人类血型检测试剂盒及其制备方法与流程

本发明涉及免疫检测领域，特别是指一种人类血型检测试剂盒及其制备方法。

背景技术：

血型是指血液成分(包括红细胞、白细胞、血小板及血浆蛋白)表面的抗原类型。通常所说的血型是指红细胞膜上特异性抗原类型，而与临床关系最密切，人们所熟知的是红细胞ABO血型系统及Rh血型系统。

早期ABO血型及Rh血型实验室检测方法主要有血凝试验、微柱凝胶试验，上述方法已广泛应用于临床血型鉴定以及输血科交叉配血等。近年建立了如流式细胞技术、酶联免疫吸附试验、胶体金凝集技术等实验室检测方法。其中，血凝试验是指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集反应，主要分为玻片法、试管法、全自动微板法。微柱凝胶试验采用凝胶技术进行抗球蛋白试验，该方法可提高试验的灵敏度及特异性。目前微柱凝胶试验在国外输血领域已逐渐作为常规应用于ABO及Rh血型定型，未知血型抗体筛查以及直接抗球蛋白试验。

然而，现有技术中血凝试验、微柱凝胶试验、胶体金凝集技术均为反定性产品，检测结果需要进行反向推断才能判定结果，且操作较为繁琐，检测过程受认为因素干扰较多。同时，流式细胞术、酶联免疫检测，需要有专业人员进行操作，并且需要特殊设备进行判读。此外，上述传统方法使用的血液样本不能出现溶血，溶血样本会干扰检测结果，导致错误判读。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种人类血型检测试剂盒，可同时检测ABO及Rh血型，检测结果直观，并可用于检测溶血样本，具有高灵敏性、特异性与稳定性。

基于上述目的本发明提供的人类血型检测试剂盒包括检测条，所述检测 条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人A抗原单克隆抗体、胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体和胶体金标记的鼠抗人D抗原单克隆抗体；所述反应膜包括包被有鼠抗人B抗原单克隆抗体的B抗原检测线、包被有鼠抗人A抗原单克隆抗体的A抗原检测线、包被有鼠抗人D抗原单克隆抗体的Rh检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。

可选的，所述鼠抗人B抗原单克隆抗体的浓度为1.0-5.0mg/mL，所述鼠抗人A抗原单克隆抗体的浓度为1.0-5.0mg/mL，所述鼠抗人D抗原单克隆抗体浓度为1.0-10.0mg/mL。

可选的，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为4.0-10.0mg/mL。

可选的，还包括样本稀释液，该样本稀释液为磷酸盐缓冲液。

较佳的，所述检测条放置于长方形塑料盒中，构成检测卡，该检测卡上设有样品孔和检测孔，所述样品孔与所述检测条的所述样品垫位置对应，所述检测孔对应所述检测条的所述检测线和所述质控线。

基于相同的发明构思，本发明还提供了上述人类血型检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)反应膜的制备：

稀释所述鼠抗人B抗原单克隆抗体、鼠抗人A抗原单克隆抗体、鼠抗人D抗原单克隆抗体和所述羊抗鼠IgG多克隆抗体，并喷涂至所述反应膜上，分别形成所述B抗原检测线、A抗原检测线、Rh检测线与质控线，干燥备用；

(2)金结合物垫的制备：

将所述鼠抗人B抗原单克隆抗体、鼠抗人A抗原单克隆抗体、鼠抗人D抗原单克隆抗体分别与胶体金进行偶联制得胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体溶液、胶体金标记的鼠抗人A抗原单克隆抗体溶液、胶体金标记的鼠抗人D抗原单克隆抗体溶液，均调整浓度，并混合为混合液，该混合液浸泡所述金结合物垫，铺金，干燥备用；

(3)切割装配：将所述反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配至所述反应板，切割后形成所述检测条。

可选的，所述鼠抗人A抗原单克隆抗体和鼠抗人B抗原单克隆抗体分别通过以下步骤制备获得：

(1)取正常人的红细胞，洗涤、离心后取上清；

(2)悬液免疫BALB/C小鼠，取脾脏，获得脾淋巴细胞悬液备用；

(3)骨髓瘤细胞与脾淋巴细胞通过聚乙二醇融合；

(4)选择培养基初步筛选、抗原特异性筛选及有限稀释、克隆化。

可选的，所述胶体金标记的鼠抗人A抗原单克隆抗体、胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体、胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体的制备包括以下步骤：

