一种基于贵金属纳米粒子的可视化检测方法及应用与流程

文档序号:12466064阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于贵金属纳米粒子的可视化检测方法,其特征在于,包括

1)含酶催化溶液制备的步骤;

2)贵金属纳米粒子溶液制备的步骤;

3)肉眼观察孔板中的颜色变化,并用相机拍照,得到可视化检测结果;

4)用微孔板读数器读取孔板中金或银纳米粒子的溶液的吸光度值,将碱性磷酸酶(ALP)的浓度与所得吸光度值做线性拟合;

其中:含酶催化溶液是将L-抗坏血酸-2-磷酸酯三钠盐(AA-P)溶解在二乙醇胺-硝酸的缓冲溶液(DEA buffer)中,在孔板中与不同浓度的碱性磷酸酶(ALP)孵化得到;

其中贵金属为金或银,其纳米粒子溶液是将氯金酸(HAuCl4)或硝酸银(AgNO3)加入到1)的溶液中启动氧化还原反应原位生长金或银纳米粒子得到。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,

步骤1)中,L-抗坏血酸-2-磷酸酯三钠盐(AA-P)溶解在二乙醇胺-硝酸的缓冲溶液(DEA buffer)中,取50-500μL上述溶液与不同浓度的碱性磷酸酶(ALP)于4-37℃下孵化0.5-24h;

步骤4)中,金或银纳米粒子的溶液的吸光度值是金或银纳米粒子的溶液在530nm或400nm处的吸光度值(A530nm or A400nm),并将ALP的浓度与A530nm或A400nm做线性拟合。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述AA-P的浓度为5-50mM;所述ALP的浓度为0-100U/L;所述DEAbuffer浓度为50-400mM。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述HAuCl4或AgNO3的浓度为1M,体积为0.5-3μL。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤1)所述AA-P的浓度为10mM;步骤1)所述DEA buffer浓度为160mM;步骤2)所述HAuCl4或AgNO3的体积为3μL。

6.一种基于贵金属纳米粒子的可视化检测方法的应用,其特征在于,具体步骤如下:

1)将不同浓度的抗原通过抗原抗体的特异性结合吸附到捕获抗体包被的ELISA孔板上;

2)将生物素化的检测抗体(biotin-Ab2)通过抗原抗体的特异性结合吸附到ELISA孔板上;

3)将链霉亲和素标记的碱性磷酸酶(streptavidin-ALP)通过生物素与亲和素的特异性结合吸附到ELISA孔板上;

4)L-抗坏血酸-2-磷酸酯三钠盐(AA-P)溶解在二乙醇胺-硝酸的缓冲溶液(DEA buffer)中得到AA-P的溶液,将所得溶液加入到3)所述孔板中,恒温条件下孵化1h;

5)将HAuCl4或AgNO3加入到4)中启动氧化还原反应原位生长金或银纳米粒子,得到金或银纳米粒子的溶液;

6)肉眼观察孔板中的颜色变化,并用相机拍照,得到可视化检测结果;

7)用微孔板读数器读取孔板中金或银纳米粒子的溶液在530nm或400nm处的吸光度值(A530nm or A400nm),将ALP浓度与A530nm或A400nm做线性拟合。

7.根据权利要求6所述方法的应用,其特征在于,步骤2)所述biotin-Ab2的浓度为0.1-3μg/mL;步骤3)所述streptavidin-ALP的浓度为0.1-3μg/mL。

8.根据权利要求7所述方法的应用,其特征在于,所述biotin-Ab2的浓度为2μg/mL;所述streptavidin-ALP的浓度为1μg/mL。

9.根据权利要求6所述方法的应用,其特征在于,所述抗原为甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原(PSA)、肿瘤抗原153(CA153);或免疫球蛋白(IgG);或大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌;或人类免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1