专利名称：测定铁‐碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于大分子分析测定领域，涉及测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法的应用。
背景技术：
铁是人体必须的微量元素，由于摄入不足、利用受限或其他原因引起的铁缺乏相 当普遍，缺铁性贫血是当今世界上分布最广的营养缺乏病。铁一碳水化合物络合物是目前广泛应用的抗缺铁性贫血的补铁剂，特别是应用于肾脏疾病血液透析所导致的缺铁性贫血，具有快速高效、定位准确、危险性低的优点。铁一碳水化合物络合物是由碳氢化合物和多核氢氧化铁胶体络合得到的。其中，铁核处于核心位置，碳水化合物处于分子外层，呈一种同心球状结构。而不同品种铁一碳水化合物络合物之间的主要差别在于碳水化合物的种类不同或分子量不同。例如，蔗糖铁是由氢氧化铁胶体和蔗糖络合制备的一种水溶性氢氧化铁蔗糖复合物，其包含的铁处于非离子状态。在分子中氢氧化铁胶体组成多核铁母核，而蔗糖通过其活泼羟基取代铁母核表面的水分子与之结合，二者的结合力为非共价键分子间力。在蔗糖铁中，蔗糖作为氢氧化铁胶体的增溶剂存在，蔗糖与氢氧化铁胶体存在一个动态的平衡。这种多核的氢氧化铁核心被大量非共价键的蔗糖分子浅浅的包绕，从而形成一个大约43Kda的大分子复合物。该多核心的铁复合物结构上类似于天然存在的铁蛋白，具有合适的稳定性，既可保证在生理状态下没有离子铁释放，又能够很好的适应生理性铁的吸收利用。研究人员曾对铁一碳水化合物络合物的安全性评价做了一些有益的尝试。Dr. Nissim 在〈〈Preparation and Standardisation of Saccharated Iron Oxide forIntravenous Adminstration))The Lancet. April 23, 1949. (686-689) —文中，曾经对鹿糖铁复合物安全性(用急毒实验中实验动物存活率来定量评估)和其浊点进行关联，发现二者具有相关关系使用相同剂量下，随着浊点的下降，实验动物存活率上升，并呈现一定的半对数线性关系。研究表明蔗糖铁复合物浊点能够指示蔗糖铁安全性的高低，这显然和蔗糖铁复合物在动物体内生理环境下的稳定程度相关。但是，遗憾的是Dr. Nissim并没有对浊点的物理意义和测定方法进行深入的研究。文献中，Dr. Nissim并没有给出严格的浊点定义，而且其测定方法是通过滴加盐酸和目测溶液浑浊度变化的方法来实现的。作者并没有提及并详细研究蔗糖铁酸降解动力学以及其和浊点之间的关系，更没有就蔗糖铁酸降解动力学和蔗糖铁安全性建立明确的关联关系。多年来，这一领域的研究处于停滞状态，仅有的研究局限于浊点测定方法中观察条件的界定和优化。例如美国药典对蔗糖铁注射液的浊点做了规定，其控制范围为4. 4-5. 3。但是，同样遗憾的是虽然美国药典中测定蔗糖铁注射液浊点的方法较Dr. Nissim有所进步，但是仍然没有摆脱目测浑浊度确定浊点的方法。美国药典测试方法可以这样表述配制一定浓度的蔗糖铁溶液于透明容器中，在暗室中使平行光线通过容器中的蔗糖铁溶液，并在持续搅拌下缓慢滴加盐酸溶液，至光路中溶液开始出现持续混浊，记录PH值，记为浊点。这样的方法同样全靠人眼观察判别，主观性较强，容易受操作者条件，测试环境，所使用光源的强弱等的影响，往往同一个样品不同的人检测，得出的检测结果不同；即使是同一测试人，在不同的测试条件下，其测试结果也不同。多年来，这种方法一直延续使用而没有被改进，在新版美国药典(USP32)中，仍然采用上述方法测定蔗糖铁注射液的池点。选用浊度仪直接测定蔗糖铁溶液的浊度，通过测定指定浊度值的蔗糖铁溶液pH来确定其浊点，是解决目测法测定浊点主观性太强的有益尝试。但是，根据蔗糖铁溶液浊点的定义，在浊点PH下，其溶液浊度是很低的。而较低浊度的准确测量，对浊度仪的精度会有很高的要求，并不是一般的浊度仪能够满足的。另外，无法避免的是测试溶液往往存在不稳定的本底浊度，会干扰浊度仪的测定；所以，即使精度很高的浊度仪也无法测得测试溶液的真实浊度和浊度的变化，也很难测定相应的浊点。所以，目前尚无法看到使用这种方法测定蔗糖铁浊点的报道
