一种利用hplc法检测单氰胺的定量方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，采用岛津高效液相色谱仪SPD-20A，以Inertsil ODS-SP色谱柱为分离色谱柱，柱温为30℃，采用可变波长紫外吸收检测器，检测波长为240nm，以甲醇+水(5+95)(V+V)(即5％甲醇水溶液)为流动相，流速为0.3ml/min，采用双氰胺为内标物，用内标法绘制单氰胺和双氰胺的浓度比-峰面积比标准曲线，得出标准曲线的回归方程，通过该回归方程计算得到单氰胺的含量。本发明能够实现对样品的直接检测，无需对样品进行任何的前处理，大大减少分析时间，而且方法简单易行，方便可靠。
【专利说明】-种利用HPLC法检测单氯胺的定量方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析【技术领域】，设及单氯胺的定量分析方法，具体设及利用HPLC法检 测单氯胺的定量方法。
【背景技术】
[000引晶体单氯胺（切anamideiCNgHg)不稳定，呈菱形，无色，易潮解，烙点为46°C。单氯 胺在水中有很高的溶解度且呈弱碱性，在43°C时与水完全互溶。单氯胺含有氯基和氨基，都 是活性基团，具有上述官能团的多重反应性能，易发生加成、取代、缩合等反应。
[0003] 国外单氯胺的工业化生产始于上世纪30年代末，由氯胺化巧与酸作用而得，W后 逐渐演变为氯胺化巧、C〇2、水原料工艺路线。现代工业商品单氯胺均采用此原料工艺路线 生产，但是在生产过程中有副产物双氯胺、尿素和硫脈等产生，所W需要对单氯胺进行定量 检测。
[0004] 文献报道，单氯胺类物质的检测主要有化学分析法、电位滴定法、离子色谱法等。 其中化学分析法、电位滴定法虽然比较简单，但是耗时较长，人为误差较大。另外有文献报 道的单氯胺的检测方法有柱前衍生后利用巧光检测器进行检测，该方法比较费时，而且巧 光检测器也比较稀少，价格也不菲。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术的不足，我们通过优化条件，例如色谱柱（耐水柱）、流动相、柱温、 波长的选择等，提供了一种利用HPLC法检测单氯胺的定量方法，该方法精密度高，重现性 好，准确度高，重复性好，能够实现对样品的直接检测，大大减少分析时间，而且方法简单易 行，方便可靠。
[0006] 为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：
[0007] 一种利用HPLC法检测单氯胺的定量方法，W单氯胺标准物质做标样，W双氯胺为 内标物，溶剂溶解样品，采用高效液相色谱仪测试。
[000引一种利用HPLC法检测单氯胺的定量方法，W单氯胺标准物质做标样，W双氯胺为 内标物，溶剂溶解样品，采用高效液相色谱仪测试，具体步骤如下：
[0009] (1)配制单氯胺和双氯胺标准储备溶液；
[0010] (2)对步骤（1)配制的单氯胺标准储备溶液进行稀释，配制单氯胺标准溶液A、B、 C、D、E，然后分别向单氯胺标准溶液A、B、C、D、E中加入等量的步骤（1)配制的双氯胺标准 储备溶液，利用高效液相色谱仪进样分析，并同时记录单氯胺和双氯胺的峰面积；采用内标 法绘制单氯胺和双氯胺的浓度比-峰面积比标准曲线，得出标准曲线的回归方程：
[0011] y = 0. 105X+0. 0052, R2= 0. 9998,式中y为单、双氯胺的峰面积比，X为单、双氯 胺的浓度比，R为线性相关系数；
[001引 做配制单氯胺样品溶液，并加入一定量的双氯胺标准储备溶液作为内标物，利用 高效液相色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，根据步骤（2)的标准曲线回归方程计算得 出单氯胺的含量。
[0013] 因为工业生产中，需要同时检测单氨胺和双氨胺的含量，一般地先用外标法测出 双氯胺的含量，再W双氯胺该个已知的量为内标物，去检测单氯胺的含量，但是由于该方法 只是介绍单氯胺，就把外标法测双氯胺含量的步骤省去，直接写成配置的浓度相当的双氯 胺标准储备液。
[0014] 一种利用HPLC法检测单氯胺的定量方法，所述的高效液相色谱仪为岛津高效液 相色谱仪SPD-20A;所述的分离色谱柱选自Hypersil抓S、Hypersil ODS、LiQi;roso;rb、 S阳MADZU VP-孤S、Inertsil 孤S-SP、Extend-C18、ZORBAX ODS、ZORBAX SB-C18、LiC虹osorb C18、Hypersil ODS中的一种，且柱长为150mm，柱内径为加m。
