后再次经过双螺旋混合机混合即得产品.
[0031] 制备实施例5:
[0032]
[0033] 将上述混合物均匀混合，气流粉碎，加入适量水并捏合，所得的混合物造粒、干燥 即得产品.糞横酸甲醒缩聚物、十二烷基硫酸钢、硫酸锭、陶上等助剂的加入，既为剂型制作 提供保障，又可使产品保持良好的分散性，对祀标表面的附着性比较好.
[0034] 生物活性实施例1:
[0035] 本发明的由式I表示的化合物的PPARS活性通过转染检测确认.另外，对于PPAR亚 型PPARa和PPAR 丫的选择性也进行检验。通过MTT检测测试细胞毒性，通过动物实验研究体 内活性。
[0036] 本检测中使用的是CV-I细胞。将所述细胞接种至含有添加有10%FBS、DBS(非特异 性牛血清，经脱脂)和1%青霉素/链霉素的DMEM的96孔板中，并在37°C、5%C02的培养箱中 培养.实验按照接种、转染、样品施用和确认的步骤进行.具体地说，将CV-I细胞接种至96孔 板巧000个细胞/孔），24小时后转染.将全长PPAR质粒DNA、因具有巧光素酶活性而可W确认 PPAR活性的报告DNA、提供有关转染效率信息的0-半乳糖巧酶DNA和转染试剂用于转染.将 样品溶解在二甲亚讽(DMSO)中，通过介质将其W不同浓度施用到细胞中.在培养箱中培养 细胞24小时后，通过使用裂解缓冲液使细胞裂解.使用光度计和酶标仪测量巧光素酶活性 和e-半乳糖巧酶活性.使用e-半乳糖巧酶的值修正获得的巧光素酶的值。利用运些值绘制 图形，并计算出ECso。 rnrmi
[0039] 执行MTT检测是为了测试本发明的由式（I)表示的化合物的细胞毒性.MTT是溶于 水的黄色物质，但是当其被引入活细胞中时会通过线粒体中的脱氨酶变成紫色不溶的晶 体.在将MT溶解在二甲亚讽中后可W通过测量0D550确认细胞毒性.实验如下进行.
[0040] 将CV-I细胞接种于96孔板中（5000个细胞/孔）。在37 °C、5 % C〇2的培养箱中培养所 述细胞24小时，并对其施用不同浓度的样品.然后，再次将所述细胞培养24小时，向其中加 入MTT试剂.培养15分钟后，生成的紫色晶体溶解在二甲亚讽中.使用酶标仪测量光密度，W 确认细胞毒性.
[0041] 结果，由式（I)表示的化合物被确认对于PPAR不具有细胞毒性，即使在其浓度为 ECso值的100倍~1000倍时亦如此.
[0042] 生物活性实施例2:式I化合物的抗菌活性 [00创 1.供试菌
[0044] 火龙果炭痘病原真菌，胶抱炭痘菌(Colletohichum gloeosporioides)，由贵州 大学真菌资源研究所分离并提供.
[0045] 2. PDA培养基配制
[0046] 根据所需培养基的总量，按照每1000血水中添加200g±豆、15g琼脂、20g葡萄糖的 量称取原材料并配制培养基.具体步骤如下:在不诱钢锅中加入适量的蒸馈水，加热至沸； 将称好的±豆洗干净，去皮，切块，待水沸腾时加入锅中，大火煮沸后调节加热速度，保持微 沸30min;用叠成八层的纱布过滤上述混合液至所需体积，调节pH至7，加入预先称量好的琼 脂和葡萄糖，充分揽拌至混合均匀，用量筒准确称取所需量后分装在锥形瓶中，用专用封口 膜封口，待用.
[0047] 3.供试样品溶液配制
[0048] 准确称量待测样品，将其装入20mL的小瓶中，用移液枪加入预先计算好的适量二 甲基亚讽(DMSO)，超声波处理使其完全溶解，盖上瓶盖，放入超净工作台中；接着打开紫外 灯，照射装有待测样液的小瓶，灭菌30min;按照DMSO与无菌水的体积比为1:19的量，用预先 灭菌过的移液管吸取定量的无菌蒸馈水加入样品瓶中，将待测样品配制成5%的供试样液， 将其充分混匀后待用.W等体积的5%DMS0水溶液作阴性对照，阳性药物配制方法和待测样 品相同.
