专利名称：：2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质的高效液相色谱分析方法
技术领域：
：本发明涉及一种2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质的高效液相色谱分析方法。
背景技术：
：2-甲氧甲基-4-氨基苯酚是一种染料中间体，尤其可作为氧化性染发剂中的显色剂，在染料，染发领域有着广泛的应用。起始原料2-甲氧甲基-4-硝基苯酚在金属催化剂钯的催化条件下被氢气还原，可以制备得到2-甲氧甲基-4-氨基苯酚2-甲氧甲基-4-氨基苯酚产品中可能存在原料2-甲氧甲基-4-硝基苯酚等杂质，其含量的高低直接影响最终产品的质量，甚至对人体造成很大的危害，因此分析2-甲氧甲基-4-氨基苯酚含量时对原料2-甲氧甲基-4-硝基苯酚等杂质含量的监控十分重要。目前尚未见测定2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质含量方法的报道。
发明内容本发明的目的是提供一种测定2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质的高效液相色谱分析方法。本发明的技术方案如下一种2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征是采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱条件为色谱柱C18，5|im，150x4,6mm(I.D.),流动相组成的体积比乙腈磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0^45:55，流速0.8ml/min，柱温30°C，检测波长232nm，进样量5-10|ll。按照本发明的高效液相色谱分析方法，将测定含量的进样样品浓度稀释50倍，观使2-甲氧甲基-4-氨基苯酚主体及其杂质的含量，本发明的流动相中添加磷酸盐20mmol/l(NH4)2HP04，用磷酸调节PH值为7.0。采用本发明的2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质的高效液相色谱分析方法，准确测定2-甲氧甲基-4-氨基苯酚主体含量的同时，可以准确测定杂质2-甲氧甲基-4-硝基苯酚的含量，为2-甲氧甲基-4-氨基苯酚的质量控制分析提供了简易可靠的分析方法。图1为样品的色谱图，其中图l-a为流动相中未添加磷酸-磷酸盐缓冲水溶液；图l-b为在流动相中添加磷酸盐20mmol/l(NH4)2HP04，用磷酸调节PH值为7.0。图中2.8分钟的峰为2-甲氧甲基-4-氨基苯酚，5.9分钟的峰为2-甲氧甲基-4-硝基苯酚。图2为紫外光谱图，其中图2-a为2-甲氧甲基-4-氨基苯酚紫外光谱图；图2-b为2-甲氧甲基-4-硝基苯酚紫外光谱图。图3为2-甲氧甲基-4-氨基苯酚标准曲线图。图4为2-甲氧甲基-4-硝氨基苯酚标准曲线图。图5为样品中原料2-甲氧甲基-4-硝氨基苯酚含量的色谱图。具体实施方式主要实验仪器及色谱条件Waters1525型高效液相色谱仪，Waters717plus自动进样器，配Waters2996型二极管阵列(PDA)检测器，色谱分离系统的控制和记录由WatersEmpower色谱管理系统完成。色谱柱选用的是C8,5pm,150x4.6mm(I.D),流动相乙腈磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH^7.0^45:55，流速0.8ml/min，柱温30°C，检测波长232nm。试剂与药品2-甲氧甲基-4-氨基苯酚对照品(>99.0%)2-甲氧甲基-4-硝基苯酚对照品(>99.0%)乙腈(HPLC级)；磷酸盐缓冲水溶液(PI^7.0)实验中流动相和溶液用水均为二次石英蒸馏水。实施例l:高效液相色谱条件的选择1.1流动相的选择实验用乙腈水=45:55的流动相等度洗脱，2-甲氧甲基-4-氨基苯酚与杂质分离情况良好。但由于2-甲氧甲基-4-氨基苯酚中的氨基和羟基会与色谱柱中残余的硅羟基发生相互作用，导致了2-甲氧甲基-4-氨基苯酚色谱峰有拖尾的现象(图l-a)，影响定量分析2-甲氧甲基-4-氨基苯酚的准确度。采用在流动相中添加磷酸盐20mmol/l(NH4)2HPO4并用磷酸调节PH值为7.0的方法，可消除色谱峰的拖尾现象(图l-b)。1.2检测波长的选择用二极管阵列检测器在200-400nm进行连续扫描，2-甲氧甲基-4-氨基苯酚在235nm和303nm处有特征吸收(图2-a)，而2-甲氧甲基-4-硝基苯酚在229nm和318nm处有特征吸收(图2-b)。兼顾各组分灵敏度，选择检测波长为232nm。1.3样品浓度的选择为了兼顾主成分含量与杂质含量的测定，在测定杂质时，样品的浓度必须足够大，以使杂质能够出峰；测定主成分时，溶液浓度过大会导致主峰超出线性范围而使定量不准，故将样品稀释50倍后再测定，试验准确度见表l。.实施例2:标准溶液及样品溶液的配制准确称量50.00mg2-甲氧甲基-4-氨基苯酚对照品，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为1.0mg/ml的2-甲氧甲基-4-氨基苯酚的标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度。