[0015] 一种利用HPLC法检测单氯胺的定量方法，所述的色谱条件为柱温为20-30°C， 采用可变波长紫外吸收检测器，检测波长为240nm，W 5%甲醇水溶液为流动相，流速为 0. 3-0. 5ml/min，进样的样品体积为20 y L。
[0016] 优选的分离色谱柱选自Inertsil 0DS-SP色谱柱，在其它条件完全相同的条件下 进样，发现W Inertsil 0DS-SP为固定相的色谱柱对于单氯胺具有良好的选择性，能够将单 氯胺与其他杂质如双氯胺、硫脈等完全分离。
[0017] 优选的色谱条件为柱温为30°C，若温度过高（MOC )，单氯胺容易分解产生尿素， 所W优选为30°C，在该样的温度范围内，在其它条件完全相同的条件下进样，对样品的分离 度，峰形，对称度等方面的影响较小，单氯胺样品均能实现良好的分离。
[0018] 优选的流动相的流速为0. 3ml/min，在该样的流速范围内，在其它条件完全相同的 条件下进样，对样品的分离度，峰形，对称度等方面的影响较小，单氯胺样品均能实现良好 的分离。
[0019] 所述的配制单氯胺、双氯胺标准储备液时所用的溶剂为甲醇与水的混合溶液，且 两者的体积比为1:20。
[0020] 本发明的发明人从节约时间，节约溶剂，节约成本角度出发，给出了最优的色谱条 件：色谱柱为Inertsil 0DS-SP，柱长为150mm，柱内径为加m ;检测器为可变波长紫外吸收 检测器，检测波长为240皿；柱温为30°C ;流动相为5%甲醇水溶液；流速为0. 3ml/min ;在 该样的色谱条件下对单氯胺进行检测，成本最少，时间最省，分离效果最好。
[0021] 本发明单双氯胺的浓度比-峰面积比标准曲线的绘制采用的是内标法，得出标准 曲线的回归方程，进而计算得到单氯胺的含量，即单氯胺的质量分数。
[0022] 单氯胺分子极性很大，生产过程中有副产物双氯胺、尿素和硫脈等产生，用液相不 易分离，我们的方法是通过优化条件，例如色谱柱（耐水柱）、流动相、柱温、波长的选择等， 达到良好分离的目的。
[0023] 本发明与现有技术相比，利用高效液相色谱法对单氯胺检测方法的建立，该方法 精密度高，重现性好，准确度高，重复性好，能够实现对样品的直接检测，大大减少分析时 间，而且方法简单易行，方便可靠。
【专利附图】
【附图说明】
[0024] 图1是实施例1中试液K1样品的液相色谱图；
[0025] 图2是实施例2中试液K2样品的液相色谱图；
[0026] 图3是实施例3中试液K3样品的液相色谱图；
[0027] 图中横坐标代表保留时间，纵坐标代表电压值。
【具体实施方式】
[002引下面结合具体实施例对发明作进一步说明，但不作为对
【发明内容】
的限制。
[0029] 本发明所采用的高效液相色谱仪的型号为岛津SPD-20A，为现有产品。
[0030] 实施例1
[0031] 现有一批一定浓度范围内的的单氯胺水溶液100公斤，需要对单氯胺的浓度进行 检测。
[0032] 所采用的高效液相色谱条件为：色谱柱为Inertsil ODS-SP，柱长为150mm，柱内 径为加m ;检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为240nm ;柱温为30°C ;流动相为 5%甲醇水溶液；流速为0. 5ml/min。
[0033] 一种利用HPLC法检测单氯胺的定量方法，采用高效液相色谱仪进行检测、内标法 定量分析，具体步骤包括；
[0034] (1)配制单氯胺标准储备溶液
[0035] 精密称取lOOOmg单氯胺标准品（纯度98% )于500ml容量瓶中，用5%甲醇水溶 液定容至刻度，配成1. 96mg/ml的单氯胺标准储备溶液。
[0036] (2)配制双氯胺标准储备溶液
[0037] 精密称取lOOOmg双氯胺标准品（纯度99% )于500ml容量瓶中，用5%甲醇水溶 液（体积比）定容至刻度，配成1. 98mg/ml的双氯胺标准储备溶液。
[003引 （3)配制单氯胺标准溶液
[0039] 分别精确移取10ml、20ml、30ml、40ml、50ml的单氯胺标准储备溶液于50ml容量瓶 中，同时分别移取10ml双氯胺标准储备液于容量瓶中，用5 %甲醇水溶液（体积比）定容到 刻度，得到标准溶液A、B、C、D、E (其单氯胺浓度分别为0. 392mg/ml，0. 784mg/ml，1. 176mg/ ml, 1. 568mg/ml，1. 960mg/ml，双氯胺浓度为 0. 396mg/ml)。
[0040] 做标准曲线绘制