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中测定铁一碳水化合物络合物的浊点主观性较强，容易受操作者条件和测试环境影响，以及浊度分析设备在较低量程下的测试值误差较大的缺陷，提供一种利用仪器测定浊度与数据拟合相结合准确测定浊度和游离糖缓冲系数的方法。本发明的另一目的是提供该测定方法在评价铁一碳水化合物络合物安全性方面的应用。本发明的目的可以通过以下措施达到本发明所涉及的名词定义浊点(PP):对于铁一碳水化合物络合物，如蔗糖铁复合物在溶液中，随着溶液pH下降，不溶性分子逐渐累积，当这种分子数量增加引起的溶液浊度增加达到某临界值(即溶液开始出现浑浊)的PH值，被记为铁一碳水化合物络合物如蔗糖铁溶液的浊点。游离糖缓冲系数(n):铁一碳水化合物络合物如蔗糖铁分子在溶液中，受氢离子攻击，而形成不溶性分子过程中所丢失的蔗糖分子数，是为游离糖缓冲系数。它代表铁一碳水化合物络合物如蔗糖铁分子对抗氢离子攻击的缓冲能力，也反映了铁一碳水化合物络合物如蔗糖铁从可溶的非毒性物质转换成有毒的不溶性分子的缓冲能力。通过对铁一碳水化合物络合物如蔗糖铁酸降解反应动力学的研究发现不同pH下铁一碳水化合物络合物溶液的浊度和溶液中的氢离子浓度存在严格函数定量关系；测定有限点的氢离子和溶液浊度的对应关系，可以确定该函数方程式，从而可以理论计算得出铁一碳水化合物络合物的浊点和游离糖缓冲系数。铁一碳水化合物络合物如蔗糖铁酸降解动力学原理
经我们研究发现在水溶液环境中，铁一碳水化合物络合物酸降解符合特定的动力学规则；比如蔗糖铁复合物的酸降解反应遵循以下规律反应过程(I) 1+^====^+6 kl = [I1] [G]/[I] [H+](2)工冲+====]^+。k2 = [I2] [G]/[IJ [H+].........(n) UH+====]^ kn= = [In] [G]/[In_J [H+]令K，=则K，= ( [I1] [G]/[I] [H+] ) * ( [I2] [G]/[IJ [H+] )*( [In] [G]/[In_J [H+])= [G]n[IJ/[I][H+]n (a)其中I)上述I到n-1步反应均是快速平衡；第n步反应为控制步骤。kik2k3kn为各单元反应步骤的反应平衡常数。2)1脱n个糖分子后产生的降解产物In的水溶解性急剧下降，在溶液中产生浑浊，成为溶液浊度增加和铁一碳水化合物络合物如蔗糖铁毒性的物质基础。3)反应过程中，相对于H+的浓度变化，游离蔗糖浓度的变化不大可以认为是恒定浓度；[I]为常数。4) In的浓度与溶液浊度成正比。[In] = kN，k为比例系数。5) G代表蔗糖分子，I代表蔗糖铁分子，In代表蔗糖铁分子和n个氢离子反应，脱掉n个蔗糖分子后的产物。6)[]代表浓度根据以上，令K’ [I]/[G]nk = K，则(a)式可变化为K，[I]/[G]nk = N/[H+]n 即 K = N/[H+]n (b)将方程(b)两边取同底的对数，得IogmK = logmN-nlogm[H+],所以logmN=nIogm [H+] +IogmK将上述函数关系线性化令IogmN = y, Iogm[H+] = x,则y = nx+logmK (Cl)如此我们就可以通过测定少量的N和[H+]数据，拟合出(Cl)式的系数n和logmK。为了方便检测和计算，优选方程(b)两边取10为底的对数，得IgK = lgN-nlgtH"]，所以lgN=_npH+lgK将上述函数关系线性化令IgN = y, pH = x,则y = -nx+lgK (C2)如此我们就可以通过测定少量的N和pH数据，拟合出(C2)式的系数n和logK。显然，(Cl)式和(C2)式中的系数n代表下述物理意义蔗糖铁分子在溶液中，受氢离子攻击，而形成不溶性分子过程中所丢失的蔗糖分子数，我们将它称为游离糖缓冲系数。它代表蔗糖铁分子对抗氢离子攻击的缓冲能力，也反映了蔗糖铁从可溶的非毒性物质转换成有毒的不溶性分子的缓冲能力，与蔗糖铁的安全性相关。另一个方面，在酸的加入过程中，蔗糖铁溶液中的不溶性分子会逐渐累积。在美国药典的测定方法下，当不溶性分子累积引起的溶液浊度增加，可以在一定光强的光线下被检测者观察到，这个临界PH，就被称为蔗糖铁溶液的浊点。事实上，这个临界pH可以通过·数学方法准确得到。