专利名称：狂犬病毒IgG抗体检测试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物检测领域，特别涉及一种狂犬病毒IgG抗体检测试纸。
背景技术：
市场上狂犬病毒IgG抗体检测试剂多为酶标法(EIA)。EIA法，须经孵育、洗涤、显色、判读等步骤，过程较为繁琐，检测时间长。免疫胶体金技术(Immunogold labelling t echique)是上世纪80年代继突光素、放射性同位素和酶三大标记技术后发展起来的固相标记免疫测定技术。该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，形成肉眼可见的红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。该技术主要是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在硝酸纤维膜上，胶体金结合垫为吸附或涂抹有胶体金标记试剂在玻璃纤维膜，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用向前移动到胶体金结合垫上并溶解胶体金结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体区域时，待测物金标试剂复合物与之发生特异性结合而被截留，胶体金标记聚集在检测带上，可通过目测得到直观的显色结果；而游离的标记物则越过检测带，从而达到与检测物自动分离的目的。胶体金颗粒本身为红色，不需要加入发色试剂，省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤，对人体无毒害，金标记物比酶标记物更稳定，试验结果可以长期保存而不腿色。
发明内容本实用新型根据上述领域的空白，提供一种狂犬病毒IgG抗体检测试纸。本发明所提供的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，包括粘连在片状载体材料上的反应层，所述反应层一端到另一端依次为点样区、胶体金结合区、检测区、回收区，其特征在于所述检测区设置有检测线，所述检测线上包被有抗人-IgG抗体，所述胶体金结合区包被有胶体金标记的狂犬病毒抗原。所述检测区还设置有对照线，所述对照线上包被有抗兔IgG多克隆抗体。所述胶体金结合区还包被有胶体金标记的兔IgG。所述点样区的覆盖材料的末端压着所述胶体金结合区的覆盖材料的始端，所述胶体金结合区的覆盖材料的末端压着所述检测区的覆盖材料的始端，所述回收区的覆盖材料的始端压着所述检测区的覆盖材料的末端。所述检测区的覆盖材料为硝酸纤维素膜，所述点样区的覆盖材料为玻璃纤维，所述回收区的覆盖材料为滤油纸。所述胶体金结合区的覆盖材料为胶体金结合垫，所述胶体金结合垫为固定有胶体金标记试剂的一层玻璃纤维。所述片状载体材料为双面胶。所述双面胶的另一面粘附在硬质防水载体板上。[0013]利用免疫层析法原理，采用胶体金标记技术，研制出狂犬病毒IgG抗体检测试纸。它具有快速、简便、灵敏、特异的特点，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，对于检测狂犬免疫，以及患者治疗有重要意义，市场发展潜力很大。
图I为狂犬病毒IgG抗体检测试纸结构示意图；其中1-点样区，2-胶体金结合区，3-检测区，4-回收区，5-片状载体材料，6-检测线，7-对照线，Ia-玻璃纤维，2a-胶体金结合垫，3a-硝酸纤维素膜，4a_滤油纸。
具体实施方式
实施例I、狂犬病毒IgG抗体检测试纸 抗兔IgG多克隆抗体(ARTRON BIORESEARCH INC，产品目录号为ad21 )，抗人-IgG抗体(购自 ARTRON BIORESEARCH INC，产品目录号为 Aal )，兔 IgG(购自 ARTRON BI0RESEARCHINC，产品目录号为Aa3)，狂犬病毒抗原(购自ARTRON BIORESEARCH INC，产品目录号为Ao25)。I、狂犬病毒IgG抗体检测试纸的结构如图I所示，本实用新型所提供的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，包括粘连在片状载体材料上的反应层，所述反应层一端到另一端依次为点样区I、胶体金结合区2、检测区3、回收区4，所述点样区的覆盖材料的末端压着所述胶体金结合区的覆盖材料的始端，所述胶体金结合区的覆盖材料的末端压着所述检测区的覆盖材料的始端，所述回收区的覆盖材料的始端压着所述检测区的覆盖材料的末端。所述检测区设置有检测线6，所述检测线6上包被有抗人-IgG抗体，所述胶体金结合区2包被有胶体金标记的狂犬病毒抗原。本实用新型应用免疫层析式捕获法原理，当样本中含有抗狂犬病毒IgG时，抗狂犬病毒IgG能与胶体金标记狂犬病毒抗原结合形成复合物，该复合物在层析过程中又与检测线6上的抗人-IgG抗体结合形成红色沉淀条带，试验结果为阳性。当样本中不含抗狂犬病毒IgG时，胶体金标记的狂犬病毒抗原无法与检测线6上的抗人-IgG抗体结合，于是在检测线6处不出现红色线条，试验结果为阴性。本实用新型优选在所述检测区3还设置有对照线7，所述对照线7上包被有抗兔IgG多克隆抗体；所述胶体金结合区2还包被有胶体金标记的兔IgG。无论样本中是否含有抗狂犬病毒IgG，对照线7的抗兔IgG多克隆抗体都会与胶体金标记的兔IgG结合形成一条红色对照线。对照线的显色是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为该试剂的内控标准。