生产灵芝菌丝体的灵芝诱变菌株的制作方法_2

文档序号:9822977阅读:来源:国知局
教皮转移到菌丝 中,对所用米慷和教皮应进行初步的检验和处理,铅、神、隶限量在一定控制范围之内的米 慷和教皮才可W被用作发酵培养基。由于食用菌在发酵过程中可能富集一些有害元素,因 此在设计培养基时应考虑引入竞争性抑制富集有害元素的食品添加剂,如半脫氨酸盐酸盐 等,通过其琉基与铅、神、隶等元素的竞争性结合降低有害元素进入菌丝的机会,从而得到 合格的菌丝。对有害元素铅、神、隶等的转移控制为本发明专利需要解决的问题之二。
[0010] 由于水稻和小麦在收割环节和胆藏环节有可能会发生霉变W及所加工的米慷和 教皮胆藏不当,产生黄曲霉毒素,所W在使用米慷和教皮时也应进行检验和处理,黄曲霉限 量在一定控制范围内的米慷和教皮才可W被用作发酵培养基。由于食用菌在发酵过程中可 能将黄曲霉毒素转移到菌丝中,因此在设计培养基时同样应考虑引入抑制黄曲霉毒素转移 的食品添加剂,如叶绿素铜钢盐等,W得到合格的菌丝。叶绿素铜钢盐对平面芳香致癌物有 络合作用,可抑制致癌物的活性,可降解致癌物质,具有清除自由基和抗氧化作用。水稻和 小麦在种植过程中会被使用农药,米慷和教皮中的残留农药同样需要通过原料检验和处理 加 W控制,食用菌在发酵过程中利用自身的酶系也可W降解一些有害物质,同时所加入的 叶绿素铜钢盐等对防止农药残留的转移也具有有益作用,此Ξ点可防止农药残留转移到发 酵菌丝体中。因此,对有害物质黄曲霉毒素和农药残留的控制为本发明专利需要解决的问 题之Ξ。
[0011] 综上所述,本发明要解决的关键问题为必须获得一种未见报道的灵芝新菌株,使 其在新设计的米慷教皮全料液态新培养基上有效生长并高效转化米慷教皮全料为合格灵 芝菌丝,该新设计的培养基中添加了半脫氨酸盐酸盐和叶绿素铜钢盐。因此本发明专利在 设计时对授予发明专利所必须的独特性、取得突出的实质性特点和显著进步的创新性和实 用性给予了充分的考虑。
[0012] 本发明将得到一株高效利用新设计的米慷教皮全料液态培养基的灵芝新菌株,该 新菌株发酵新培养基后可W得到品质较好的灵芝菌丝原料,该菌丝原料可W用于进一步深 加工成为保健食品。特别说明:本发明所述米慷教皮全料液态发酵培养基特指"将经检验处 理达到要求的米慷和教皮作为培养基中唯一的碳源、氮源,不添加其他碳源、氮源,并且米 慷、教皮加水成液态状,不过滤,即全料加 W利用"。新培养基指"添加了半脫氨酸盐酸盐、叶 绿素铜钢盐W阻止原料中可能的有害物质转入菌丝的米慷教皮全料液态培养基"。
[0013] 本发明需要通过诱变的方法获得灵芝新菌株。微生物的选育方法主要有物理诱 变、化学诱变、基因重组等,本发明为避免使用有毒有害的化学诱变剂和在食品领域还未被 大众认可的基因工程方法,将利用相对简单易行的紫外诱变技术,使出发菌株处于诱变的 极端环境,最大限度扩大突变的位点范围,提高得到正突变菌株的可能性。本发明所得发酵 米慷教皮全料液态新培养基的新灵芝菌株为首次发明获得。本发明采用了纯菌丝干重浓度 运一指标对发酵效果进行评价。

