碳水化合物共轭物及其制备改进工艺的制作方法
【专利说明】碳水化合物共轭物及其制备改进工艺
[0001] 本申请要求2012年8月6日提交的美国临时申请号61/680, 069和2013年3月 15日提交的美国临时申请号61/794, 114的权益，所述文献各自通过引用以其全文结合。 发明领域
[0002] 本发明涉及一种用于制备碳水化合物共轭物的改进的工艺。本发明还涉及包括这 些碳水化合物共轭物的碳水化合物共轭的iRNA剂，这些碳水化合物共轭物具有改进的纯 度，并且有利于这些iRNA剂的体内递送。
[0003] 发明背景
[0004] 体内向细胞的有效递送需要特异靶向以及针对细胞外环境（特别是血清蛋白）的 实质性保护。实现特异靶向的一个方法是将一个靶向部分共轭至一种iRNA剂。该靶向部 分帮助将该iRNA剂靶向所需要的靶位点。靶向部分可改善递送的一个方式是通过受体介 导的胞吞活性。这种摄取的机制包括结合到膜受体的iRNA剂向一个区域的内部运动，通过 该膜结构的内陷或通过该递送系统与该细胞膜融合，该膜包围该区域。这个过程是通过将 一种特异配体结合到该受体之后细胞表面或膜受体的活化来启动。许多受体介导的胞吞系 统是已知的并且已被研究过，包括识别糖例如半乳糖、甘露糖、甘露糖-6-磷酸酯，肽和蛋 白质例如转铁蛋白、脱唾液酸糖蛋白、维生素 B12、胰岛素和表皮生长因子（EGF)的那些。该 脱唾液酸糖蛋白受体（ASGP-R)是一种高容量受体，其在肝细胞上非常丰富。该ASGP-R显 示比D-Gal高50倍的N-乙酰基-D-半乳糖基胺（GalNAc)亲和力。
[0005] 近来，某些碳水化合物共轭物已显示对于将SiRNA递送至脂质体是一种可替代地 有价值的递送。
[0006] 发明概沭
[0007] 本发明涉及一种用于制备碳水化合物共轭物的改进的工艺以及碳水化合物共轭 的iRNA剂。此处所述的工艺提供了一种碳水化合物共轭物产物，该产物包含较少杂质（例 如较少金属污染物）。本发明还消除了对使用催化剂例如钯碳进行的昂贵的氢化反应的需 求，并减少了为了获得药学上可接受的产物进行的纯化步骤的数目。
[0008] 本发明的工艺、中间体和产物有用于制备碳水化合物-共轭的iRNA剂，例如具有 以下化学式的那些：
[0009]
【主权项】
1. 一种具有化学式（A)的化合物
其中 每次出现的X是氢或一种羟基保护基； 每次出现的Y是一种胺保护基，（例如乙酰基）；n是 0_20 ; 每次出现的q、r和s独立地是1-7 ; L是一个连接基团；并且R1是一种iRNA剂； 其中该具有化学式（A)的化合物不含或基本不含以下各项中的一种或多种 (i) 金属杂质， (ii) 以下两种脲副产物中的每种
(iii) 以下糖化合物中的每种
2. 根据权利要求1所述的化合物，其中该具有化学式（A)的化合物包含不超过0. 5% 的任何个体脲副产物或糖化合物。
3. 根据权利要求1-2中任一项所述的化合物，其中该具有化学式（A)的化合物包含不 超过0. 2%的任何个体脲副产物或糖化合物。
4. 根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中该具有化学式（A)的化合物包含不 超过1000 ppm的的任何个体金属。
5. 根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中该具有化学式（A)的化合物包含不 超过IOOppm的的任何个体金属。
6. 根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中该具有化学式（A)的化合物包含不 超过IOppm的的任何个体金属。
7. 根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中该具有化学式（A)的化合物包含不 超过Ippm的的任何个体金属。
8. -种用于将一种具有化学式（VI)的化合物转化为一种具有化学式（VII)的化合物 的工艺：
所述工艺包括： (i) 使该具有化学式（VI)的化合物与一种碱发生反应； (ii) 还原步骤（i)的产物；并且 (iii) 使步骤（iii)的产物与一种酸发生反应。