本实用新型的点样区I、胶体金结合区2、检测区3及回收区4所用材料可用本领域技术人员熟知的与这些区域的功能符合的材料，本实用新型优选采用玻璃纤维Ia作为点样区I的覆盖材料，硝酸纤维素膜3a作为检测区3的覆盖材料，滤油纸4a作为回收区的覆盖材料，胶体金结合区覆盖有胶体金结合垫2a，所述胶体金结合垫为固定有胶体金标记试剂的一层玻璃纤维。所述片状载体材料为双面胶；所述双面胶的另一面粘附在硬质防水载体板上。2、狂犬病毒IgG抗体检测试纸的制备方法[0023]2. I基因重组抗原-胶体金标记物的制备2. I. I胶体金的制备用柠檬酸三钠还原法制备。即将氯金酸水溶液加热煮沸，加入柠檬酸三钠，混匀后煮沸，待胶体金溶液颜色至紫红色，继续煮沸15-20分钟，冷却即可。2. I. 2金标记抗原的制备用碳酸钾溶液调整胶体金溶液PH值至8-9后，加入基因重组狂犬病毒抗原，2-5分钟后加入聚乙二醇，离心制得金标抗原浓缩液后保存，使用前稀释至工作浓度。2. I. 3胶体金垫的制备取已经制备好的金标记抗原溶液浸湿样品垫，干燥，检测，备用。2. 2硝酸纤维反应膜的制备即检测线和对照线的制备。用适宜工作浓度的抗人-IgG抗体溶液在硝酸纤维膜上包被检测线；用适宜工作浓度的抗兔IgG多克隆抗体溶液在硝酸纤维膜上包被对照线。2. 3 组装将双面胶的一面粘附在塑料板上，在双面胶的另一面顺次贴上包被有检测线和对照线的硝酸纤维反应膜、吸附有胶体金标记的狂犬病毒抗原的胶体金结合垫、玻璃纤维和滤油纸，且所述玻璃纤维的末端压着所述胶体金结合垫的始端，所述胶体金结合垫的末端压着所述硝酸纤维反应膜的始端，所述滤油纸的始端压着所述硝酸纤维反应膜的末端。将各组装材料组装成反应体后切成适宜条宽的测试条，卡型产品是将检测条组装在检测卡中。3、狂犬病毒IgG抗体检测试纸的使用方法检验前请将试剂和样本恢复至室温。3. I、从铝箔袋中取出检测卡/条；3. 2、放在水平工作台面上平置并做好样本标记；3. 3、用微量移液器取IOii L血清、血浆或全血样本，加入到盛放稀释液的试剂瓶中；3. 4、将加入样本的试剂瓶旋紧，摇匀；3. 5、在检测卡/条的加样端滴加稀释样本2滴；3. 6、20_30分钟内判读结果，30分钟后检验结果无效。4、检验结果的解释4.1.阴性只在质控线(C)位置出现一条红色条带。4. 2.阳性质控线(C)和检测线(T)位置出现两条红色条带。4.3.无效质控线(C)位置没有出现红色条带。
权利要求1.狂犬病毒IgG抗体检测试纸，包括粘连在片状载体材料上的反应层，所述反应层一端到另一端依次为点样区、胶体金结合区、检测区、回收区，其特征在于所述检测区设置有检测线，所述检测线上包被有抗人-IgG抗体，所述胶体金结合区包被有胶体金标记的狂犬病毒抗原。
2.根据权利要求I所述的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，其特征在于所述检测区还设置有对照线，所述对照线上包被有抗兔IgG多克隆抗体。
3.根据权利要求I所述的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，其特征在于所述胶体金结合区还包被有胶体金标记的兔IgG。
4.根据权利要求I所述的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，其特征在于所述点样区的覆盖材料的末端压着所述胶体金结合区的覆盖材料的始端，所述胶体金结合区的覆盖材料的 末端压着所述检测区的覆盖材料的始端，所述回收区的覆盖材料的始端压着所述检测区的覆盖材料的末端。
5.根据权利要求4所述的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，其特征在于所述检测区的覆盖材料为硝酸纤维素膜，所述点样区的覆盖材料为玻璃纤维，所述回收区的覆盖材料为滤油纸。
6.根据权利要求4所述的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，其特征在于所述胶体金结合区的覆盖材料为胶体金结合垫，所述胶体金结合垫为固定有胶体金标记试剂的一层玻璃纤维。
7.根据权利要求I所述的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，其特征在于所述片状载体材料为双面胶。
8.根据权利要求8所述的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，其特征在于所述双面胶的另一面粘附在硬质防水载体板上。
专利摘要本实用新型公开了狂犬病毒IgG抗体检测试纸。本实用新型所提供的狂犬病毒IgG抗体检测试纸，包括粘连在片状载体材料上的反应层，所述反应层一端到另一端依次为点样区、胶体金结合区、检测区、回收区，其特征在于所述检测区设置有检测线，所述检测线上包被有抗人-IgG抗体，所述胶体金结合区包被有胶体金标记的狂犬病毒抗原。本实用新型所提供的狂犬病毒IgG抗体检测试纸具有快速、简便、灵敏、特异的特点，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，对于检测狂犬免疫，以及患者治疗有重要意义，市场发展潜力很大。
文档编号G01N33/569GK202583203SQ20122023862
公开日2012年12月5日 申请日期2012年5月24日 优先权日2012年5月24日
发明者程鸿宇, 孙茜 申请人:蓝十字生物药业(北京)有限公司