准确称取25.00mg2-甲氧甲基-4-硝基苯酚对照品，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.5mg/ml的2-甲氧甲基_4-硝基苯酚的标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度。实施例3:标准曲线的制作高效液相色谱条件;色谱柱为C18,5(im,150x4.6mm(I.D);流动相组成的体积比乙腈磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0)—5:55;流速0.8ml/min;柱温3(TC;检测波长232nm。取2-甲氧甲基-4-氨基苯酚标准溶液lO)il进样，以峰面积对浓度作图(图3)。2-甲氧甲基-4-氨基苯酚在溶液浓度0.0001l.Omg/ml的范围内成线性，回归方程为A2-甲氣1—1'巡-4-筑械苯酚一193754.33232+3.31341E7C,r=0.99997取2-甲氧甲基-4-硝基苯酚标准溶液1(^1进样，以峰面积对浓度作图(图4)。2-甲氧甲基-4-硝基苯酚在溶液浓度为0.00010.10mg/ml的范围内成线性，回归方程为A2-iP氧屮巡-4-^^苯酚一12476.47946+1.79587E7C,r=0.99953当信噪比S/N=3时，测得2-甲氧甲基-4-氨基苯酚和2-甲氧甲基-4-硝基苯酚的最低检测限分别为0.00001mg/ml和0.00002mg/ml。实施例4:样品的测定4.1主含量的测定精确称取50.0mg2-甲氧甲基-4-氨基苯酚试样，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为l.Omg/ml的溶液。取上述l.Omg/ml溶液l.Oml置于50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得0.02mg/ml的溶液，备用。选择任意5个批号的样品，按上述方法配制0.02mg/ml样品溶液。高效液相色谱条件，色谱柱C,s,5pm,150x4.6mm(I.D);流动相组成的体积比乙腈磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0一45:55;流速0.8ml/min;柱温3(TC;检测波长232nm进行HPLC分析，进样量为10]ul(图l-b)。4.2杂质含量的测定选择任意五个批号的样品，按上述方法配制l.Omg/ml样品溶液。高效液相色谱条件色谱柱C!8，5pm，150x4.6mm(I.D);流动相组成的体积比乙腈磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0"45:55;流速为0.8ml/min;柱温为30°C;检测波长为232nm进行HPLC分析，进样量为10pl(图5)。样品中主成分2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及杂质2-甲氧甲基-4-硝基苯酚的检测结果列于表1。表l.检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>权利要求1.一种2-甲氧甲基-4-氨基苯酚的高效液相色谱分析方法，其特征在于包括如下步骤1)采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱的条件为色谱柱C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)，流动相组成的体积比乙腈∶磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0)＝45∶55，流速0.8ml/min，柱温30℃，检测波长232nm，进样量5-10μl；2)分别配制2-甲氧甲基-4-氨基苯酚、2-甲氧甲基-4-硝基苯酚的标准溶液及样品溶液；3)制作标准曲线；4)样品含量的测定。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，将测定含量的进样样品浓度稀释50倍，测定2-甲氧甲基-4-氨基苯酚主体及其杂质的含量。3.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，在流动相中添加磷酸盐20mmol/l(NH4)2HPO4，用磷酸调节PH值为7.0。全文摘要本发明公开了一种2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质的高效液相色谱分析方法。本发明采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱条件为色谱柱C<sub>18</sub>，5μm，150×4.6mm(I.D.)，流动相组成体积比乙腈∶磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0)＝45∶55，流速0.8ml/min，柱温30℃，检测波长232nm，进样量5-10μl，本发明的流动相中添加磷酸盐20mmol/l(NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>，用磷酸调节pH值为7.0，将测定含量的进样样品浓度稀释50倍，测定2-甲氧甲基-4-氨基苯酚主体及其杂质的含量。本发明为2-甲氧甲基-4-氨基苯酚的质量控制分析提供了简易可靠的分析方法。文档编号G01N30/89GK101216468SQ20081003256公开日2008年7月9日申请日期2008年1月11日优先权日2008年1月11日发明者刘慧青,莹黄申请人:上海化学试剂研究所