一种快速检测中药复方制剂中指标性成分含量的方法
【专利摘要】本发明涉及中药质量检测领域，涉及一种快速检测中药复方制剂中指标性成分含量的方法，尤其是一种中药复方制剂防己黄芪汤指标性成分含量的快速检测方法。本发明方法，采用50%甲醇超声提取，应用HPIC-DAD法一次性同时测定防己黄芪汤中防己、黄芪和甘草中的防己诺林碱、粉防己碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷和甘草酸5种成分的含量。解决了同时对防己黄芪汤中黄芪、防己和甘草三味药材进行质量控制的难题，避免了对5种指标性成分多次检测的时间和试剂耗费。本方法操作简便，工作效率和精度高。
【专利说明】-种快速检测中药复方制剂中指标性成分含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药质量检测领域，涉及一种快速检测中药复方制剂中指标性成分含 量的方法，尤其是一种中药复方制剂防己黄茂汤指标性成分含量的快速检测方法。
【背景技术】
[0002] 中药复方制剂防己黄茂汤出自《金匿要略》，张仲景"金匿要略?水气病篇"有皮、 风水，说："皮水为病，四肢肿，水气在皮肤中，四肢憂憂动者，防己黄茂汤主之。"该方 为风湿在表，卫虚不固而症见脉浮身重，汗出恶风而设。全方主要由防己、黄茂、白术、甘草 组成，有益气固表，健脾渗湿之功效。临床加减可用于治疗风湿性也脏病、风湿性关节炎、慢 性肾炎和慢性肾小球肾炎等病症，此外在骨伤科方面也有临床运用。
[0003] 所述的防己黄茂汤方中W防己巧风行水；黄茂益气固表，且能行水消肿，两者配 伍，巧风不伤表，固表不留邪，且又行水气，而共为君药；臣W白术补气健脾巧湿，与黄 茂为伍则益气固表之力增，与防己相配则巧湿行水之功倍；使W甘草，培±和中，调和药 性；诸药相合，共奏益气巧风，健脾利水之效，使风邪得除，表气得固，脾气健胚，水湿 运化，于是风水，风湿之表虚征，悉得痊愈。
[0004] 现有技术公开了中药黄茂，补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通瘍， 毛蕊异黄丽葡萄糖巧是其药材含量测定的指标性成分之一，文献如2010年《中华人民共和 国药典》=283-284。
[0005] 中药防己巧风止痛，利水消肿，防己诺林碱和粉防己碱是其药材含量测定的指标 性成分，文献如2010年《中华人民共和国药典》=139-140。
[0006] 中药甘草补脾益气，清热解毒，巧姨止咳，缓急止痛，调和诸药，甘草巧和甘草酸是 其药材含量测定的指标性成分，文献如2010年《中华人民共和国药典》；80-81。
[0007] 目前，尚无全面控制中药复方制剂防己黄茂汤其质量的检测方法，现有技术中，仅 能对该复方制剂中的某几种成分或2种成分采用高效液相色谱分别进行含量测定，来片面 地反映防己黄茂汤的质量，如李伟等[防己黄茂颗粒的提取工艺研究.中药新药与临床药 理.2006, 17(2) :137-154)]采用高效液相色谱-紫外检测测定防己黄茂颗粒中防己诺林碱 和粉防己碱的含量，采用HPLC-ELSD检测测定防己黄茂颗粒中黄茂甲巧的含量。所述的检 测方法尚不能对防己黄茂汤的质量的优劣进行全面有效地衡量。鉴于此，本申请的发明人 拟建立一种检验效率高、定量准确的检测方法，W满足防己黄茂汤指标性成分含量的快速 检测，进一步全面有效地衡量该复方制剂的质量。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供一种快速检测中药复方制剂中指标性成分含量的方法，尤其 是一种快速检测中药复方制剂防己黄茂汤指标性成分含量的方法。本检测方法能一次性地 快速检测所述复方制剂中的5种成分，可进一步全面有效地衡量该复方制剂的质量，弥补 现有技术的不足。
[0009] 本发明在对防己黄茂汤的组方进行研究分析的基础上，确定了该中药复方制剂的 指标性成分，其中的黄茂和防己为方中首要的、针对主病起主要治疗作用的君药，毛蕊异黄 丽葡萄糖巧、防己诺林碱和粉防己碱在药材中含量较多，且为《药典》规定的检测指标，故选 为指标性成分；白术在《药典》中仅有定性检查苍术丽，文献报道的白术内醋与防己黄茂汤 治疗的疾病关联度不大，故暂不列入指标性成分；甘草中甘草酸和甘草巧均有文献报道药 理作用为抗炎镇痛，其与防己黄茂汤治疗的疾病联系紧密，列入指标性成分。
[0010] 具体的，本发明的一种快速检测中药复方制剂中指标性成分含量的方法，其特征 在于，其包括步骤；
[0011] (1)制备对照品溶液：分别取防己诺林碱、粉防己碱、毛蕊异黄丽葡萄糖巧、甘草 巧和甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成含防己诺林碱、粉防己碱、毛蕊异黄丽葡萄 糖巧、甘草巧和甘草酸的混合溶液作为对照品溶液；
