一种IgG1吸附剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种属于医学领域，具体涉及一种可用于血液灌流的IgGl吸附剂及 其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 肾移植受者体内群体反应性抗体（PRA)的存在及该抗体的致敏程度对于移植 术后发生急性排斥反应关系甚为密切，对移植器官的存活率也有显著影响。免疫高敏 (PRA>80% )即PRA水平较高患者的肾移植效果较差，患者易产生超急性、加速性、急性排斥 反应，直接导致移植物失功或缩短移植术后肾存活时间。有研宄发现只有IgG类抗HLA抗 体才是真正影响器官移植物存活的抗体。
[0003] 目前，对高PRA水平患者进行预处理以使其可接受肾移植手术是全球性难题。临 床常用的手段及其限制如下：（1)良好的HLA配型，可杜绝或减少急性排斥的发生率，但等 待合适配型会导致手术时间延后。（2)静脉注射小剂量免疫球蛋白（IvIG)或联合血浆置换 (PP)进行脱敏治疗也经常采用，但术后急性排斥反应（AHR)发生率较高。（3)血浆置换能 够清除部分PRA抗体，但有益物质的丢失尤其此法本身就是一种容易引起人体致敏反应的 方式，使用受到限制。（4)使用新型免疫抑制剂如Neoral、MMF、FK506等，其抗排斥反应功 能得到公认，但是除了药物价格昂贵且需长期服用外，对人体的毒副性作用也不容忽视。
[0004] 目前临床应用较多、效果较好的方式是免疫吸附（IA)，最具有代表性的是1986年 首次应用于抗移植排斥反应蛋白A免疫吸附剂。蛋白A吸附材料对多种免疫性疾病的治疗 有效性已经得到证实，并获得美国FDA批准。但是，蛋白A吸附材料也存在一些缺陷，从而 限制了它的推广。首先，蛋白A价格高昂，给普通患者带来了沉重的经济负担；其次，蛋白A 作为一种蛋白质配基而容易变性，吸附材料的生产、运输、保存和使用带来不便；其三，蛋白 A是一种生物源性大分子，如果脱落容易给患者带来风险。
[0005] 另外，蛋白A吸附柱等免疫吸附剂采用的载体活化方法一般采用环氧氯丙烷法， 手臂分子只有四个原子，链节较短，对于IgG类大分子的吸附存在空间位置上的需求难以 匹配。如果想延长手臂分子，最通常的方法是先将多糖类载体的羟基用环氧氯丙烷接上二 胺类间隔臂，再经醛化（如戊二醛）后与配基偶联生成希夫碱，最后还原希夫碱双键得到吸 附材料。该制备方法中，活化步骤繁琐，且经过多步反应后，载体上用于固载配基的活性官 能团不断减少。因此，增加了免疫吸附剂的制备成本，并影响了其吸附性能。
[0006] 因此，如何克服蛋白A吸附材料的这些缺陷，设计和构建既具有相当的IgG吸附能 力的免疫吸附效率，又具有稳定的物理化学性质，且具有相对低廉的成本的新型免疫吸附 剂，具有重要的研宄价值和现实意义。
【发明内容】
[0007] 本发明的第一目的在于克服吸附材料的缺陷，提供一种安全、有效、成本低廉，性 能稳定可靠的IgGl吸附剂。本发明的第二目的是提供上述IgGl吸附剂的制备方法。本 发明第三个目的在于提供上述IgGl吸附剂的应用，在血液中IgGl的吸附和临床上清除与 IgGl相关的器官移植领域的群体性反应抗体（PRA)的应用。
[0008] 本发明的第一个方面是提供一种IgGl吸附剂，采用酸酐交联后的琼脂糖微球或 纤维素微球作为载体，所述酸酐为乙二胺四乙酸酐、1，4-二苯二胺四乙酸酐或1，4-二苄二 胺四乙酸酐，所述配基为酪氨酸或色氨酸；
[0009] 所述酸酐交联后的琼脂糖微球或纤维素微球的化学结构式如下所示：
[0010]
【主权项】
1. 一种IgGl吸附剂，其特征在于，采用酸酐交联后的琼脂糖微球或纤维素微球作为载 体，所述酸酐为乙二胺四乙酸酐、1，4-二苯二胺四乙酸酐或1，4-二苄二胺四乙酸酐，所述 配基为酪氨酸或色氨酸； 所述酸酐交联后的琼脂糖微球或纤维素微球的化学结构式如下所示：
所述IgGl吸附剂的化学结构式如下所示： -
7 其中， W为琼脂糖微球或纤维素微球， X为酸酐交联后的琼脂糖微球或纤维素微球， Y为亚乙基、对亚苯基或对亚二甲苯基， R为对羟基苯基或β-吲哚基。
2. -种权利要求1所述的IgGl吸附剂的制备方法，其特征在于，活化载体的酸酐的有 效量为110-180 μ mol/ml，载体固载配基的量为70-130 μ mol/ml。
