子的cDNA核巧酸序列，则该甘蓝型 油菜为低油酸含量的甘蓝型油菜;所述化aLCR78基因的核巧酸序列如SEQ ID NO.4的核巧 酸序列所示。
[0035] 具体的序列比对方法，可利用DNAMAN 6.0软件，版本6.0.3.99，操作步骤包括:选 择菜单序列（S)，在比对(A)下面选择多序列比对(M)，在弹出的窗口 "序列与文件"中点击 "文件"按钮，选择合适的序列文件，依据序列是核巧酸序列还是蛋白序列，选择DNA或者是 蛋白质，选择下一步，在"方式"窗口中，如果是比较DNA序列，在"尝试使用双链"前打钩，点 击下一步，如果是比较蛋白序列，此步骤可W省略，在"多序列比对"窗口中点击下一步，其 余参数按照系统默认值设定，在"多重比对"窗口中点击"完成"按钮，即可进入"多序列比 对"的结果界面
[0036] 本发明还提供了可通过测定甘蓝型油菜的化aLCR78基因是否存在可变剪切形式 的方法，W检验和预判油菜是否属于高油酸含量油菜的用途，即测定化化CR78基因存在可 变剪切的方法，检验和判断甘蓝型油菜属于高油酸油菜的用途。
[0037] 此外，本发明还提供了一种检测甘蓝型油菜化化CR78基因的基因型的方法，具体 提供了一种检测甘蓝型油菜化aLCR78基因的基因型的PCR方法，包括：
[0038] (1)反转录：提取待测材料的mRM，在冰上，于无菌的离屯、管中加入提取的 mRNAl化g-扣g，引物化L，lOmM dNTP(四种脱氧核巧酸的混合物)混合物化L，然后加入由焦 碳酸二乙醋处理并经高溫高压灭菌过滤的纯水至13化;所述引物的核巧酸序列如序列表 SEQ ID NO. 1的核巧酸序列所示；
[0039] (2)混合均匀，65°C保持5分钟，然后迅速至于冰上保持1分钟；
[0040] (3)在冰上，向离屯、管中加入5倍First-Strand缓冲液4yL，40u/化的RNA降解酶 RNase抑制剂化UO.lmol的二硫苏糖醇DTT 1化，20〇11/化的反转录酶III Superscript III Reverse Transc;rip1:ase 化L，至总体积20化；
[0041 ] (4)混匀，置于50°C，保持60分钟；
[0042] (5)置于70°C保持15分钟，终止反应，得反转录产物cDNA;
[0043] (6)将步骤(5)制备的反转录产物置于零下20°C保存；
[0044] (7)PCR扩增:使用Bio-Rad的PCR仪T100,反应程序为:94°C保持4分钟，94°C保持40 秒，58 °C保持40秒，72 °C保持30秒，进行35个循环，于72 °C保持7分钟；反应体系为:cDNA模板 化L，上下游引物各0.化L，lOmM dNTPS(四种脱氧核巧酸的混合物）0.如L，511/化的ES化q DM聚合酶0.祉L，10倍聚合酶链式反应缓冲液化L，然后用无菌水体积补足至
[0045] (8)对步骤(7)扩增得到的cDNA产物进行测序，得到测序结果cDNA的核巧酸序列；
[0046] (9)序列比对:将步骤(8)得到的测序结果cDNA核巧酸序列与化aLCR78基因的核巧 酸序列比较，步骤(8)所述的测序结果既包括含有化aLCR78基因内含子的cDNA核巧酸序列， 步骤(8)所述的测序结果也包括不含化aLCR78基因内含子的cDNA核巧酸序列，则该甘蓝型 油菜为高油酸含量的甘蓝型油菜;所述化aLCR78基因的核巧酸序列如SEQ ID NO.4的核巧 酸序列所示；
[0047] 或将步骤(8)测得的测序结果cDNA的核巧酸序列与化aLCR78基因的核巧酸序列比 较，步骤(8)所述的测序结果均为不含化aLCR78基因内含子的cDNA核巧酸序列，则该甘蓝型 油菜为低油酸含量的甘蓝型油菜;所述化aLCR78基因的核巧酸序列如SEQ ID NO.4的核巧 酸序列所示。
[004引本发明相关的术语：
[0049] 双低油菜:同时具有低芥酸和低硫代葡萄糖武特性的油菜
[0050] PCR:聚合酶链式反应，一种在特定引物，聚合酶W及四种核巧酸参与下，经过预变 性、变性、退火、延伸等步骤，达到快速扩增特异DNA片段的技术
[0051] 高油酸材料:经过物理或者化学诱变，或者自然形成的油酸含量高的油菜材料，油 酸含量一般>60 %，图中用G表示。
