一种电化学发光夹心生物传感器及制备与应用的制作方法

文档序号:11945829阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种电化学发光夹心生物传感器的制备方法,其特征在于,主要包括以下步骤:

(S1)采用恒电位法制备金纳米-石墨烯修饰的玻碳电极;

(S2)采用柠檬酸还原氯金酸法制备AuNPs;

(S3)用Ru(bpy)2(dcbpy)NHS标记TBA2并溶解于PBS溶液中,得到Ru-TBA2信标;

(S4)将步骤(S3)所得Ru-TBA2信标用TCEP和pH为5.2的醋酸盐缓冲溶液预处理1 h;

(S5)将步骤(S2)所得AuNPs加入用NaOH处理过的玻璃瓶中,再加入步骤(S4)所得Ru-TBA2,在室温遮光下培育16 h后加入pH为8.2 的Tris-醋酸盐缓冲溶液和NaCl,继续在温室遮光下培育24 h;离心除去多余的Ru-TBA2;把得到的Ru-TBA2-AuNPs溶解到PBS缓冲溶液中;

(S6)将所述步骤(S1)所得到金纳米-石墨烯修饰的玻碳电极浸入含有巯基修饰的TBA1溶液中培育2~8 h,然后在含有凝血酶溶液中培育20 min;最后在步骤(S5)所得Ru-TBA2-AuNPs中培育20 min。

2.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述巯基修饰的TBA1序列为5’-SH-(CH2)6-TTTTTGGTTGGTGTGGTTGG-3’;所述Ru-TBA2信标的序列为5’-SH-(CH2)6-TTTTTTTTTTTTTTTAGTCCGTAGGGCAGGTGGGGGG TGACTT-(CH2)6-NH2-3’。

3. 根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述柠檬酸还原氯金酸法制备AuNPs主要包括:取氯金酸溶液于容器中加热至沸腾,然后快速加入柠檬酸钠;继续加热并不停的搅拌直到溶液的颜色由黄色变成红色,再不停的搅拌让溶液冷却到室温,储存在4 °C下备用。

4.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述恒电位法制备金纳米-石墨烯修饰的玻碳电极主要包括: 采用氧化石墨烯和氯金酸,在电位为-1.1 V下恒电位沉积到玻碳电极600~1000 s。

5.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述Ru(bpy)2(dcbpy)NHS的合成主要包括以下步骤:

(S11)将Ru(bpy)2Cl2、碳酸氢钠和2,2’-联吡啶-4,4’-二羧酸混合均匀,加入乙醇-水溶液中加热回流后冷却过滤制备Ru(bpy)2(dcbpy)(PF6)2

(S12)再将N,N′-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺搅拌混合后加入DMF溶液使其充分溶解后加入Ru(bpy)2(dcbpy)(PF6)2中合成Ru(bpy)2(dcbpy)NHS。

6.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,步骤(S5)制备所得Ru-TBA2-AuNPs的浓度为2~8 μM;步骤(S2)制备得到的AuNPs粒径为6-10 nm。

7.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述PBS缓冲溶液的PH值为7.4。

8.一种根据权利要求1所述制备方法得到的电化学发光夹心生物传感器。

9.根据权利要求8所述电化学发光夹心生物传感器的应用,其特征在于,主要用于凝血酶的检测。

10.根据权利要求9所述应用,其特征在于,所述凝血酶的检测主要包括以下步骤:

(S21)将所述电化学发光夹心生物传感器浸入到待测凝血酶溶液中20~40 min,然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗电极;

(S22)将所述电化学发光夹心生物传感器浸入到1~10µM的Ru-TBA2-AuNPs中20~40 min,然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗电极;

(S23)将所述电化学发光生物传感器作为工作电极在三电极系统中,以0.05~0.1 M三正丙胺溶液作为检测溶液进行电化学及电化学发光检测。

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