专利名称：乳宁片及其鉴别和含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂，即乳宁片及其鉴别和含量测定方法。
背景技术：
在现有技术中，乳宁片，中药部颁标准，标准编号WS3-B-3231_98，本品为石刁柏经加工制成的片。制法取石刁柏，粉碎成细粉，取细粉320g，加适量淀粉，混勻，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。鉴别(1)取本品5片，除去糖衣，研细，加水20ml，研磨， 滤过，取滤液lml，加茚三酮少许，加热，即显紫色。另取滤液0.5ml，加重氮化试剂(取对氨基苯磺酸钠2. 9g与亚硝酸钠0. 7g，用水30ml溶解)与α -萘胺乙醇溶液(4. 5 — 100)各 2滴，放置数分钟后显橙红色。再取滤液lml，加。α-萘酚乙醇溶液(1 — 20)2 3滴，摇勻，沿试管壁缓缓加入硫酸0.5ml，两液层接界处即显紫红色。( 取本品2片，除去糖衣， 研细，加氢氧化钠试液5ml，加热，能使碱性碘化汞钾试液湿润的滤纸变成红棕色。检查应符合片剂项下有关的各项规定(附录ID)。含量测定取本品10片，除去糖衣，精密称定， 研细，精密称取适量(相当于石刁柏0.7g)，照氮测定法(附录IX L第一法)测定，即得。 本品每片含总氮(N)不得少于11.2mg。功能与主治温肺祛痰，活血化瘀。用于痰瘀互结， 乳腺结块，肿胀疼痛及乳腺小时增生属上述证候者。用法与用量口服，一次4 6片，一日 3 4次，2 3个月为一疗程，其缺点是原质量标准中含量测定项少，不利于乳宁片产品的生产过程控制和产品的质量监控，药效也就很难保证，患者用药的安全隐患较大。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足而提供一种完善鉴别和含量测定、保证产品质量的乳宁片鉴别和含量测定方法。本发明的技术解决方案乳宁片的鉴别和含量测定方法乳宁片为取石刁柏，粉碎成细粉，取细粉320g，加入适量淀粉，混勻，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得，其鉴别和含量测定方法如下一、鉴别(1)取本品5片，除去糖衣，研细，加水20ml，研磨，滤过，取滤液1ml，加茚三酮少许，加热，即显紫色；另取滤液0. 5ml，加重氮化试剂取对氨基苯磺酸钠2. 9g与亚硝酸钠 0. 7g，用水30ml溶解，与α -萘胺乙醇溶液各2滴，放置数分钟后显橙红色；再取滤液1ml， 加α -萘酚乙醇溶液2 3滴，摇勻，沿试管壁缓缓加入硫酸0. 5ml，两液层接界处即显紫红色；或(2)取本品2片，除去糖衣，研细，加氢氧化钠试液5ml，加热，能使碱性碘化汞钾试液湿润的滤纸变成红棕色。二、含量测定(1)总氮量，取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量，照氮测定法测定，即得；本品每片含总氮(N)不得少于11. 2mgo
(2)菝葜皂苷元，照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水= 91 9为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按菝葜皂苷元峰计算，应不低于4000;对照品溶液的制备精密称取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每Iml含0.;3mg 的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品50片，除去包衣，精密称定，研细，取约半量，精密称定，具索氏提取器中，加甲醇回流提取至无色，甲醇液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，加盐酸anl，置水浴回流2小时，用40%氢氧化钠溶液调节至pH值为11，用三氯甲烷振摇提取 3次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液2μ 1、7μ 1，供试品溶液5 10μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；本品每片含石刁柏以菝葜皂苷元(C27H44O3) 计，不得少于30ug。本发明的优点是针对石刁柏中含有诸多苷类有效成分，特别是菝葜皂苷元含量较高，以菝葜皂苷元为检测指标，新增加了菝葜皂苷元的含量测定方法，通过参数试验筛选，建立了一种灵敏、专属、可靠的含量测定方法，使得本方法专属性强，准确度高，易于控制，从而有效提高乳宁片的产品质量，更好的保证乳宁片产品的疗效。下面将结合实例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
图1对照品的HPLC图谱。图2供试品的HPLC图谱。图3阴性样品的HPLC图谱。图4标准曲线。图5溶剂的HPLC图谱。图6对照药材HPLC图谱。
具体实施例方式乳宁片的鉴别和含量测定方法，乳宁片为取石刁柏，粉碎成细粉，取细粉320g，加入适量淀粉，混勻，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得，其特征在于鉴别和含量测定方法如下一、鉴别(1)取本品5片，除去糖衣，研细，加水20ml，研磨，滤过，取滤液1ml，加茚三酮少许，加热，即显紫色。另取滤液0.5ml，加重氮化试剂(取对氨基苯磺酸钠2. 9g与亚硝酸钠 0.7g，用水30ml溶解)与α-萘胺乙醇溶液5 — 100)各2滴，放置数分钟后显橙红色。 再取滤液Iml，加α -萘酚乙醇溶液(1 — 20) 2 3滴，摇勻，沿试管壁缓缓加入硫酸0. 5ml， 两液层接界处即显紫红色。(2)取本品2片，除去糖衣，研细，加氢氧化钠试液5ml，加热，能使碱性碘化汞钾试液湿润的滤纸变成红棕色。