[0049] 4.式I化合物对火龙果炭痘病原真菌的体外抑菌活性
[0050] 用20mL小瓶准确称取5mg式I化合物，向其中注入0.5血DMSO和9.5mL无菌水，将待 测样品配成5%的DMSO溶液;然后加入灭菌后融化的90mL PDA培养基中，混匀，配成IOOmL含 有待测样品的培养基，倒入无菌培养皿中，制成带药平面培养基.W等量溶剂即5%的DMSO 作为空白对照，W市售抗菌药物酸菌醋作为阳性对照.
[0051] 用直径为5mm的打孔器取出菌落边缘生长旺盛的火龙果炭痘病原菌菌饼，用接种 针将其转移至上述平面培养基上，菌丝一面朝下，贴在培养基上，每皿3块，呈=角形放置于 中央，加盖后置于恒溫培养箱中培养，溫度为26°C，湿度为80%，光照设为0%. 7化后，采用 十字交叉法用直尺测量菌落的垂直交叉直径，取其平均值.每处理设3个重复.
[0052] 按下式计算抑菌率：
[0053] 菌丝生长抑制率（％) = {[空白对照菌落直径处理菌落直径]}/[空白菌落直径-5] X 100
[0054] 式I化合物在50μg/ml对火龙果炭痘病原真菌的平均抑制率为79.8 ± 1.1 ( % )，酸 菌醋在50iig/ml对火龙果炭痘病原真菌的平均抑制率为69.3 ±0.1 ( % )。
[0055] 生物活性实施例3:制备实施例3-5对火龙果炭痘病田间药效试验：
[0056] 于11下旬对贵州毕节火龙果发明规律进行调查，利用制备实施例3-5作为供试药 剂，每隔IOd施药1次，连续喷药4次，并于每次喷药前调查各处理的病情指数及药害情况.试 验采用随机区组排列，每处理定期喷药调查3株，3次重复。
[0057] 病害分级标准:0级，肉质茎无病斑；1级，肉质茎病斑数1~10个/IOcm; 2级，肉质茎 病斑数11~30个/10cm;3级，肉质茎病斑数31~50个/10cm;4级，肉质茎病斑数50个W上/ 10 cm.防治效果如下所示：
[0化引
[0059] 结合田间到效实猫结呆，由化可者出，巧I化合物必其組合物对火冗呆炭痘病具 有较高的防治效果。
【主权项】
1. 一种防治火龙果炭疽病的有机化合物，其特征在于以如下化学结构式表示：2. 根据权利要求1所述的有机化合物，其特征在于，其是晶体，所述晶体属于单斜晶系， 其空间群为C2/c，a=2.569A，b=1.153A，c=1.68lA，P=95.45°。3. -种农药组合物，其特征在于，其包括权利要求1-2任一所述的有机化合物以及农药 上可接受的助剂、表面活性剂、溶剂和载体。4. 权利要求3所述的组合物，其可制成可溶性液剂、微乳剂、水乳剂、悬乳剂、种衣剂、可 湿性粉粒剂、缓释颗粒剂、控释颗粒剂、水分散粒剂、干悬乳剂，或直接使用的颗粒剂。5. 权利要求3所述的组合物在防治火龙果炭疽病方面的用途。
【专利摘要】本发明提供了一种防治火龙果炭疽病的有机化合物及其组合物，其可制备成可溶性液剂、微乳剂、水乳剂、悬乳剂、种衣剂、可湿性粉粒剂、缓释颗粒剂、控释颗粒剂、水分散粒剂、干悬乳剂，或直接使用的颗粒剂等剂型.所述组合物用于防治火龙果炭疽病。
【IPC分类】A01P3/00, C07D209/44, A01N43/38
【公开号】CN105669524
【申请号】CN201610128193
【发明人】罗会, 裴晓红, 马玉华, 蔡永强, 张兴无, 李金强
【申请人】贵州省果树科学研究所
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月7日