将测试条件下人眼可观察到的浑浊度定量，带入曲线拟合方程(Cl)或(C2)，通过方程求解，就可以得到浊点的准确值，参见附图I。另外，鉴于人眼分辩力的不同和浊度分析设备在较低量程下的测试值误差较大，还可以使用一定斜率的直线，使之与目标曲线相切，求得切点的位置，该切点所对应的横坐标即为浊点的准确值，求解原理参见附图2。进一步，将测试过程中pH和对应的蔗糖铁溶液的浊度分别使用仪器测定，并配备计算机系统，对其依据反应机理进行拟合，可以快速的测定蔗糖铁的浊点，一般不会大于五分钟。该方法快速准确，适合于蔗糖铁的安全性评价，也适合于蔗糖铁原料制备过程中络合反应控制的需要。在此基础上，研究还发现蔗糖铁在生理状态下的安全性和稳定性与其在水溶液中的酸降解动力学即浊点和游离糖缓冲系数有直接的相关关系，而不仅仅局限于通过其酸降解动力学得到的池点。一种测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法，其特征在于该方法包括下述步骤
⑴使络合物与酸接触；⑵测定络合物酸降解过程中的氢离子浓度和溶液浊度；⑶将这些数据进行数学拟合，经过数学处理得到铁一碳水化合物络合物的浊点和游离糖缓冲系数。所述的测定浊点和游离糖缓冲系数的方法优选包括下述步骤⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触；⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的氢离子浓度和溶液浊度N ；⑶将测得的浊度值和氢离子浓度值带入方程K = N/THl11，方程两边取同底的对数，得到拟合方程IogniN=Iilogni[H+]+Iog111K中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数n ;对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的池点。所述的测定浊点和游离糖缓冲系数的方法特别优选包括下述步骤⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触；⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的氢离子浓度和溶液浊度N ；⑶将测得的浊度值取以十为底的对数，并对该对数值和相应的pH做最小二乘拟合，得到拟合方程lgN=-npH+lgK中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数n ;对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的浊点。其中，所述的切线法，可以选取不同切线斜率，切线斜率范围包括-30到0，优选包括-20到-5。所述的割线法，可以选取不同割线割距，割距范围包括溶液的浊度大于0且小于5,优选池度大于0. 5且小于3。所述的铁一碳水化合物络合物中的碳水化合物包括选自右旋糖苷、糊精、葡糖酸盐、山梨醇或蔗糖中的至少一种，优选蔗糖。所述的酸选自盐酸、硫酸、硝酸、高氯酸、氢溴酸、氢碘酸、高溴酸、氯酸、溴酸、高锰酸、氢硼酸、氟磺酸、氰酸、硫氰酸、三氟乙酸、三氯乙酸、甲磺酸、苯磺酸、乙二酸或甲酸中的至少一种，优选盐酸。上述测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法在评价铁一碳水化合物络合物安全性方面的应用。一种评价铁一碳水化合物络合物安全性的方法包括下述步骤 ⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触；⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的氢离子浓度和溶液浊度N ；⑶将测得的浊度值和氢离子浓度值带入方程K = N/THl11，方程两边取同底的对数，得到拟合方程IogniN=Iilogni[H+]+Iog111K中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数n ;对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的池点；⑷上述所求的浊点值在4. 