9. 如权利要求8所述的工艺，其中该碱是一种金属醇盐。
10. 如权利要求8-9中任一项所述的工艺，其中该碱是甲醇钠，步骤（ii)包括使步骤 (i)的产物与硼氢化钠发生反应，并且该酸是盐酸。
11. 如权利要求8-10中任一项所述的工艺，进一步包括将该具有化学式（VII)的化合 物转化为一种如在权利要求1-7中任一项中所定义的具有化学式（A)的化合物。
12. 用于制备一种具有化学式（VIII)的化合物的工艺： 其中
A是一个C6-C14烯烃连接体； 每个R独立地是一个酸保护基；并且 Rx是一个酸保护基； 所述工艺包括使一种具有化学式（IX)的化合物：
发生反应，以产生一种具有化学式（VIII)的化合物，其中Hal是卤素。
13. 如权利要求12所述的工艺，其中R是叔-丁基，Hal是C1，并且A是一个C1(|烯烃 连接体。
14. 如权利要求12-13中任一项所述的工艺，其中该反应是在N，N-二异丙基乙胺的存 在下进行。
15. 如权利要求12-14中任一项所述的工艺，进一步包括将该具有化学式（VIII)的化 合物转化为一种如在权利要求1-7中任一项中所定义的具有化学式（I)的化合物。
16. 用于制备一种具有以下化学式的化合物的工艺：
其中Z是一种酸保护基，n是0-20,并且每次出现的q、r和s独立地是1-7 ; 所述工艺包括使一种具有化学式（XII)的化合物：
其中P是一种氨基保护基，与一种磺酸发生反应。
17. 如权利要求16所述的工艺，其中该磺酸是对-甲苯磺酸或甲磺酸。
18. 如权利要求16-17中任一项所述的工艺，进一步包括将该具有化学式（II)的化合 物转化为一种如在权利要求1-7中任一项中所定义的具有化学式（A)的化合物。
19. 用于制备一种具有化学式（XIII)的化合物的工艺：
其中 X是一个羧基保护基； Y是一个胺保护基； Prt是一个羟基保护基； n是0-15 ;并且 q、r和s各自独立地是1_7 ; 所述工艺包括使一种具有化学式（XIV)的化合物
在一种叔胺的存在下与二氢呋喃-2, 5-二酮发生反应。
20. 如权利要求19所述的工艺，其中该叔胺是三乙胺或吡啶。
21. 如权利要求19-20中任一项所述的工艺，进一步包括将该具有化学式（XIII)的化 合物转化为一种如在权利要求1中所定义的具有化学式（A)的化合物。
22. 用于制备一种具有化学式（I)的化合物的工艺：
其中 X是一个羧基保护基； Y是一个胺保护基； Prt是一个羟基保护基；n是 0_15 ; q、r和s各自独立地是1-7;并且
在一种碱的存在下进行处理，以获得一种具有化学式（IV)的化合物：
其中Z是一个酸保护基； (2) 将具有化学式（IV)的化合物中的Z去保护，接着与具有化学式（V)的羟基脯氨酸 进行偶联：
(3) 将步骤（2)的产物与琥珀酐进行偶联；并且 (4) 将步骤（3)的产物偶联至一个固相支持体上，以获得一种具有化学式（I)的化合 物。
23. 如权利要求22所述的工艺，其中X是Bz或Ac。
24. 如权利要求22-23中任一项所述的工艺，其中Y是Ac。
25. 如权利要求22-24中任一项所述的工艺，其中n是7 ;并且q、r、以及s各自是1。
26. 如权利要求22-25中任一项所述的工艺，其中Prt是一个4, 4'-二甲氧基三苯甲基 保护基。
【专利摘要】本披露涉及一种用于制备碳水化合物共轭物的改进的工艺。本披露还涉及包括这些碳水化合物共轭物的碳水化合物共轭的iRNA剂，这些碳水化合物共轭物具有改进的纯度并且有利于这些iRNA剂的体内递送。
【IPC分类】A61K31-7088, A61K47-48
【公开号】CN104717982
【申请号】CN201380052382
【发明人】纳拉亚南奈尔·K·贾亚普拉卡什, 亚历山大·V·克林, 帕查穆图·坎德萨米, 拉杰夫·G·卡兰托塔缇尔, 莫提亚·马诺哈兰
【申请人】阿尔尼拉姆医药品有限公司
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2013年8月6日
【公告号】CA2879693A1, EP2879718A1, US20150196655, WO2014025805A1