3. -种权利要求1所述的IgGl吸附剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 琼脂糖微球或纤维素微球的交联：将琼脂糖微球或纤维素微球、酸酐和液态有机 碱在30-40°C下反应4-10h，过滤，产物用水洗，其中，琼脂糖微球或纤维素微球、酸酐和液 态有机碱的体积比为1 : (0.01-0.2) : (20-50); (b) 载体的活化：将交联后得到的载体与酸酐和液态有机碱在20-30 °C下反应 4-12h，过滤，产物用水洗，其中，交联后得到的载体、酸酐和液态有机碱的体积比为 1 ： (0.01-0. 2) ： (20-50)； (c) 配基的固载：将活化后的载体与配基和液态有机碱在0-40 °C下反 应4-10h，产物用水洗，其中，活化后的载体、配基和液态有机碱的用量比为 ImL ： (0. 05-0. 2g) ： (4〇-60mL) 〇
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤a中，琼脂糖微球或纤维素微球、 酸酐和液态有机碱的体积比为I : (0.05-0. 1) : 30;步骤b中，交联后得到的载体、酸酐 和液态有机碱的体积比为I : (0.05-0. 1) : 30;步骤c中，活化后的载体、配基和液态有 机碱的用量比为ImL : 0. Ig : 50mL。
5. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述液态有机碱选自吡啶、三乙胺、 三甲胺、三乙醇胺、二乙醇胺、N，N-二异丙基乙胺、二异丙基胺和喹啉中的一种或多种。
6. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述琼脂糖微球采用反相悬浮包埋 法或膜乳化法制备而成；所述纤维素微球采用乳化-固化法、喷雾干燥法或凝聚法制备而 成。
7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述琼脂糖微球具体按照下述步骤 制备而成： 将琼脂糖粉溶于水中配成质量百分浓度为4-15 %的琼脂糖溶液；将溶解好的琼脂糖 溶液加入到含分散剂的油相中，45-65°C下搅拌分散约0. 5-1. 5h使琼脂成球，冷却，停止搅 拌并出料、洗涤即得琼脂糖微球； 其中，所述油相为色拉油、200#溶剂油和正己烷中的一种或多种；所述分散剂为司盘 85、司盘80、吐温80和吐温20中的一种或多种，所述分散剂在油相中的质量百分浓度为 0. 5-5. 0% ;所述琼脂糖溶液与油相体积比为1 : (1-5)。
8. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述纤维素微球具体按照下述步骤 制备而成： 将纤维素树脂溶解在有机溶剂中配成质量百分浓度为6-20%的纤维素溶液，然后加入 致孔剂，搅拌均匀后，加入到含分散剂的水相中，25-35°C下搅拌4-10小时，停止搅拌并出 料、洗涤，然后进行皂化处理，即得纤维素微球； 其中，纤维素溶液与致孔剂的体积比为（100-200) : (120-250);纤维素溶液与致孔剂 的总体积与水相的体积比为（1-5) : (1-5)。
9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述致孔剂由体积比为 (50-85) : (15-35) : (70-120)的十二醇、乙醇和邻苯二甲酸二甲酯组成；所述分散剂为 明胶和聚乙烯醇的混合物，二者的质量比为（7-11) : 1。
10. 根据权利要求3或8所述的制备方法，其特征在于，制备所述纤维素微球的纤维素 树脂为二醋酸纤维素。
【专利摘要】本吸附剂通过乙二胺四乙酸酐、1,4-二苯二胺四乙酸酐或1,4-二苄二胺四乙酸酐交联、活化琼脂糖或纤维素，然后与酪氨酸或色氨酸溶液反应而制得。本发明的载体具有良好的血液相容性和机械性能，所用交联活化成步骤简单、制备安全，交联活化试剂兼有间隔手臂和吸附功能基团的双重用途；吸附剂通过空间选择、电荷作用及疏水作用实现对免疫球蛋白IgG1的相对特异性吸附，而对IgM和IgA吸附率较低，吸附率IgG1/IgM(IgA)＝2-4，此吸附剂可用于对血液中IgG1的吸附和临床上与IgG1相关的器官移植领域的群体性反应抗体(PRA)的清除。
【IPC分类】B01J20-30, B01D15-00, B01J20-28, B01J20-26
【公开号】CN104525150
【申请号】CN201410698607
【发明人】董凡, 郭延河
【申请人】珠海健帆生物科技股份有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年11月26日