[0052] 本发明所述的高油酸材料可选自甘蓝型油菜的保持系100B的种子，或者也可W是 自然形成的油酸含量高的油菜材料。甘蓝型油菜的芥酸和油酸之间存在极显著的负相关的 关系(周永明，甘蓝型油菜种子中几种主要脂肪酸含量的遗传，作物学报[J] ,1987)，因此低 芥酸油菜可W被认为是高油酸油菜。按照中华人民共和国农业部2000公布实施的行业标 准一一低芥酸菜巧油NY416-2000的规定，低芥酸油菜油酸的含量在50%-66%之间，另据菜 巧油GB1536-2004的规定，低芥酸菜巧油的油酸含量在51%-70%之间，但是高油酸油菜的 含量的国家标准一直未见公布，按照目前发表的文献，学术界一般认为油菜的油酸含量〉 60%的才能被称为高油酸油菜(石东乔，周奕华，张丽华等，农杆菌介导的油菜脂肪酸调控 基因工程研究，高技术通讯[J] ,2001，（2): 1-7)(官春云，福射育种获得油菜高油酸材料，作 物学报[J]，2006,32(11) :1626-1629)。结合上述文献和国家标准的规定，本发明设及的高 油酸油菜的油酸含量>60%，可W被认为是高油酸油菜。
[0053] 高油酸材料的对照材料:未做任何处理的原始材料，图中用CK表示
[0054] 低油酸材料:油酸含量<40%，多是高芥酸的材料，图中用D表示
[0055] 内含子:断裂基因的非编码区，可被转录，但在mRNA加工过程中被剪切掉
[0056] 外显子:断裂基因中的编码序列。外显子是真核生物基因的一部分，它在剪接后仍 会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。
[0057] 可变剪切:大多数真核基因转录产生的mRNA前体是按一种方式剪接产生出一种成 熟mRNA分子，因而只翻译成一种蛋白质。但有些基因的一个mRNA前体通过不同的剪接方式 (选择不同的剪接位点)产生不同的mRNA剪接异构体，运一过程称为可变剪接。
[0058] 类型有W下几种:一般认为，可变剪接有5种基本形式:①内含子保留；②可变的5 ' 端;③可变的3'端;④外显子盒;⑤互斥外显子(一组外显子中只选其一）。也有分为巧巾形式 的，加上可变的起始或末端外显子，而运两种形式更有可能是可变启动子、可变polyA位点 造成的（李稚锋，真核基因可变剪接研究现状与展望，生物信息学[J]，2004,2(2)，35-38) (Roberts GC, Smith CW.Alternative splicing:combinatorial output from the genome.Curr Opin Chem Biol[J],2002,6(3):375-383)(Moderk B,Lee C.A genomic view of alternative splicing.Na1:ure Genet[J],2002,30:13-19)。
[0059] 本发明采用对一个较为简单的基因进行克隆、测序，序列比较，可在较短时间内对 油菜的油酸含量作出快速的初步判断。优点如下：（1)RNA提取和反转录的技术操作都十分 成熟，耗时短，失败率极低；（2)PCR反应体系和反应程序都便于操作；（3)该基因全长不到 400bp，容易克隆，得到测序的结果时间短；（4)DNAMAN6.0软件操作简便，显示界面清晰，对 命令的响应速度快，可在极短时间内完成序列的比对工作，得到准确的结论。
[0060] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想的前提下，还可W做出其他多种形式的修改、替换或者变更。
[0061] W下W实施例形式的具体实施方法，对本发明的上述内容在做进一步的详细说 明，但不应理解为下述实施例用于限定本发明的保护范围。
【附图说明】
[0062] 图1、彭埼论文化aLCR78基因序列与高油酸材料的化aLCR78基因序列、高油酸材料 的化aLCR78基因的保留内含子的cDNA基因序列的比对结果图。
[0063] 图 1 中，黑色间断线表示 G-BnaLCR78genome DM 和 G-BnaLCR78-2 比 化化CR78genome DNA多出的核巧酸，黑色连续的实线表示G-化化CR78-2保留了内含子序 列；
[0064] 其中，BnaLCR78genome DNA:彭巧论文公开的&iaLCR78基因序列；
[0065] G-BnaLCR78genome DNA: W高油酸油菜的DNA为模板扩