(1)使用碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.0-9.0；

(2)加入单克隆抗体，搅拌；

(3)加入10％牛血清白蛋白溶液，搅拌；

(4)离心，弃去上清液；

(5)加入胶体金结合物稀释液，即得。

较佳的，使用碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5。

可选的，所述胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体溶液、胶体金标记的鼠抗人A抗原单克隆抗体溶液、胶体金标记的鼠抗人D抗原单克隆抗体溶液，均调整浓度至6-10μg/mL，混合为混合液。

从上面所述可以看出，本发明提供的人类血型检测试剂盒具有快速、简便、不需特殊设备，适用广泛，特异性好，灵敏度高。可同时检测ABO和Rh血型。整个操作时间仅需3-5分钟，检测结果直观，适用于临床检测、现场调查等。并且，本发明可对溶血样本进行检测，溶血样本与未溶血样本检测结果无明显差异，有效控制临床应用过程中因溶血造成的错误判读，避免患者后期诊疗过程中输入错误血型的高危风险。

附图说明

图1为本发明实施例人类血型检测试剂盒中检测条的结构示意图；

图2为本发明实施例人类血型检测试剂盒中检测卡的结构示意图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明进一步详细说明。

实施例1；人类血型检测试剂盒

在本实施例中，所述人类血型检测试剂盒，包括检测条或检测卡、样本 稀释液。图1为本发明实施例人类血型检测试剂盒中检测条的结构示意图，如图1所示，所述检测条包括反应板1，以及粘附于所述反应板上1的样品垫2、金结合物垫3、反应膜4、粗纤维滤纸5。在本实施例中，所述金结合物垫3包被有胶体金标记的鼠抗人A抗原单克隆抗体、胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体和胶体金标记的鼠抗人D抗原单克隆抗体。

在本实施例中，所述反应膜4为硝酸纤维素膜，包括B抗原检测线6、A抗原检测线7，Rh检测线8、质控线9。B抗原检测线6包被有鼠抗人B抗原单克隆抗体，A抗原检测线7包被有鼠抗人A抗原单克隆抗体，Rh检测线8包被有鼠抗人D抗原单克隆抗体。

在本实施例中，所述鼠抗人A抗原单克隆抗体的浓度为1.0-5.0mg/mL。较佳地，所述鼠抗人A抗原单克隆抗体浓度为1.5mg/mL。该鼠抗人A抗原单克隆抗体是无色澄清透明溶液；用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)测定，上样量为10μL时，该鼠抗人A抗原单克隆抗体显示为重链和轻链各一条带。

在本实施例中，所述鼠抗人B抗原单克隆抗体的浓度为1.0-5.0mg/mL。较佳地，所述鼠抗人B抗原单克隆抗体浓度为1.5mg/mL。鼠抗人B抗原单克隆抗体是无色澄清透明溶液，用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)测定，上样量为10μL时，该鼠抗人B抗原单克隆抗体显示为重链和轻链各一条带。

在本实施例中，所述鼠抗人D抗原单克隆抗体浓度为1.0-10.0mg/mL。较佳地，所述鼠抗人D抗原单克隆抗体浓度为1.5mg/mL。该鼠抗人D抗原单克隆抗体是无色澄清透明溶液。用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)测定，上样量为10μL时，该抗体显示为重链和轻链各一条带。可选地，该单克隆抗体购自北京万域美澜科技有限公司。

在本实施例中，所述质控线9包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。作为一个较佳的实施例，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体包被前为无色透明液体，浓度为4.0-10.0mg/mL。较佳地，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为4mg/mL。可选地，该单克隆抗体购自北京万域美澜科技有限公司。

