氨酰胺浓度以及细胞密度。在一些实施方式中，可以只检测所述的一种细胞生长代谢的参数。在一些实施方式中，可以同时检测所述的两种细胞生长代谢的参数，例如同时检测葡萄糖浓度和谷氨酰胺浓度，同时检测葡萄糖浓度和细胞密度，或者同时检测谷氨酰胺浓度和细胞密度。在一些实施方式中，可以同时检测所述的三种细胞生长代谢的参数。在一些实施方式中，可以分别交替检测所述的一种或多种细胞生长代谢的参数。可以使用本领域已知的任何检测方法来对这些参数进行检测。例如，使用生化分析仪(比如YSI公司的 YSI 2700型生化分析仪)检测葡萄糖浓度和谷氨酰胺浓度，使用台盼蓝拒染法检测细胞密度，并计算细胞活性。在一些实施方式中，细胞生长代谢的参数变化值是葡萄糖比消耗速率，其根据以
下方程式(I)计算
权利要求
1.一种动物细胞的发酵培养方法，包括在适于细胞生长的条件下培养动物细胞，检测细胞生长代谢的参数，计算细胞生长代谢的参数变化值，以及根据所述细胞生长代谢的参数变化值调节细胞生长代谢条件。
2.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，所述检测的细胞生长代谢的参数包括以下的至少一种葡萄糖浓度、谷氨酰胺浓度以及细胞密度。
3.如权利要求2所述的发酵培养方法，其特征在于，所述细胞生长代谢的参数变化值是葡萄糖比消耗速率，根据以下方程式计算
4.如权利要求2所述的发酵培养方法，其特征在于，所述细胞生长代谢的参数变化值是谷氨酰胺比消耗速率，根据以下方程式计算
5.如权利要求2所述的发酵培养方法，其特征在于，将葡萄糖浓度控制在I 8g/L。
6.如权利要求2所述的发酵方培养法，其特征在于，将谷氨酰胺浓度控制在I 5mM。
7.如权利要求5或6所述的发酵培养方法，其特征在于，通过连续流加、分次补加或一次性补加控制浓度。
8.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，细胞起始培养密度为I IOXlO5细胞/毫升。
9.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，细胞培养体积为生物反应器工作体积的50% 90%。
10.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，细胞培养温度为30 37°C。
11.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，细胞培养的PH值为6.5 7. 8。
12.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，细胞培养的搅拌速度为40 250rpmo
13.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，细胞培养液的溶氧浓度为20% 80%。
14.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，控制发酵过程中的细胞密度不超过约2X IO7细胞/毫升。
15.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，把细胞倍增期控制在大约20 30小时。
16.如权利要求I所述的发酵培养方法，其特征在于，所述动物细胞为哺乳动物细胞。
全文摘要
本申请涉及生物工程技术，尤其涉及动物细胞的发酵培养。在本申请的一个方面，本申请提供了一种发酵培养方法，该方法包括在适于细胞生长的条件下培养动物细胞，检测细胞生长代谢的参数，计算细胞生长代谢的参数变化值，以及根据所述细胞生长代谢的参数变化值调节细胞生长代谢条件。本申请的发酵培养方法适于对动物细胞进行大规模的生物反应器培养。
文档编号C12N5/071GK102604884SQ201210051120
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月1日 优先权日2012年3月1日
发明者屈颖, 王彬, 陈小春 申请人:江苏太平洋美诺克生物药业有限公司