二、含量测定(1)总氮量取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量(相当于石刁柏 0. 7g)，照氮测定法(中国药典2005年版一部附录IX L第一法)测定，即得。本品每片含总氮(N)不得少于11. 2mgo(2)菝葜皂苷元照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (91 9)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按菝葜皂苷元峰计算，应不低于4000。对照品溶液的制备精密称取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 3mg 的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品50片，除去包衣，精密称定，研细，取约半量，精密称定， 具索氏提取器中，加甲醇回流提取至无色，甲醇液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，加盐酸 anl，置水浴回流2小时，用40%氢氧化钠溶液调节至pH值约11，用三氯甲烷振摇提取3次， 每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液2 μ 1、7 μ 1，供试品溶液5 10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。本品每片含石刁柏以菝葜皂苷元(C27H44O3)计，不得少于30ug。实验例乳宁片是由石刁柏加工制成的制剂，为了更好的控制产品质量，对其质量标准进行了提高，采用高效液相色谱法测定了方中石刁柏的含量。含量测定石刁柏中含有大量的蛋白质，氨基酸，并含有黄酮类成分，据文献报道， 还含有甙类有效成分，其中菝葜皂苷元含量较高。本标准以菝葜皂苷元为指标，采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，蒸发光散射检测器，建立了一种灵敏、专属、可靠的含量测定方法。1、仪器与试药日本岛沣LC-10ATvp溶剂输液泵，Alltech EL SD2000检测器；德国赛多利斯电子天平(1/100000)。菝葜皂苷元对照品(110744-200306)，含量测定用，中国药品生物制品检定所。甲醇，色谱纯，美国Fisher公司；其它试剂均为分析纯。2、检测条件的选择由于菝葜皂苷元在紫外区无最大吸收，故考虑选择蒸发光散射检测器进行检测。 参照中国药典2005年版一部知母项下，比较了漂移管温度与气体流速，结果漂移管温度为 80°C，气体流速2.0ml/min时，目标物能够完全气化，采用甲醇-水(91 9)为流动相，分离良好。3、色谱条件的选择色谱柱AgilentSB Cw4. 6讓，5um)；流动相甲醇-水(91 9)；柱温 400C ；流速0. 8ml/min ；漂移管温度为80°C，气体流速2. Oml/min。理论塔板数以菝葜皂苷元峰计算N = 12223(计算机给出)，规定其理论板数按菝葜皂苷元峰计算，应不得低于 4000。在此色谱条件下，供试品色谱中，在与对照品色谱相同的保留时间处有色谱峰，与其它组分能基本达到基线分离，见图1、2、3。
4、专属性试验除去石刁柏的模拟处方采用完全相同制备方法制备的阴性样品，按正文方法测定。从阴性供试品色谱图可知，在菝葜皂苷元色谱峰处无任何峰，表明阴性对照无干扰。见图4。5、方法学试验5. 1线性关系考察精密称取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 7536mg的溶液，精密吸取上述溶液lul、2ul、;3ul、5ul、7ul、9ul，分别注入液相色谱仪，测定结果见表5。以峰面积积分值对数为纵坐标，菝葜皂苷元进样量对数为横坐标绘制标准曲线。结果表明，菝葜皂苷元进样量在0. 7536 6. 7824ug内，峰面积积分值对数与菝葜皂苷元进样量对数呈对数线性关系，对数回归方程为IogY = 2. 141ogX+5. 24，r = 0. 9984，标准曲线见图5、图6。表 权利要求
1. 一种乳宁片的鉴别和含量测定方法，乳宁片为取石刁柏，粉碎成细粉，取细粉320g， 加入适量淀粉，混勻，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得，其特征在于鉴别和含量测定方法如下一、鉴别(1)取本品5片，除去糖衣，研细，加水20ml，研磨，滤过，取滤液1ml，加茚三酮少许，加热，即显紫色；另取滤液0. 5ml，加重氮化试剂取对氨基苯磺酸钠2. 9g与亚硝酸钠0. 7g， 用水30ml溶解，与α -萘胺乙醇溶液各2滴，放置数分钟后显橙红色；再取滤液1ml，加 α -萘酚乙醇溶液2 3滴，摇勻，沿试管壁缓缓加入硫酸0. 5ml，两液层接界处即显紫红色；或(2)取本品2片，除去糖衣，研细，加氢氧化钠试液5ml，加热，能使碱性碘化汞钾试液湿润的滤纸变成红棕色。二、含量测定(1)总氮量，取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量，照氮测定法测定， 即得；本品每片含总氮(N)不得少于11. 2mg ；(2)菝葜皂苷元，照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水=91 9 为流动相；蒸发光散射检测器；理论板数按菝葜皂苷元峰计算，应不低于4000 ；对照品溶液的制备精密称取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 3mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本品50片，除去包衣，精密称定，研细，取约半量，精密称定，具索氏提取器中，加甲醇回流提取至无色，甲醇液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，加盐酸 anl，置水浴回流2小时，用40%氢氧化钠溶液调节至pH值为11，用三氯甲烷振摇提取3次， 每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液2 μ 1、7 μ 1，供试品溶液5 10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；本品每片含石刁柏以菝葜皂苷元(C27H44O3) 计，不得少于30ug。
全文摘要
本发明涉及一种乳宁片的鉴别和含量测定方法。鉴别取本品5片，除去糖衣，研细，加水20ml，研磨，滤过，取滤液1ml，加茚三酮少许，加热，即显紫色；另取滤液0.5ml，加重氮化试剂取对氨基苯磺酸钠2.9g与亚硝酸钠0.7g，用水30ml溶解，与α-萘胺乙醇溶液各2滴，放置数分钟后显橙红色；再取滤液1ml，加α-萘酚乙醇溶液2～3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入硫酸0.5ml，两液层接界处即显紫红色；含量测定本品每片含石刁柏以菝葜皂苷元(C27H44O3)计，不得少于30ug。本方法专属性强，准确度高，易于控制，从而有效提高乳宁片的产品质量，更好的保证乳宁片产品的疗效。
文档编号G01N21/78GK102507544SQ20111029391
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月7日 优先权日2011年10月7日
发明者姜华 申请人:通化正和药业有限公司