在本实施例中，所述样本稀释液为20mM，pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。

图2为本发明实施例人类血型检测试剂盒中检测卡的结构示意图，如图 2所示，作为一个可选的实施例，所述检测条放置于特定的长方形塑料盒中，构成所述检测卡，该检测卡上设有一样品孔10和检测孔11。所述样品孔10用于滴加实验样品，与所述检测条的样品垫2位置对应；检测孔11对应检测条的B抗原检测线6、A抗原检测线7、Rh检测线8和质控线9，通过检测孔11可以观察到所述反应膜4上B抗原检测线6、A抗原检测线7、Rh检测线8和质控线9的变化。

实施例2：人类血型检测试剂盒的制备方法

在反应膜4上，利用鼠抗人B抗原单克隆抗体包被B抗原检测线6，鼠抗人A抗原单克隆抗体包被A抗原检测线7，鼠抗人D抗原单克隆抗体包被Rh检测线8，重组幽门螺杆菌抗原包被作为检测线；利用羊抗鼠IgG多克隆抗体包被质控线9；标记胶体金的鼠抗人B抗原单克隆抗体、标记胶体金的鼠抗人A抗原单克隆抗体、标记胶体金的鼠抗人D抗原单克隆抗体混合包被金结合物垫3，组装即得检测条。

(1)反应膜的制备：

用包被稀释液分别将鼠抗人B抗原单克隆抗体、鼠抗人A抗原单克隆抗体、鼠抗人D抗原单克隆抗体稀释至最佳包被浓度0.5-1.5mg/mL；用包被稀释液将羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释至最佳包被浓度1-3mg/mL；用点膜机将4种包被液分别喷到反应膜4上，喷点量为0.1μL/mm，分别形成所述B抗原检测线6、A抗原检测线7、Rh检测线8和质控线9；将已包被的反应膜4于37℃干燥3小时，并于室温保存。

较佳地，用包被稀释液分别将鼠抗人B抗原单克隆抗体、鼠抗人A抗原单克隆抗体、鼠抗人D抗原单克隆抗体稀释至最佳包被浓度1mg/mL；用包被稀释液将羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释至最佳包被浓度2mg/mL。在该浓度时，反应膜质控线和检测线显色效果较好，且灵敏度，特异性较好。

所述包被稀释液为0.05M的磷酸盐缓冲液。所述包被稀释液为无色、澄清、透明液体且无悬浮物。将该缓冲液用纯化水两倍稀释，用PH计测定PH值为7.3-7.5。将该缓冲液用纯化水两倍稀释，用电导率仪测定电导率为9000-14000μs/cm。

鼠抗人A抗原单克隆抗体和鼠抗人B抗原单克隆抗体通过以下步骤制备获得：

1)取正常人的红细胞，洗涤、离心后取上清；

2)悬液免疫BALB/C小鼠，取脾脏，获得脾淋巴细胞悬液备用；

3)骨髓瘤细胞与脾淋巴细胞通过聚乙二醇融合；

4)选择培养基初步筛选、抗原特异性筛选及有限稀释、克隆化。

具体地，所述鼠抗人A抗原单克隆抗体通过以下方法制备获得：

取正常人的A型红细胞，用生理盐水洗涤3次，每次1000r/min离心10min取上清。将上清(悬液)用生理盐水稀释至10％的悬液免疫BALB/C小鼠(腹腔注射0.5ml/只)共3次，每次间隔10天，最后一次注射3天后小鼠拉颈处死，无菌取脾脏，培养液洗一次，脾脏研碎，过不锈钢筛网。离心，细胞用培养液洗2次。脾淋巴细胞悬液备用。

取对数生长SP2/0骨髓瘤细胞离心，用无血清培养液洗涤2次后用于融合。按1：5的比例混合脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞，用无血清不完全培养液洗1次，离心1000rpm，10min；弃上清，吸净残留液体。在90s内于37℃水浴中加入0.2ml 50％聚乙二醇4000(PEG4000)，37℃继续温育90s，然后1000r/min离心6min，用无血清RPMI1640培养基终止其反映，然后离心10min(1000r/min)，去上清，加入20％1640-HAT培养基40ml，混匀后加入4块96孔组织培养板中，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养，10-15天后，用A、B、O三型红细胞检测培养孔上清的凝集情况，筛选出对A型细胞凝集、对B、O型细胞不凝集的阳性孔，然后用有限稀释法克隆化。