4-5. 3之间并且游离糖缓冲系数大于2. 5，表明该铁一碳水化合物络合物具有良好的安全性。 所述的评价铁一碳水化合物络合物安全性的方法优选包括下述步骤⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触；⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的pH和溶液浊度；⑶将测得的浊度值取以十为底的对数，并对该对数值和相应的pH做最小二乘拟合，得到拟合方程lgN=-npH+lgK中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数n ;对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的浊点；⑷上述所求的浊点值在4. 4-5. 3之间并且游离糖缓冲系数大于2. 5，表明该铁一碳水化合物络合物具有良好的安全性。其中，所述的切线法，可以选取不同切线斜率，切线斜率范围包括-30到0，优选-20到-5。所述的割线法，可以选取不同割线割距，割距范围包括溶液的浊度大于0且小于5，优选大于0. 5且小于3。—种用于评价铁一碳水化合物络合物安全性的质量控制装置，其特征在于该装置包括包括以下主要模块溶液浊度测定仪、溶液氢离子浓度测定仪、盛装铁一碳水化合物络合物的容器和搅拌装置、盛装酸溶液的容器和滴加装置、浊度和氢离子浓度的读取装置，以及络合物酸降解动力学数学模拟模块和结果输出装置。—种利用铁-碳水化合物络合物浊点和碳水化合物游离系数的测定方法鉴别降解动力学基本相似的铁一碳水化合物络合物不同批次质量的控制方法，该方法包括下属步骤⑴测定待测批次的铁一碳水化合物络合物的浊点和碳水化合物游离系数；⑵鉴别和标准组合物的浊点和碳水化合物游离系数一致的铁一碳水化合物络合物批次。本发明的有益效果本发明首次提供了使用仪器测定铁一碳水化合物络合物溶液有限点的氢离子浓度和对应的浊度，并进行数学拟合和外推得到严格意义上的络合物浊点的测定方法，避免了操作人员主观性和测试环境对测试结果的影响，可以保证测定结果的重复性和准确性。由于浊点值是一个临界PH，此时，铁一碳水化合物络合物刚刚开始浑池，其浑浊度很小，现有的浊度测定仪器在较低量程下的测试值误差较大，浊点不易判断；而本发明使用仪器测定数值较大的浊度和其对应的氢离子浓度，根据其函数关系外推得到浊点值，可以避免浊度仪测试低浊度下铁一碳水化合物络合物，从而保证了浊度测试的准确性，避免了对浊度仪精度的苛刻要求，并可以同时得到游离糖缓冲系数n，对于提高铁一碳水化合物络合物的控制水平和安全性十分重要。本发明在研究发现铁一碳水化合物络合物的安全性与其溶液的浊点pp和游离糖缓冲系数n有关的基础上，建立了一种评价铁一碳水化合物络合物安全性的方法，首次提出了以严格意义上的PP (浊点)和n (铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数)作为评价铁一碳水化合物络合物质量和安全性的指标；并明确了铁一碳水化合物络合物具备安全性的判断范围PP(4. 4-5. 3)，n(n > 2. 5)。上述两个参数在蔗糖铁复合物安全性的评估中具有不同的意义浊点反映了蔗糖铁不溶性成分产生的临界PH限度，而游离糖系数则反映了蔗糖铁复合物可溶性成分向不溶性成分转换的缓冲能力。
图I割线法求解蔗糖铁浊点原理图；图2切线法求解蔗糖铁浊点原理图；图3蔗糖铁浊度和pH关系拟合曲线图，其中，图(a)为浊度和pH的散点图；图(13)为浊度和pH关系拟合曲线。
具体实施例方式实施例I蔗糖铁浊点(PP)和游离糖系数(n)测定方法实施例蔗糖铁测试溶液制备取蔗糖铁注射液Ig置300ml烧杯中，加水200ml稀释即得。酸溶液制备取浓盐酸加纯化水制得0. lmol/L的盐酸溶液。在持续搅拌的情况下，向蔗糖铁测试溶液滴加0. lmol/L的盐酸溶液。分别在不同pH处，浊度仪测定溶液浊度，分别记录PH和浊度数据。表I、蔗糖铁酸降解动力学原始数据表