[0012] (2)制备防己黄茂汤提取浓缩液；防己、黄茂等药味先W 10倍量70%己醇回流提 取2次，每次1.化；再W 12倍量水煎煮2次，每次1.化，最后合并所有水提取液及醇提液， 浓缩，浓缩为；〇. 8-1. 3g浓缩液/g生药材；
[0013] (3)制备供试品溶液：取防己黄茂汤提取浓缩液，精密称定总重，置25ml量瓶中， 加甲醇定容，超声处理，放冷至室温，补加甲醇定容，摇匀，高速离也，取上清液为供试品溶 液；
[0014] (4)液相色谱仪测定：将混合对照品溶液稀释，注入液相色谱仪进行测定，用外标 法测定5种组分的含量；
[0015] 所述高效液相色谱仪的设定条件：DIKMA DIAM0NSIL(2)C18(250mm*4. 6mm，5um)色 谱柱；W甲醇为流动相A，0. 2M己酸馈、0. 1%甲酸为流动相B，梯度洗脱：0-15min，10-14%A ; 15-20min, 14%-24%A ；2〇-25min,24%-30%A;25-40min, 30%-50%A ；4〇-50min, 50%-100%A ；5〇-55min, 100〇/〇A;55-60min, 100〇/〇-50〇/〇A ;6〇-65min, 50〇/〇-10〇/〇A ;65-80min, 10〇/〇A ;流速为 0. 75ml/ min;柱温为：3(TC。检测波长；254nm和270nm。
[0016] 检测结果显示；由于所采用的色谱分析条件，明显改善了现有技术所采用的单纯 用酸性溶液作为流动相分析甘草巧、甘草酸、防己诺林碱和粉防己碱的灵敏度；本发明所 采用的色谱分析条件其线性、精密度、重复性、重复性和加样回收均良好，且均符合2010版 《药典》规定。
[0017] 本发明检测方法的有益效果是；
[0018] 解决了防己黄茂汤成分复杂所导致的提取问题，同时亦解决了测定毛蕊异黄丽葡 萄糖巧、甘草巧、甘草酸、防己诺林碱和粉防己碱该5种成分干扰多的问题，避免了对该5种 成分必须多次进行检测所产生时间和试剂的耗费的缺陷，本方法简便、稳定可靠，明显提高 了检测的工作效率和灵敏度，可W更加全面有效地控制防己黄茂汤的质量，W及控制具有 主要治疗作用的防己、黄茂、甘草药材的质量。
[0019] 本发明的检测方法可用于制定中成药质量控制的标准方法，尤其是所述的中成药 中同时含有黄茂、防己和甘草药材。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1是本发明的防己黄茂汤中5种指标性成分的对照品混合溶液的色谱图；
[0021] 图2是本发明的防己黄茂汤样品溶液的色谱图；
[0022] 图3是本发明的防己黄茂汤中缺黄茂的阴性样品溶液的色谱图；
[0023] 图4是本发明的防己黄茂汤中缺甘草的阴性样品溶液的色谱图；
[0024] 图5是本发明的防己黄茂汤中缺防己的阴性样品溶液的色谱图；
[00巧]图1至图3中，1是毛蕊异黄丽葡萄糖巧，2是甘草巧，3是防己诺林碱，4是粉防己 碱，5是甘草酸。
【具体实施方式】
[0026] 本发明实验中采用：
[0027] 仪器与试药；Agilentl200高效液相色谱仪，G1315D DAD检测器，上海精科仪器有 限公司FA1004N电子天平，甲醇为HPLC级，其他试剂为分析纯，毛蕊异黄丽葡萄糖巧对照 品（上海永恒生物科技有限公司，批号；20120428)、甘草巧(上海永恒生物科技有限公司，批 号；20100805)、甘草酸(上海永恒生物科技有限公司，批号；20130128)、防己诺林碱(上海 永恒生物科技有限公司，批号；20110729)和粉防己碱(上海永恒生物科技有限公司，批号： 20110928)。
[0028] 实施例1
[0029] 本实施例按下述步骤快速检测中药复方制剂中指标性成分含量的方法
[0030] (1)制备对照品溶液；分别取防己诺林碱、粉防己碱、毛蕊异黄丽葡萄糖巧、甘 草巧和甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含防己诺林碱lOOug、粉防己碱 lOOug、毛蕊异黄丽葡萄糖巧50ug、甘草巧lOOug和甘草酸lOOug的混合溶液作为对照品溶 液；
[0031] (2)制备防己黄茂汤提取浓缩液；防己、黄茂等药味先W 10倍量70%己醇回流提 取2次，每次1.化；再W 12倍量水煎煮2次，每次1.化（参照现有技术；中药新药与临床药 理.2006,17 (2); 137-154)，最后合并所有水提取液及醇提液，浓缩，浓缩为；0. 8-1. 3g浓缩 液/g生药材；