腹腔注射0.5ml液体石蜡于BALB/C鼠，1-2周后腹腔注射杂交瘤细胞，接种细胞7-10天后(小鼠频于死亡之前)处死小鼠，用无菌注射器抽提腹水。1000r/min 10min离心后取上清进行冻存包藏。

具体地，所述鼠抗人B抗原单克隆抗体通过以下方法制备获得：

取正常人的B型红细胞，用生理盐水洗涤3次，每次1000r/min离心10min取上清。将上清(悬液)用生理盐水稀释至10％的悬液免疫BALB/C小鼠(腹腔注射0.5ml/只)共3次，每次间隔10天，最后一次注射3天后小鼠拉颈处死，无菌取脾脏，培养液洗一次，脾脏研碎，过不锈钢筛网。离心，细胞用培养液洗2次。脾淋巴细胞悬液备用。

取对数生长SP2/0细胞离心，用无血清培养液洗涤2次后用于融合。按1：5的比例混合脾细胞与骨髓瘤细胞，用无血清不完全培养液洗1次，离心1000rpm，10min；弃上清，吸净残留液体。在90s内于37℃水浴中加入0.2ml 50％PEG4000，37℃继续温育90s，然后1000r/min离心6min，用无血 清RPMI1640培养基终止其反映，然后离心10min(1000r/min)，去上清，加入20％1640-HAT培养基40ml，混匀后加入4块96孔组织培养板中，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养，10-15天后，用A、B、O三型红细胞检测培养孔上清的凝集情况，筛选出对B型细胞凝集、对A、O型细胞不凝集的阳性孔，然后用有限稀释法克隆化。

腔注射0.5ml液体石蜡于BALB/C鼠，1-2周后腹腔注射杂交瘤细胞，接种细胞7-10天后(小鼠频于死亡之前)处死小鼠，用无菌注射器抽提腹水。1000r/min 10min离心后取上清进行冻存包藏。

(2)金结合物垫的制备：

分别将鼠抗人B抗原单克隆抗体、鼠抗人A抗原单克隆抗体、鼠抗人D抗原单克隆抗体与胶体金进行偶联制得胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体溶液、胶体金标记的鼠抗人A抗原单克隆抗体溶液、胶体金标记的鼠抗人D抗原单克隆抗体溶液。将上述3种胶体金标记的单克隆抗体溶液分别按混合后最佳浓度6-10μg/mL调整并混合，以1-3mL/条，浸泡所述金结合物垫，铺金，37℃干燥3小时，并于室温保存。

较佳地，所述3种胶体金标记的单克隆抗体溶液分别按混合后最佳浓度8μg/mL调整并混合，以1.5mL/条，浸泡所述金结合物垫，铺金。该浓度时试纸条的特异性和敏感性较好，灵敏度较高。

在本实施例中，胶体金标记的鼠抗人B抗原单克隆抗体的制备步骤如下：

1)用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.0-9.0；

2)加入6-20μg/mL鼠抗人B抗原单克隆抗体，搅拌40分钟；

3)再加入10％的牛血清白蛋白至终浓度为1％，搅拌15分钟；

4)12000rpm/min，4℃离心15分钟，小心弃去上清液；

5)加入原体积(原体积以胶体金体积计算)的1/2体积的胶体金结合物稀释液。

较佳地，步骤1)中用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.5。该PH值试纸条效果较好，稳定性好。

较佳地，步骤2)中，加入10μg/mL鼠抗人B抗原单克隆抗体。该浓度时胶体金与鼠抗人B抗原单克隆抗体结合充分，且稳定，原料利用率高，制备出的试纸条稳定、效果佳。

在本实施例中，胶体金标记的鼠抗人A抗原单克隆抗体的制备步骤如下：

1)用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.0-9.0；

2)加入6-20μg/mL鼠抗人A抗原单克隆抗体，搅拌40分钟；

3)再加入10％的牛血清白蛋白至终浓度为1％，搅拌15分钟；

4)12000rpm/min，4℃离心15分钟，小心弃去上清液；

5)加入原体积(原体积以胶体金体积计算)的1/2体积的胶体金结合物稀释液。

较佳地，步骤1)中用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.5。该PH值试纸条效果较好，稳定性好。

