明配套仪器是小型便携仪器，仪器只与芯片发生物理接触，芯片内液体不与仪器接触，不会污染仪器而产生交叉干扰。
【附图说明】
[0056]图1为脑钠肽定量检测微流控芯片主体结构示意图，其中I为顶板，2为底板，3为气栗，4为加样口，5为标记抗体存储池，6为过滤区，7为磁颗粒包被区，8为检测区，9为清洗液存储池，1为发光基底液存储池，11为盖子，12为样本填充区，13为样本混合区，14为清洗区，15为废液池，16为液体释放通道，17为发光基底液和清洗液存储池让位孔(于顶板)，18为磁铁滑轨让位孔。
[0057]图2为脑钠肽定量检测的完整微流控芯片结构示意图，其中I为顶板，2为底板，19为双面胶带，20为单面胶带，21为发光基底液和清洗液存储池让位孔(于双面胶带)，22为混合液流入过滤区时的让位孔。
[0058]图3为双发光基底液的微流控芯片底板结构示意图，其中23为发光基底液存储池A，24为发光基底液存储池B，25为预混合通道。
【具体实施方式】
[0059]本发明公开了一种cTnl定量检测的微流控磁微粒化学发光方法及其专用微流控芯片，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0060]为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0061 ]实施例1:酶促化学发光测定cTnl
[0062](一)抗体标记
[0063]取50yg HRP溶解于ImL蒸馏水中，再加入1ymol新配Na14溶液，室温避光反应20min后，以ImM pH4.4醋酸钠缓冲液透析纯化溶液。再以pH9.5碳酸盐缓冲液将pH调至9.0，加入10yg抗cTnl单抗，室温避光反应2h。加0.1mL 4mg/mL新配NaBH4，混勾后于4°C反应2h。将上述溶液装入透析袋，以0.15M pH7.4PBS透析，4°C过夜，得到HRP标记cTnl抗体。
[0064]向ρΗ7.4磷酸缓冲液中加入Img磁颗粒(直径为2ym)、10yg EDC和15yg NHS溶液和10?30yg抗cTnl单抗(与HRP标记的抗体不同)溶液，混合均勾并于室温下反应4h，加入Img甘氨酸封闭。以磁铁富集纯化，去除未反应的cTnl单抗，得到磁颗粒标记cTnl抗体。
[0065](二)微流控芯片组装
[0066]HRP 标记 cTnl 抗体溶液中含1%BSA、0.2% 吐温20和0.05%Proclin300的 ρΗ7.4硼酸缓冲液;磁颗粒标记cTnl抗体溶液为包含0.5%BSA、2%葡萄糖、I %吐温-20和0.05%Proclin300的ρΗ7.4硼酸缓冲液。
[0067]将HRP标抗体溶液放入顶板标记抗体存储池中，密封。将磁标抗体溶液放入底板磁颗粒包被区中，室温干燥。
[0068]清洗液为0.3%BSA,0.2%吐温-20和0.03%Proclin300的pH7.2硼酸缓冲液。将清洗液注入清洗液存储池。发光基底液分为HRP底物(鲁米诺的双氧水溶液)和碱性增强液(苯衍生物的碱性溶液)，分别注入发光基底液存储池A(23)和发光基底液存储池B(24)中，密封。按图1所示，将过滤区粘入底板中。然后按图2所示，以单面胶带和双面胶带，将顶板和底板组装成微流控芯片。装入铝箔袋中，密封4°保存。
[0069](三)样本检测
[°07°]用正常人血楽作稀释液，将。1']11标准品稀释成如下浓度:(^8/1111、5(^8/1111、100?区/ml、500pg/ml、lng/ml、5ng/ml、lOng/ml和50ng/ml。