[0032] (3)制备供试品溶液：取防己黄茂汤提取浓缩液0. 6g，精密称定总重，置25ml量 瓶中，加50%甲醇定容，超声处理30分钟，放冷至室温，补加50%甲醇定容至25ml，摇匀，高 速离也12000转/分钟，15分钟，取上清液为供试品溶液；
[0033] (4)液相色谱仪测定：将混合对照品溶液稀释，进样lOul，注入液相色谱仪进行测 定，用外标法测定5种组分的含量；
[0034] 所述高效液相色谱仪的设定条件：DIKMA DIAM0NSIL(2)C18(250mm*4. 6mm，5um)色 谱柱；W甲醇为流动相A，0. 2M己酸馈、0. 1%甲酸为流动相B，梯度洗脱：0-15min，10-14%A ; 15-20min, 14%-24%A ；2〇-25min,24%-30%A;25-40min, 30%-50%A ；4〇-50min, 50%-100%A ；5〇-55min, 100〇/〇A;55-60min, 100〇/〇-50〇/〇A ;60-65min, 50〇/〇-10〇/〇A ;65-80min, 10〇/〇A ;流速为 0. 75ml/ min;柱温为：3(TC。检测波长；254nm和270nm。
[00巧]表1进样量与峰面积积分值
[0036] 表 1
[0037]
【权利要求】
1. 一种快速检测中药复方制剂中指标性成分含量的方法，其特征在于，其包括步骤； (1) 制备对照品溶液：分别取防己诺林碱、粉防己碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷和 甘草酸对照品，精密称定，加甲醇制成含防己诺林碱、粉防己碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草 苷和甘草酸的混合溶液作为对照品溶液； (2) 制备防己黄芪汤提取浓缩液：防己、黄芪中药材以10倍量70%乙醇回流提取2次， 每次1. 5h ;再以12倍量水煎煮2次，每次1. 5h，最后合并所有水提取液及醇提液，浓缩为： 0. 8-1. 3g浓缩液/g生药材； (3) 制备供试品溶液：取防己黄芪汤提取浓缩液，精密称定总重，置25ml量瓶中，加甲 醇定容，超声处理，放冷至室温，补加甲醇定容，摇匀，高速离心，取上清液为供试品溶液； (4) 液相色谱仪测定：将混合对照品溶液稀释，注入液相色谱仪进行测定，用外标法测 定5种组分的含量； 所述高效液相色谱仪的设定条件为： DIKMADIAMONSIL(2)C18 (250mm*4. 6mm，5um)色谱柱；以甲醇为流动相 A，0. 2M 乙酸铵、 〇? 1% 甲酸为流动相 B，梯度洗脱：0-151^11，10-14〇从；15-20111111，14%-24〇从；20-25111111，24%- 30%A;25-40min, 30%-50%A ；4〇-50min, 50%-100%A ；5〇-55min, 100%A;55-60min, 100%-50%A ； 60-65min, 50%-10%A ;65-80min, 10%A ;流速为 0? 75ml/min ;柱温为：30°C，检测波长：254nm 和 270nm。
2. 按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1中，作为对照品溶液的混合溶 液每lml含防己诺林碱100ug、粉防己碱100ug、毛蕊异黄酮葡萄糖苷50ug、甘草苷100ug和 甘草酸100ug。
3. 按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3中，取防己黄芪汤提取浓缩液， 加50%甲醇定容。
4. 按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的中药复方制剂选自防己黄芪汤。
5. 权利要求1所述的方法在制定中成药质量控制的标准方法中的用途。
6. 按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的中成药中同时含有黄芪、防己和甘草 药材。
【文档编号】G01N30/02GK104422737SQ201310378511
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年8月25日 优先权日:2013年8月25日
【发明者】王拥军, 施杞, 刘书芬, 隋璐, 梁倩倩, 李晨光, 崔学军, 杨燕萍, 唐德志, 王成龙, 舒冰, 王晶, 贾友冀, 王洪伸, 李晓峰, 陈岩, 李金龙, 卢盛, 赵永见, 杨龙, 薛纯纯 申请人:上海中医药大学附属龙华医院