较佳地，步骤2)中，加入10μg/mL鼠抗人A抗原单克隆抗体。该浓度时胶体金与鼠抗人A抗原单克隆抗体结合充分，且稳定，原料利用率高，制备出的试纸条稳定、效果佳。

在本实施例中，胶体金标记的鼠抗人D抗原单克隆抗体的制备步骤如下：

1)用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.0-9.0；

2)加入6-20μg/mL鼠抗人D抗原单克隆抗体，搅拌40分钟；

3)再加入10％的牛血清白蛋白至终浓度为1％，搅拌15分钟；

4)12000rpm/min，4℃离心15分钟，小心弃去上清液；

5)加入原体积(原体积以胶体金体积计算)的1/2体积的胶体金结合物稀释液。

较佳地，步骤1)中用0.1M碳酸钾溶液调节胶体金PH值至8.5。该PH值试纸条效果较好，稳定性好。

较佳地，步骤2)中，加入10μg/mL鼠抗人D抗原单克隆抗体。该浓度时胶体金与鼠抗人D抗原单克隆抗体结合充分，且稳定，原料利用率高，制备出的试纸条稳定、效果佳。

以上所述胶体金结合物稀释液是将磷酸氢二钠5.372g、磷酸二氢钠0.78g、牛血清白蛋白5g、氯化钠8.5g、酪蛋白0.5g溶于1L去离子水中，混匀制备而成。

(3)切割装配：在内包间内将反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配成反应板，再用切割机切成4mm宽的检测条组装成成品。