~H 4.65 4. 55 4.46 4.34 4.23 4. 16~ 0.583 I. 364 5.41 8.68 35.28 61.66~TgN -0. 2343 0. 1348 0. 7332 0. 9385 I. 5475 I. 7900测得的浊度值取以十为底的对数，并将得到得数列对pH做最小二乘拟合，见图3 ；得到lgN=-npH+lgK方程中的系数游离糖缓冲系数n = 4. 1144常数IgK = 18. 915相关系数0.9844大于0.98。即lgN=-4.1144pH+18. 915 (c)变形得N = IOe (-4. 1144XpH + 18. 915) (d)以下分别通过切线法和割线法求解浊点pp 切线法实例I式(d)两边对pH求导数，得dN/dpH=-4. 1144X IOe (_4. 1144XpH + 18. 915) (e)
令dN/dpH=_ll. 4得-4.1144X IOe (_4. 1144XpH + 18. 915) =-11. 4 (f)解式(f)得pH=4.5775即求得蔗糖铁浊点PP=4. 5775切线法实例2dN/dpH=-4. 1144X IOe (-4. 1144XpH + 18. 915) (e)令dN/dpH=_20
得-4.1144X IOe (—4. 1144XpH + 18. 915) =-20 (g)解式(g)得pH=4.5182即求得鹿糖铁池点PP=4. 5182割线法实例IN = IOe (-4. 1144XpH + 18. 915) (d)令N = 1，即 IOe (-4. 1144XpH + 18. 915) = I (h),对(h)求解，得pH = 4. 5970即求得蔗糖铁浊点PP=4. 5970割线法实例2N = IOe (-4. 1144XpH + 18. 915) (d)令N = 2，即 IOe (-4. 1144XpH + 18. 915) = I (i),对(i)求解，得pH = 4. 5243即求得蔗糖铁浊点PP=4. 5243实施例2蔗糖铁浊点PP和游离糖缓冲系数n安全性评估的实施例I)受试药物名称蔗糖铁，分别为南京生命能科技开发有限公司提供的不同批次样品溶剂0. 9%生理盐水山东华鲁制药有限公司批号A08120904
配制方法临用前将蔗糖铁用0. 9%生理盐水配成所需浓度溶液供试验用(避光)。浊点PP和游离糖系数n的测定使用实施例I中的方法2)实验动物来源小白鼠，ICR种，体重18_22g，普通级，南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。体重18 22g性别雌雄各半禁食时间禁食4小时后静脉注射每组动物数10只3)试验条件和方法试验室条件室温18-22 °C，相对湿度60 70%4)试验方法和结果小鼠静脉注射蔗糖铁
剂量245.OOmg Fe/Kg给药体积及次数体积为0. 25ml/10g，给药I次，给药速度低于10mg Fe/0. 5ml/min，给药后观察3天的试验动物存活率。
5)实验结果表2、蔗糖铁浊点(PP)，游离糖系数(n)和试验小鼠存活率关联数据表
权利要求
1.一种测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法在评价铁一碳水化合物络合物安全性方面的应用，其特征在于该方法包括下述步骤 ⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触； ⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的氢离子浓度和溶液浊度N ； ⑶将测得的浊度值和氢离子浓度值带入方程K = N/[H+]n，方程两边取同底的对数，得到拟合方程IogniN=Iilogni[H+] +IogmK中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数η ； 对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的浊点； 或者包括下述步骤 ⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触； ⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的氢离子浓度和溶液浊度N ； ⑶将测得的浊度值取以十为底的对数，并对该对数值和相应的PH做最小二乘拟合，得到拟合方程lgN=-npH+lgK中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数η ;对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的浊点。