专利名称：一种对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法
技术领域：
本发明及一种对二维固相的同一捕获区域上对不同分析物进行同步检测的方法，属于二维固相上进行分析物检测技术领域。
背景技术：
现有科学文献中报道并已商业化的检测方法都是将分析物分布在一个二维空间里。以一个早早孕测试为例，在这个测试中，在膜的表面首先标记上抗人体绒(毛)膜促性腺激素(HCG)的捕获抗体。而一种包含HCG的生物样品(如尿液)会与一种可见试剂(诸如胶体金或有色乳胶或荧光素)反应，然后会与抗HCG的抗体偶联形成一个HCG偶联物。此偶联物然后流经膜上标记了捕获抗体的区域后，HCG偶联物就会被捕获而形成抗体-抗原-抗体“夹心法”偶联物，这样一来就可通过肉眼或仪器被检测出来。
以上是一个抗体夹心法形式的形成，同样原理可以也可以应用于标记抗原而检测抗体，在这种情况下，就会形成双抗原夹心法形式。
另一种结构是，膜上的不同区域标记不同的捕获抗体。与不同的分析物结合的抗体偶联物被分别捕获后在这些区域上形成的夹心法形式而可以以不同的点或线的形式被识别。例如一份尿样中的几种违禁药物能以列阵形式被检测出来。另一个例子就是微阵，即不同的分析物以微点的形式分布在玻片上，然后利用荧光结合的方式检测。
以上检测中，不管是单一抗体或者单一抗原的检测，还是列阵或者微阵，在同一个捕获区域内均只能检测一种抗体或者抗原，检测不仅耗时，而且耗资源。
发明内容
本发明的目的是提供一种简单、便捷、有效的对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，以克服现有技术的不同。
本发明是这样实现的首先采用传统的免疫标记法将一份针对各自特异性分析物的含有多种不同抗体或抗原的抗体或抗原混合物标记固定在一个二维固相的单一区域中，其次将一份包含着多种不同抗原或抗体分析物的样品与固定在该二维固相的单一区域中的抗体或抗原混合物进行特异性反应得抗原-抗体或抗体-抗原偶联物，然后用不同的有色试剂与另一份含有不同抗体或抗原的抗体或抗原混合物进行偶联得抗体或抗原偶联物，将所得的抗体或抗原偶联物流经二维固相上的抗原-抗体或抗体-抗原偶联物进行抗体或抗原捕获就会得到具有不同色彩的夹心法形式的偶联物，这些不同色彩的夹心法形式的偶联物又都同时处于一个捕获区域中，这样即可采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理，从而在二维固相的同一区域上同步检测出多种分析物。
二维固相指的是膜、玻片或试纸等。
单一区域指的是二维固相上的点或线。
不同的有色试剂指的是不同的荧光素、有色或荧光乳胶微粒、有色溶剂或胶质染料等。
在采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理时，使用CCD相机成像技术对夹心法形式的偶联物进行感光并获取图像，然后将该图像转换成数字信号输入电脑或输入具有分色图象分析软件的仪器中进行处理，从而得到不同色彩的夹心法形式的偶联物中的不同标记物的荧光折光率或颜色反射率的分辨值或量化值。
在采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理时，使用可以分辨发射或折射光波长的光学扫描装置来检测或量化同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物。
由于采用了上述技术方案，本发明可以在二维固相，比如膜、玻片或者试纸上标记上对各分析物有特异性的抗体或抗原混合物，然后将含有多种分析物的样品与其对应的特异性抗体反应，而每种抗体或抗原可以与不同的有色试剂偶联，这样固定在固相上的抗体或抗原被捕获后，每种分析物会与不同的有色试剂形成夹心法形式，但同时又都处于一个捕获区域中，使用CCD相机技术和成像分析软件来进行感光，转换成数字信号的处理，输入电脑或输入具有分色图象分析软件的仪器中即可分辨及量化不同标记物的荧光折射率或颜色反射率，使用可以分辨发射或折射光波长光学扫描装置来检测或量化多标记的点或线，这样即可方便地一次性在同一个捕获区域中将不同分析物检测出来。因此，本发明与现有技术相比，本发明不仅具有简单、便捷、有效的优点，而且还具有检测精度较高的优点。
具体实施例方式
具体实施例方式被检测的针对各自特异性分析物的不同的抗体或抗原混合物可以被固定于二维固相的同一区域中。一份包含着不同分析物的样品会与对各分析物有特异性的抗体或抗原混合物反应，每种抗体或抗原与不同的有色试剂偶联，比如不同的荧光素或不同有色乳胶微粒。当固定在固相上的抗体或抗原被捕获后，每种分析物会与不同的有色试剂形成夹心法形式，但同时又都处于一个捕获区域中。而每一种有色试剂都可以被检测，可以通过类似于印刷工业中采用的“色分离”技术的成像分析系统的CCD相机或其他成像系统来感光，并将色彩信息转换成数字信号，输入电脑或具有分色图象分析软件的仪器中，即可轻松来分辨和量化。对于荧光染料的检测，可以使用特定激发波长或宽波段激发光源，而使用特定的滤光片在摄像系统中的可以用来分析荧光发射率。当不同颜色的乳胶微粒被作为有色试剂使用时，可以使用白光测试其反射系数。而一个配备分色图象分析软件的CCD相机可以用来检测并分色与量化。