[004U 将标准溶液A、B、C、D、E摇匀后，利用高效液相色谱仪上的20 uL定量环进样分 析，并同时记录峰面积比（分别是0. 7119、1. 4161、2. 8434、3. 6264、7. 1203);绘制单双氯 胺的浓度比-峰面积比标准曲线，得出标准曲线的回归方程为；y = 0. 105X+0. 0052, R2 = 0. 9998,式中y为单双氯胺的峰面积比，X为单双氯胺的浓度比，R为线性相关系数。
[0042] (4)配制单氯胺样品溶液
[0043] 精密称取80llmg(W)单氯胺水溶液样品，5%甲醇水溶液定容至50ml (V2)容量瓶 得样品单氯胺储备溶液D1，分别精密移取四份10ml (V3)样品单氯胺标准储备溶液D1分于 50ml (Vi)容量瓶中，并分别移取10ml双氯胺标准储备液（Cl)于容量瓶（Vi)中，定容得样品 试液1(1，1^，11，化；采用同样的色谱条件在高效液相色谱仪上^20^1定量环进样分析，并 同时记录峰面积比（表1);
[0044] (5)计算单氯胺的含量
[0045]
【权利要求】
1. 一种利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：以单氰胺标准物质做标样， 以双氰胺为内标物，溶剂溶解样品，采用高效液相色谱仪测试。
2. 如权利要求1所述的利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：以单氰胺标 准物质做标样，以双氰胺为内标物，溶剂溶解样品，采用高效液相色谱仪测试，具体步骤如 下： (1) 配制单氰胺和双氰胺标准储备溶液； (2) 对步骤（1)配制的单氰胺标准储备溶液进行稀释，配制不同浓度的单氰胺标准溶 液A、B、C、D、E，然后分别向单氰胺标准溶液A、B、C、D、E中加入等量的步骤（1)配制的双氰 胺标准储备溶液，利用高效液相色谱仪进样分析，并同时记录单氰胺和双氰胺的峰面积；采 用内标法绘制单氰胺和双氰胺的浓度比-峰面积比标准曲线，得出标准曲线的回归方程： y = 0. 105x+0. 0052, R2= 0. 9998,式中y为单、双氰胺的峰面积比，x为单、双氰胺的 浓度比，R为线性相关系数； (3) 配制单氰胺样品溶液，并加入步骤（1)配制的双氰胺标准储备溶液作为内标物，利 用高效液相色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，根据步骤（2)的标准曲线回归方程计算 得出单氰胺的含量。
3. 如权利要求1所述的利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：所述的高 效液相色谱仪为岛津高效液相色谱仪SPD-20A ;所述的分离色谱柱选自Hypersil BDS、 Hypersil ODS、LiChrosorb、SHIMADZU VP-〇DS、Inertsil ODS-SP、Extend-C18、ZORBAX ODS、 ZORBAX SB-C18、LiChrosorb C18、Hypersil ODS 中的一种，且柱长为 150mm，柱内径为 5um。
4. 如权利要求1所述的利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：所述的色谱 条件为柱温为20-30°C，采用可变波长紫外吸收检测器，检测波长为240nm，以5%甲醇水溶 液为流动相，流速为0. 3-0. 5ml/min，进样的样品体积为20 y L。
5. 如权利要求3所述的利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：所述的分离 色谱柱选自Inertsil 0DS-SP色谱柱。
6. 如权利要求4所述的利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：所述的色谱 条件为柱温为30°C。
7. 如权利要求4所述的利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：流动相的流 速为 0? 3ml/min〇
8. 如权利要求2所述的利用HPLC法检测单氰胺的定量方法，其特征在于：配制单氰 胺、双氰胺标准储备溶液时所用的溶剂为甲醇与水的混合溶液，且两者的体积比为1 :20。
【文档编号】G01N30/02GK104502473SQ201410753678
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月10日 优先权日:2014年12月10日
【发明者】董昭苹, 吴文雷, 姚刚, 徐萍萍, 张锐, 李晓红, 吕印美 申请人:黄河三角洲京博化工研究院有限公司