[0071]将50μ1样本滴入加样口后，盖上盖子。将微流控芯片放入配套仪器(磁铁磁感应强度为6000高斯)中，仪器挤出HRP标记单抗，并使样本和HRP标记单抗混合均匀后注入底板过滤区。样本过滤后，到达微通道，并溶解磁颗粒标记单抗，磁铁加速样本反应，形成HRP标记单抗-cTnl抗原-磁颗粒标记单抗的三明治结构，然后磁铁收集磁颗粒。存储池释放清洗液，将磁颗粒清洗后，发光基底液释放，仪器检测系统检测发光信号强度。总检测时间15min。每个样本分别用3个微流控芯片测定3次，取平均值，绘制标准曲线。
[0072]将50μ1全血样本滴入加样口，15分钟内仪器检测系统检测发光信号强度，依据标准曲线获得样本中cTnl浓度。
[0073]检测原理为:当全血加入微流控芯片后，全血先与HRP标记抗体混合，然后经过滤区后，混合了HRP标记抗体的血浆到达微通道，血浆溶解磁标记抗体。当血样中含有cTnl，则形成HRP标记抗体-cTnl-磁颗粒标记抗体的三明治结构(双抗体夹心法)。经清洗后，再发光基底液作用下发光，仪器检测系统测试发光信号。依据配套仪器获取的标准曲线，进而分析血样中cTnl浓度。样本中cTnl含量越高，则发光信号越强。
[0074]结果表明，其最低检测限为50pg/ml，最低定量限为200pg/ml，定量检测范围为
0.05?50ng/ml，线性相关系数R2>0.99 ；在检测范围内，未出现HOOK效应;且批内与批间重复性均小于10%。可为心梗心衰疾病诊断提供参考。
[0075]实施例2:直接化学发光测定cTnl
[0076](— )抗体标记
[0077]向磷酸缓冲液中加入适量活化的吖啶酯和10yg抗cTnl单抗溶液，混合均匀后于室温下反应3h，加入Img甘氨酸封闭。透析分离纯化，得到吖啶酯标记cTnl抗体。
[0078]向Iml 1mM pH7.4磷酸缓冲液中加入Img磁颗粒(直径为Ιμπι)、20yg EDC和20ygNHS溶液和30yg链霉亲和素，混合均匀并于室温下反应4h，加入Img甘氨酸封闭。以磁铁吸附富集，去除未反应的链霉亲和素，得到磁颗粒标记链霉亲和素。
[0079]将20yg抗cTnl单抗加入1yL0.25mg/mL Sulfo-NHS-LC-b1tin溶液中，反应lh。超滤离心纯化，去除未反应的生物素，得到b1tin-cTnl抗体。
[0080]通过亲和素-生物素间的相互作用，把抗cTnl抗体连接到磁颗粒表面，得到磁颗粒标记cTnl抗体。其中亲和素标记的磁颗粒和生物素化的抗体比例在I: 14?2:105。
[0081 ] (二)微流控芯片组装
[0082]吖啶酯标记cTnl抗体溶液中含0.5%BSA、I %甘油、0.2%吐温20、I %曲拉通X-100和0.1 %叠氮钠的PH7.4磷酸盐缓冲液;磁颗粒标记cTnl抗体溶液为包含0.2%BSA、0.2%酪蛋白、I %蔗糖、0.5 %吐温20、0.5 %曲拉通X-100和0.1 %叠氮钠的pH7.4磷酸盐缓冲液。将吖啶酯标记抗体溶液放入顶板标记抗体存储池中，密封。将磁标抗体溶液放入底板磁颗粒包被区中，室温干燥。
[0083]清洗液为0.3%BSA,0.5%吐温20、I %曲拉通X-100和0.02 %叠氮钠的pH7.2磷酸盐缓冲液。将清洗液注入清洗液存储池。发光基底液分为包含双氧水溶液和碱性溶液，分别注入发光基底液存储池A(23)和发光基底液存储池B(24)，密封。按图1所示，将滤血膜粘入底板过滤区中，将存储池内置入底板。然后按图2所示，以单面胶带和双面胶带，将顶板和底板组装成微流控芯片。装入铝箔袋中，密封4°保存。
[0084](三)样本检测
[0085]用正常人血浆作稀释液，将cTnl标准品稀释成如下浓度:0pg/ml、100pg/ml、500pg/ml、lng/ml、5ng/ml、lOng/ml和50ng/ml。
[0086]将50μ1样本滴入加样口后，盖上盖子。将微流控芯片放入配套仪器(磁铁磁感应强度为4000高斯)中，仪器挤出吖