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于一种评价铁一碳水化合物络合物安全性的方法包括下述步骤 ⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触； ⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的氢离子浓度和溶液浊度N ； ⑶将测得的浊度值和氢离子浓度值带入方程K = N/[H+]n，方程两边取同底的对数，得到拟合方程IogniN=Iilogni[H+] +IogmK中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数η ； 对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的浊点； ⑷若上述所求的浊点值在4. 4-5. 3之间并且游离糖缓冲系数大于2. 5，则表明该铁一碳水化合物络合物具有良好的安全性。
3.根据权利要求I所述的应用，其特征在于一种评价铁一碳水化合物络合物安全性的方法包括下述步骤 ⑴使铁-碳水化合物络合物与酸接触； ⑵通过pH仪和浊度仪测定有限点的pH和溶液浊度； ⑶将测得的浊度值取以十为底的对数，并对该对数值和相应的PH做最小二乘拟合，得到拟合方程lgN=-npH+lgK中的所有系数，其中包括铁一碳水化合物络合物游离糖缓冲系数η ;对拟合出的方程进行割线法或切线法处理求得铁-碳水化合物络合物的浊点； ⑷若上述所求的浊点值在4. 4-5. 3之间并且游离糖缓冲系数大于2. 5，则表明该铁一碳水化合物络合物具有良好的安全性。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于所述的数据外推并求得络合物浊点的的途径包括切线法和割线法。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于数据外推并求得络合物浊点的切线法，切线斜率范围包括-30到O。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的切线斜率范围包括-20到-5。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于数据外推并求得络合物浊点的割线法，割距范围包括溶液的浊度大于O且小于5。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述的割距范围包括溶液的浊度大于O. 5且小于3。
全文摘要
本发明涉及测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法的应用。测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法包括下述步骤⑴使络合物与酸接触；⑵测定络合物的酸降解过程中的氢离子浓度和溶液浊度；⑶将这些数据进行数学拟合，经过数学处理测得络合物的浊点和碳水化合物游离系数。若上述所求的浊点值在4.4-5.3之间并且游离糖缓冲系数大于2.5，则表明该铁－碳水化合物络合物具有良好的安全性。本发明首次利用仪器测定结合数学拟合的方法成功测定了铁－碳水化合物络合物的浊点，提出并测定了铁－碳水化合物络合物的游离糖缓冲系数，并利用二者建立了评价铁－碳水化合物络合物安全性的方法。
文档编号G01N33/15GK102798703SQ20121032135
公开日2012年11月28日 申请日期2009年12月9日 优先权日2009年12月9日
发明者方文, 花传政, 杨洁, 何国新, 熊守军 申请人:南京生命能科技开发有限公司