本发明涉及对映体拆分和检测技术领域，具体涉及一种氟比洛芬对映体的拆分。
背景技术：
氟比洛芬，又名氟联苯丙酸、氟布洛芬，风平片，氟比洛芬是一种优秀的非甾体消炎镇痛药，主要用于治疗类风湿关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎、外伤疼痛和其他疼痛。该药口服有效，耐受性好，长期使用既不促进也不抑制自身代谢，其通过抑制前列腺素合成酶环氧酶的活性从而起到消炎镇痛的作用。
从化学结构来看，氟比洛芬有一个手性碳原子，有两个异构体，其两种异构体具有截然不同的药理活性。其中S型能更有效地抑制环氧化酶，是消炎镇痛的主要成分，R型虽无抗炎作用，但近期研究证明，R型能抑制Aβ－42的表达，并且在体内不会转化为(S)－氟比洛芬，目前已进入治疗前列腺癌和阿尔兹海默病的Ⅲ期临床研究。目前，市场上销售和应用的是其消旋体，然而，与消旋体相比，S对映体用消旋体的半量就可以达到相同的治疗效果，而且还可以减少消旋体中R对映体带来的不良影响。因此，对氟比洛芬对映体的拆分就显得尤为重要。
对映体的分离和测定在分离科学上曾被认为是最困难的工作之一。目前，用于手性拆分的方法主要有结晶法、酶法和色谱法等。结晶法用于工业制备，产物为外消旋体，不能用于旋光度测定。酶法拆分得到的产物旋光纯度很高，适合作各种生物活性和药理实验。随着色谱科学的发展，现代色谱分析技术在对映体分离方面显示出巨大的优越性，色谱法已逐渐成为目前手性分离的主要手段。其中主要有气相色谱(GC)和高效液相色(HPLC)、薄层色谱、超临界流体色谱法、高效毛细管电泳法(HPCE)等。
HPCE与传统的分离方法相比，显著特点是简单、高效、快速和微量；还具备了经济、清洁、易于自动化、一机多用和环境污染少等优点。在手性化合物的分离方面，相对于其它分离技术而言，HPCE具有可灵活选择操作模式和手性选择剂、试剂及样品用量少且对环境污染小、分析速度快、应用范围广等许多优点。
目前，国内外的文献中还没有采用毛细管电泳技术分离检测氟比洛芬的报道，因此，本发明采用毛细管电泳技术对氟比洛芬进行了拆分，建立了一种分离效果好、灵敏度高的分析方法来对氟比洛芬分析检测，这对于氟比洛芬质量的控制和其在临床上的应用具有重大的现实意义。
技术实现要素：
本发明的发明目的在于：提供一种用高效液相毛细管电泳对氟比洛芬进行拆分的方法，该方法具有可灵活选择操作模式和手性选择剂、试剂及样品用量少且对环境污染小、分析速度快、应用范围广等许多优点，对氟比洛芬进行拆分的分离效果好且灵敏度高。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种高效毛细管电泳拆分氟比洛芬对映体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以tris-柠檬酸作为缓冲液，在该tris-柠檬酸缓冲液中添加手性选择试剂作为缓冲液体系，混合均匀后，超声脱气5-10min并用0.22μm的微孔滤膜过滤；
(2)用去离子水配制氟比洛芬对映体样品，样品的浓度为0.18mg/mL；
(3)调节毛细管电泳参数为：分离电压为20-25KV，毛细管温度为20-25℃，压力进样为2.0psiX20s，紫外检测波长为250-265nm；正极进氟比洛芬对映体样品，负极检测；
(4)在(3)设定的毛细管电泳参数下运行毛细管电泳仪，待基线平稳且基线波动在0.1mAu范围内时进样，实现了氟比洛芬对映体的基线分离。
在本发明中，进一步的，所述步骤(1)中的手性选择试剂为甲基-β-环糊精、乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精或葡萄糖基-β-环糊精中的一种。
在本发明中，进一步的，所述步骤(1)中的手性选择试剂的浓度为4-12mmol/L，添加量为10％-15％的体积。
在本发明中，进一步的，所述步骤(1)中的tris-柠檬酸的浓度为50-60mmol/L，pH为4.2-4.5。
在本发明中，进一步的，所述步骤(3)中的分离电压为22-24KV。
在本发明中，进一步的，所述的分离温度为22-25℃。
在本发明中，进一步的，所述的紫外检测波长为258-262nm。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
(1)本发明采用的拆分方法是高效毛细管电泳法，与其他拆分方法相比，具有可灵活选择操作模式和手性选择剂、试剂及样品用量少且对环境污染小、分析速度快、应用范围广等许多优点，用该方法对氟比洛芬对映体进行拆分的分离效果好且灵敏度高。
(2)目前的研究中，并没有很多关于氟比洛芬对映体的拆分，用高效毛细管电泳对氟比洛芬对映体进行拆分的研究更是没有。而本发明采用高效毛细管电泳法，经过一系列的实验研究后，摸索出了拆分氟比洛芬对映体的最佳毛细管电泳参数，在该参数下，可以实现氟比洛芬对映体的基线分离。因此，本发明为氟比洛芬对映体的拆分提供了一种高效简便的方法，对氟比洛芬质量的控制和其在临床上的应用具有现实意义。
【具体实施方式】
以下给出实施例，对本发明作进一步说明。
实施例1
1.电泳参数的设定
分离电压为22KV；分离温度为22℃；紫外检测波长为258nm；压力进样为2.0psiX20s。
2.缓冲液体系的制备
缓冲液体系为加入10％(V)4mmol/L甲基-β-环糊精的tris-柠檬酸，浓度为50mmol/L，pH为4.2，并用0.22μm的水性滤膜过滤，待用。
3.进样拆分
按设定的电泳参数运行高效毛细管电泳仪，先用0.22μm水性滤膜过滤过的蒸馏水走30min，再用缓冲液体系走30min，再加电场30min，如此循环，直到基线平稳且基线波动在0.3mV以内时，正极进氟比洛芬对映体样品，负极检测。
实施例2
1.电泳参数的设定
分离电压为23KV；分离温度为23℃；紫外检测波长为260nm；压力进样为2.0psiX20s。
2.缓冲液体系的制备
缓冲液体系为加入12％(V)8mmol/L乙基-β-环糊精的tris-柠檬酸，浓度为55mmol/L，pH为4.3，并用0.22μm的水性滤膜过滤，待用。
3.进样拆分
按设定的电泳参数运行高效毛细管电泳仪，先用0.22μm水性滤膜过滤过的蒸馏水走30min，再用缓冲液体系走30min，再加电场30min，如此循环，直到基线平稳且基线波动在0.3mV以内时，正极进氟比洛芬对映体样品，负极检测。
实施例3
1.电泳参数的设定
分离电压为24KV；分离温度为25℃；紫外检测波长为262nm；压力进样为2.0psiX20s。
2.缓冲液体系的制备
缓冲液体系为加入15％(V)12mmol/L羟丙基-β-环糊精的tris-柠檬酸，浓度为60mmol/L，pH为4.5，并用0.22μm的水性滤膜过滤，待用。
3.进样拆分
按设定的电泳参数运行高效毛细管电泳仪，先用0.22μm水性滤膜过滤过的蒸馏水走30min，再用缓冲液体系走30min，再加电场30min，如此循环，直到基线平稳且基线波动在0.3mV以内时，正极进氟比洛芬对映体样品，负极检测。
在上述3个实施例所采用的条件下，用高效毛细管电泳对氟比洛芬对映体进行拆分，都成功的实现了基线分离。