述的载体或由其包装而成的病毒；W及药学上可接受的载体或赋型剂；并且，所述的载体 中目的基因为抑癌基因。
[0027] 本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见 的。
【附图说明】
[0028] 图 KpGLS-Promoter 质粒的图谱，W及在 Hindlll 和 Miel 中插入 p665/p424/p253 替换SV40启动子的示意图。
[0029] 图2、在pGLS-promoter启动子位置分别插入来自erbbS基因的p665, p424, p253 基因片段后，报告基因在不同肥R2/neu表达水平肿瘤细胞中英光素酶的相对活性。
[0030] 图3、pGL3-promoter启动子区分别插入p253和突变的p253(SEQ ID N0:2中第 156位发生G - C点突变，形成SEQ ID N0:1序列）片段后，报告基因质粒在常氧和低氧环 境下，转染肥R2/neu阳性肿瘤细胞中英光素酶的相对活性。
[0031] 图4、A化Η/肥R2-Axin W及阳性对照A化CMV-Axin的重组腺病毒表达载体在常氧 和低氧条件下转染肥R2/neu不同水平表达的肥R2/neu阳性肿瘤细胞中Axin的表达。
[0032] 图5、A化H/肥R2-Axin和A化H/肥R2-PTEN的重组腺病毒表达载体在常氧和低氧 环境下对肥R2/neu阳性（肥C419, MCF7,肥C1954)和阴性肿瘤细胞（肥C806, SMMC7721, SMMC7703)的调亡诱导作用；其中，
[0033] A ;腺病毒表达载体转染肥C1419细胞；
[0034] B ;腺病毒表达载体转染MC巧细胞；
[0035] C ;腺病毒表达载体转染肥C1954细胞；
[0036] D ;腺病毒表达载体转染肥C1806细胞；
[0037] E ;腺病毒表达载体转染SMMC7721细胞；
[0038] F ;腺病毒表达载体转染SMMC7703细胞。
【具体实施方式】
[0039] 本发明人经过广泛而深入的研究，首次掲示一种经过点突变的肥R2/neu组织特 异性启动子，命名为pH/肥R2。该启动子选择性地在肥R2/neu阳性细胞中具有启动子活性； 并且其在低氧条件下具有强的启动子活性，因此适用于在肥R2/neu阳性肿瘤低氧微环境 下诱导目的基因的高效表达。
[0040] 术语
[0041] 如本文所用，所述的"可操作地连接"是指两个或多个核酸区域或核酸序列的功能 性的空间排列。例如；启动子区被置于相对于目的基因核酸序列的特定位置，使得核酸序列 的转录受到该启动子区域的引导，从而，启动子区域被"可操作地连接"到该核酸序列上。
[0042] 如本文所用，所述的"启动子"或"启动子区（域）"是指一种核酸序列，其通常存 在于目的基因编码序列的上游巧'端），能够引导核酸序列转录为mRNA。一般地，启动子或 启动子区提供RNA聚合酶和正确起始转录所必需的其它因子的识别位点。
[0043] 如本文所用，术语"特异性表达"是指目的基因在特定的时间和/或特定的组织表 达。"组织特异（性）启动子"是指一类启动子，在其调控（驱动）下，基因往往只在某些特 定的细胞、器官或组织部位表达。本发明中，所述的"组织特异性启动子"是肥R2/neu组织 特异启动子。
[0044] 如本文所用，"外源的"或"异源的"是指来自不同来源的两条或多条核酸或蛋白质 序列之间的关系。例如，如果启动子与目的基因序列的组合通常不是天然存在的，则启动子 对于该目的基因来说是外源的。特定序列对于其所插入的细胞或生物体来说是"外源的"。
[0045] 如本文所用，"目的基因"是指可由本发明的启动子指导表达的基因。合适的目的 基因包括但不限于；能够被转录成编码多肤的RNA分子、或被转录成反义RNA分子或被转录 成针对内源基因的干扰RNA或miRNA的目的基因；例如抑癌基因。
[0046] 组织特异性启动子及其指导的基因表达
[0047] 本发明提供一种肥R2/neu组织特异启动子，其具有SEQ ID NO: 1所示的核巧酸序 列。
[0048] 多核巧酸的杂交是本领域技术人员熟知的技术，特定的一对核酸的杂交特性指示 它们的相似性或同一性。因此，本发明还涉及与SEQ ID NO: 1指定的核巧酸序列杂交且两 个序列之间具有至少70%，较佳地至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、98%、或 99% )相同性的多核巧酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核巧酸可杂交的 多核巧酸。前提是：所述的多核巧酸中，对应于SEQ ID NO:l的第156位位置的核巧酸为C。