具体实施时可按以下方法进行实施首先采用传统的免疫标记法(即常用的免疫标记技术)根据所要检测的多种分析物将一份针对各自特异性分析物的含有多种不同抗体或抗原的抗体或抗原混合物标记固定在一个二维固相的单一区域中，其二维固相可以是膜、玻片或试纸等，膜最好采用硝酸纤维素膜，其单一区域可以取二维固相上的点或线；其次将一份包含着多种不同抗原或抗体分析物的样品与固定在该二维固相的单一区域中的抗体或抗原混合物按传统的方式进行特异性反应得抗原-抗体或抗体-抗原偶联物，然后用不同的有色试剂与另一份含有不同抗体或抗原的抗体或抗原混合物进行偶联得抗体或抗原偶联物，不同的有色试剂可以采用现有技术中不同的荧光素、有色或荧光乳胶微粒、有色溶剂或胶质染料等；然后将所得的抗体或抗原偶联物流经二维固相上的抗原-抗体或抗体-抗原偶联物进行抗体或抗原捕获就会得到具有不同色彩的夹心法形式的偶联物，这些不同色彩的夹心法形式的偶联物都同时处于一个捕获区域中，这样即可采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理，从而在二维固相的同一区域上同步检测出多种分析物。
在采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理时，使用CCD相机成像技术对夹心法形式的偶联物进行感光并获取图像，然后将该图像转换成数字信号输入电脑或输入到现有技术中常用的具有分色图象分析软件的仪器中进行处理，从而得到不同色彩的夹心法形式的偶联物中的不同标记物的荧光折光率或颜色反射率的分辨值或量化值；也可使用现有技术中可以分辨发射或折射光波长的光学扫描装置来检测或量化同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物。
权利要求
1.一种对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，它包括采用免疫标记法，其特征在于首先采用免疫标记法将一份针对各自特异性分析物的含有多种不同抗体或抗原的抗体或抗原混合物标记固定在一个二维固相的单一区域中，其次将一份包含着多种不同抗原或抗体分析物的样品与固定在该二维固相的单一区域中的抗体或抗原混合物进行特异性反应得抗原-抗体或抗体-抗原偶联物，然后用不同的有色试剂与另一份含有不同抗体或抗原的抗体或抗原混合物进行偶联得抗体或抗原偶联物，将所得的抗体或抗原偶联物流经二维固相上的抗原-抗体或抗体-抗原偶联物进行抗体或抗原捕获就会得到具有不同色彩的夹心法形式的偶联物，这些不同色彩的夹心法形式的偶联物又都同时处于一个捕获区域中，这样即可采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理，从而在二维固相的同一区域上同步检测出多种分析物。
2.根据权利要求1所述的对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，其特征在于二维固相指的是膜、玻片或试纸。
3.根据权利要求1所述的对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，其特征在于单一区域指的是二维固相上的点或线。
4.根据权利要求1所述的对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，其特征在于不同的有色试剂指的是不同的荧光素、有色或荧光乳胶微粒、有色溶剂或胶质染料。
5.根据权利要求1所述的对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，其特征在于在采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理时，使用CCD相机成像技术对夹心法形式的偶联物进行感光并获取图像，然后将该图像转换成数字信号输入电脑或输入具有分色图象分析软件的仪器中进行处理，从而得到不同色彩的夹心法形式的偶联物中的不同标记物的荧光折光率或颜色反射率的分辨值或量化值。
6.根据权利要求1所述的对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，其特征在于在采用色分离处理仪器对同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物进行同步分色检测和量化处理时，使用可以分辨发射或折射光波长的光学扫描装置来检测或量化同一区域中的具有不同色彩的夹心法形式的偶联物。
全文摘要
本发明公开了一种对二维固相的同一区域上多种分析物进行同步检测的方法，它首先采用免疫标记法将一份针对各自特异性分析物的含有多种不同抗体或抗原的抗体或抗原混合物标记固定在一个二维固相的单一区域中，其次将一份抗原或抗体分析物的样品与固定在固相上的抗体或抗原混合得抗原－抗体或抗体－抗原偶联物，然后用不同的有色试剂与另一份抗体或抗原混合物进行偶联得抗体或抗原偶联物，将所得的抗体或抗原偶联物流经二维固相上的抗原－抗体或抗体－抗原偶联物进行抗体或抗原捕获得到夹心法形式的偶联物，用色分离处理仪器对该偶联物进行同步分色检测和量化处理。本发明不仅具有简单、便捷、有效的优点，而且还具有检测精度较高的优点。
文档编号G01N21/25GK1971278SQ200610119219
公开日2007年5月30日 申请日期2006年12月6日 优先权日2006年12月6日
发明者陈国治 申请人:益思美诠生物科技(上海)有限公司