【发明内容】

[0014] 本发明为了利用灵芝菌株高效高值化转化液态米慷教皮全料为灵芝菌丝体原料, 需要诱变筛选出适合在米慷教皮全料液态新培养基上生长的灵芝新菌株。为避免使用有毒 有害的化学诱变剂和在食品领域还未被大众认可的基因工程方法,考虑紫外物理诱变技术 简单易行,故采用紫外诱变的方法进行诱变,并通过一系列的稳定性、遗传性等筛选方法, 保证灵芝新菌株的优良性状,为工业化高效高值化转化低成本的米慷教皮为品质较好的灵 芝菌丝保健食品原料奠定菌种基础。
[0015] 本发明所采取的技术方案如下: 本发明提供的菌株灵芝JSUlAOUGanoderma lucidum JSU 1401),为可W在米慷教皮 全料液态新培养基中快速生长和高产的灵芝诱变株;该诱变菌株已经于2015年1月23日保 藏在中国武汉的武汉大学内的中国典型培养物保藏中屯、(CCTCC),编号为CCTCCM 2015066,可称为Ganoderma lucid皿 CCTCC Μ 2015066。
[0016] 在本发明的一个方面中,提供上述Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2015066的用途, 用于发酵液态的米慷教皮全料新培养基生产灵芝菌丝原料。
[0017] 本发明的有益效果 为适应保健食品生产对原料的要求,本发明采用物理诱变技术选育灵芝高产菌株,由 实验室现有的灵芝菌株Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2013287出发,进行紫外诱变,W生长 速率、纯菌丝干重和菌丝多糖为指标进行筛选,最终获得Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2015066,在不加其他碳源和氮源的米慷教皮全料液态新培养基中生产灵芝产菌丝原料,与 原始菌株Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2013287相比生产能力更高,纯菌丝产量得到提高, 菌丝多糖和发酵液中的多糖也相应得到提高。米慷和教皮原料经检验合格才能使用。
[0018] 摇瓶发酵时,Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2015066的米慷教皮全料液态新培养 基中米慷和教皮的总浓度可达16.0 g/lOOmL,纯菌丝的干重浓度、菌丝多糖浓度和发酵液 中的粗多糖浓度分别达到8.4旨/1001111^、562.3111旨/100111巧日788.6111旨/1001111^,而原始菌株 Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2013287的米慷教皮全料液态新培养基中米慷和教皮的总浓 度为16.0 g/lOOmL时,菌丝的干重浓度、菌丝多糖浓度和发酵液中的粗多糖浓度分别为 7.4邑/1001^、450.9111旨/1001^和536.0111旨/1001^。新菌株的菌丝干重浓度增加13.5%,菌丝多 糖浓度增加了 24.7%,发酵液中的胞外粗多糖也增加了 47.1%,说明诱变所得新菌株具有更 强的发酵米慷和教皮的能力,菌株的发酵性能发生了显著的积极的变化。经过检验,铅、神、 隶等元素含量分别为1.78mg/kg、0.76mg/kg、0.08mg/kg,均低于GB16740-2014限量指标值, 黄曲霉毒素含量为18.5yg/kg,低于GB2761-2011稻谷类及其制品的限量指标值。
[0019] 上罐发酵时,纯菌丝的干重浓度、菌丝多糖浓度和发酵液中的粗多糖浓度分别达 到7.9g/100mL、535.7mg/100mL和678.4mg/100mL。经过检验,铅、神、隶等元素含量分别为 1.83mg/kg、0.88mg/kg、0.06mg/kg,均低于GB16740-2014限量指标值,黄曲霉毒素含量为 13.化g/kg,低于GB2761-2011稻谷类及其制品的限量指标值。
[0020] 本发明通过反复的紫外诱变筛选研究,最终获得了一株新的灵芝菌株Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2015066,该新菌株在不加其他碳源和氮源的米慷教皮全料液态新培养 基中生长速度更快、发酵米慷和教皮的能力更强,使得指定发酵体积中的菌丝量和菌丝多 糖产量更高,且新菌株的发酵特性与出发菌株Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2013287相比 有变化,体现出鲜明的独特性。WGanoderma lucidum CCTCC Μ 2015066为基础,形成了新 的发酵米慷教皮全料液态新培养基的方法,该方法将米慷和教皮全料加 W液态发酵应用, 并在生产能力和产量上全面超过了Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2013287,可见本发明的 菌株取得了 "取得突出的实质性特点和显著进步的创新性"。本发明专利高效利用了廉价的 米慷教皮,可W降低生产成本,减少资源消耗,明显增加产量,经限制污染物转移的技术手 段发酵后所获得的菌丝体的污染物含量已经低于国家标准限量指标值,具有实用性。
[0021] 综上所述,本发明利用已经具备了发明专利的独特性、取得突出的实质性特点和 显著进步的创新性和实用性,产生了有益的效果。
【附图说明】
[0022] 图1为本发明菌株紫外诱变选育方法的流程图。
[0023] 图2为Ganoderma lucidum CCTCC Μ 2015066与出发菌株的括抗图,注:图中左边 为Ganoderma lucid皿CCTCC Μ 2013287,右边为Ganoderma lucid皿CCTCC Μ 2015066。
[0024] 图3为诱变菌株复筛过程中第五代平板的诱变菌株和出发菌株生长速率对比图。
【具体实施方
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