[0049] "严格条件"是指；（1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0. 2 XSSC， 0. 1% SDS，6(TC ;或似杂交时加有变性剂，如50% (v/v)甲醜胺，0. 1%小牛血清/0. 1% Ficoll，42°C等；或（3)仅在两条序列之间的相同性至少在50%，优选60% W上、65% W上、 70% W上、75% W上、80 % W上、85% W上或90% W上，更优选是95 % W上时才发生杂交。 并且，可杂交的多核巧酸也具有指导目的基因在肥R2/neu阳性细胞中特异性表达的功能。
[0050] 本发明还包括与SEQ ID N0:1序列具有70%或W上（优选80%W上，更优选90% W上，最优选95% W上）相同性的核酸，所述核酸也具有指导目的基因在肥R2/neu阳性细 胞中特异性表达的功能。"相同性"是指按照位置相同的百分比，两条或多条核酸之间的相 似水平（即序列同源性、相似性或同一性）。
[0051] 本发明的启动子可W被可操作地连接到目的基因上，该目的基因相对于启动子而 言可W是同源的或外源（异源）的。对所述目的基因的核酸序列没有特别的限制（如一种 功能性、治疗性多肤的核酸序列）。
[0052] 本发明人发现，所述的启动子对于缺氧状态下的体内治疗是特别有用的。利用所 述肥R2/neu组织特异启动子控制可转录目的基因在肥R2/neu阳性肿瘤细胞中表达，通过 目的基因的性质，如编码肿瘤抑制蛋白或者可W沉默或者抑制癌基因的反义核酸或干扰 RNA、或者miRNA用于预防和/治疗肥R2/neu阳性肿瘤的用途。目的基因也可W是编码用 于反映体内存在肥R2/neu阳性肿瘤细胞的指示分子，用于判断肥R2/neu阳性肿瘤治疗后 的复发和预后等监测用途。
[0053] 本发明的启动子除了在常氧条件下具有良好的肥R2/neu组织特异启动子活性， 可用于调控在肥R2阳性细胞中目的基因表达的用途；其更大的优势在于；在低氧条件下， 其具有显著更强的启动子活性，适合于在低氧微环境下在肥R2阳性细胞中控制可转录目 的基因高表达的用途，因此，本发明的pH/肥R2启动子可被应用于抗肥R2阳性肿瘤基因治 疗领域。
[0054] 在本发明的一个实施例中，所述的目的基因编码人类抑癌蛋白Axin分子；在本发 明的另一个实施例中，所述的目的基因编码人类抑癌蛋白PTEN分子。应理解，在阅读了本 发明后，任何需要进行肥R2/neu阳性细胞针对性驱动表达的应用均包含在本发明中。
[00巧]任何一种前述的启动子和/或目的基因序列可被包含在重组载体中。
[0056] 作为一种方式，所述的重组载体包括本发明的启动子，在所述启动子的下游包含 多克隆位点或至少一个酶切位点。当需要表达目的基因时，将目的基因连接入适合的多克 隆位点或酶切位点内，从而将目的基因与启动子可操作地连接。
[0057] 作为另一种方式，所述的重组载体包括（从5'到3'方向）：引导目的基因转录的 启动子，和目的基因。如果需要，所述的重组载体还可W包括3'转录终止子，3'多聚核巧酸 化信号，其它非翻译核酸序列，转运和祀向核酸序列、抗性选择标记、增强子或操作子。
[0058] 用于制备重组载体的方法是本领域熟知的。术语"重组表达载体"指本领域熟知 的细菌质粒、瞻菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒或其他载体。总之，只要 其能够在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都是可W被采用的。作为本发明的优选方 式，所述的载体是病毒。
[0059] 本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含有本发明所述的启动子和/或目的 基因序列的表达载体。送些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。 表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
[0060] 此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，W提供用于选择转化的 宿主细胞的表型性状，如氨予青霉素抗性、新霉素抗性、潮霉素抗性等。
[0061] 重组载体中除了含有本发明的启动子，还可含有一种或多种其它启动子。所述的 其它启动子例如是：组织特异性的、组成型的或诱导型的。
[0062] 包含上述适当的启动子和目的基因的载体，可W用于转化或转染适当的宿主细 胞，W使其能够表达目的基因。根据所应用的领域，本领域一般技术人员都清楚如何选择适 当的载体和宿主细胞。
[0063] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，送些实施例仅用于说明本发明 而不用于限