实施例3：人类血型检测试剂盒的检测方法

1.检测前准备：检验前将试剂盒和样本恢复至室温。实验湿度应小于60％，实验温度为18-30℃。

2.样本准备：全血为指尖采血或者采用静脉采血。全血样本采集后不做保存，即采即用。

3.检测条检测方法

(1)从原包装铝箔袋中取出检测条，平置于台面上；

(2)取20μL全血，加到检测条样品垫2处，再加样本稀释液100μL(约2-3滴)；

(3)3-5分钟内判读结果，10分钟后检验结果无效。

(4)检测结果判定：

ABO血型系统判定(B抗原检测线6、A抗原检测线7、质控线9有参照意义)：

A型血：质控线9和A抗原检测线7位置各出现一条红色条带。

B型血：质控线9和B抗原检测线6位置各出现一条红色条带。

AB型血：质控线9、A抗原检测线7和B抗原检测线6位置各出现一条红色条带。

O型血：只在质控线9位置出现一条红色条带。

无效：质控线9位置没有出现红色条带。

RhD血型系统判定(Rh检测线8、质控线9有参照意义)：

RhD阳性血：质控线9和Rh检测线8位置各出现一条红色条带。

RhD阴性血：只在质控线9位置出现一条红色条带。

无效：质控线9位置没有出现红色条带

4.检测卡检测方法

(1)从铝箔袋中取出检测卡，放在水平工作台面上平置，并做好样本标记；

(2)取20μL全血样本，直接加入到加样孔10中，再加样本稀释液100μL(约2-3滴)；

(3)3-5分钟内判读结果，10分钟后检验结果无效。

(4)检测结果判定：

ABO血型系统判定(B抗原检测线6、A抗原检测线7、质控线9有参 照意义)：

A型血：质控线9和A抗原检测线7位置各出现一条红色条带。

B型血：质控线9和B抗原检测线6位置各出现一条红色条带。

AB型血：质控线9、A抗原检测线7和B抗原检测线6位置各出现一条红色条带。

O型血：只在质控线9位置出现一条红色条带。

无效：质控线9位置没有出现红色条带。

RhD血型系统判定(Rh检测线8、质控线9有参照意义)：

RhD阳性血：质控线9和Rh检测线8位置各出现一条红色条带。

RhD阴性血：只在质控线9位置出现一条红色条带。

无效：质控线9位置没有出现红色条带

实施例4：人类血型检测试剂盒有效性验证

1.阴性、阳性符合率检测：

(1)检测10份A型血液质控样本(Rh型阳性)，A型及Rh型结果检测结果均为阳性，B型为阴性。

(2)检测10份B型血液质控样本(Rh型阳性)，B型及Rh型结果检测结果均为阳性，A型为阴性。

(3)检测10份AB型血液质控样本(Rh型阳性)，A型、B型及Rh型结果检测结果均为阳性。

(4)检测10份O型血液质控样本(Rh型阳性)，A型、B型及Rh型结果均为阴性。

(5)检测4份Rh型阴性血液质控样本(A、B、AB、O型各一支)，Rh型结果均为阴性。其中A型Rh型阴性血液质控样本A型检测结果为阳性，B型为阴性；B型Rh型阴性血液质控样本B型检测结果为阳性，A型为阴性；AB型Rh型阴性血液质控样本A型、B型检测结果均为阳性；O型Rh型阴性血液质控样本A型、B型检测结果均为阴性。

2.灵敏度检测：

(1)A型最低检出限质控样本检测，最低检出限样本原液，按1：4稀释后检测，A型检测结果为阳性。

(2)B型最低检出限质控样本检测，最低检出限样本原液，按1：4稀释后检测，B型检测结果为阳性。

(3)Rh型最低检出限质控样本检测，最低检出限样本原液，按1：4稀释后检测，Rh型检测结果为阳性。

3.精密性检测：

选择AB型及Rh型阳性的样本作为精密性质控样本检测，采用10个检测卡平行测定精密性质控样本，各检测卡相同血型检测线显色速度及强度一致，均一性无差别。

4.特异性检测：

红细胞A型抗原、B型抗原与D型抗原间无干扰。

检测含内源性干扰物质和潜在交叉反应物质的样本，结果如下：

高甘油三酯(<10mmol/L)的样本、高胆红素(<200μmol/L)的样本、以及溶血样本不会对本发明造成干扰。

抗核抗体、抗线粒体抗体，抗双链DNA抗体、乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋体、艾滋病毒、戊型肝炎病毒为阳性的样本不会对本发明造成干扰。

5.稳定性检测：

在长期稳定性实验过程中，4～30℃干燥避光保存14月依然可以满足产品性能指标要求；加速稳定性实验过程中，37℃条件下，16天后检测结果依然可以满足产品性能指标要求。

6.溶血样本检测：采用溶血样本进行上述实验，依然符合上述结果。

本发明提供的人类血型检测试剂盒具有以下优势，

(1)同时检测ABO和Rh血型

本发明提供的人类血型检测试剂盒的反应膜具有包被有鼠抗人B抗原单克隆抗体的B抗原检测线、包被有鼠抗人A抗原单克隆抗体的A抗原检测线和包被有鼠抗人D抗原单克隆抗体的Rh检测线，可同时对ABO和Rh血型定型。

(2)检测结果直观

本发明提供的人类血型检测试剂盒通过“双抗体夹心法”直接检测细胞表面A抗原、B抗原、D抗原，检测线变色即表明存在相应抗原，代表为该血型。避免了传统方法检测结果需要进行反向推断才能判定结果，且操作较为繁琐，检测过程受认为因素干扰较多等问题。

(3)操作简便、快捷

本发明提供的人类血型检测试剂盒操作快速、简便、不需特殊设备，准确和灵敏度高等特点，整个操作时间仅需3-5分钟。

(4)可用于溶血样本的检测

由于本发明提供的人类血型检测试剂盒直接检测细胞表面抗原，进而可进行溶血样本的检测，溶血样本与未溶血样本检测结果无明显差异，有效控制临床应用过程中因溶血造成的错误判读，避免患者后期诊疗过程中输入错误血型的高危风险。

可见，本发明提供的人类血型检测试剂盒具有快速、简便、不需特殊设备，适用广泛，特异性好，灵敏度高。可同时检测ABO和Rh血型。整个操作时间仅需3-5分钟，检测结果直观，适用于临床检测、现场调查等。并且，本发明可对溶血样本进行检测，溶血样本与未溶血样本检测结果无明显差异，有效控制临床应用过程中因溶血造成的错误判读，避免患者后期诊疗过程中输入错误血型的高危风险。

所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。