本发明涉及一种快速检测白酒中γ-氨基丁酸的方法，具体涉及一种利用超高效液相色谱串接三重四级杆质谱仪快速检测白酒中γ-氨基丁酸的方法，属于酒类分析技术领域。
背景技术：
γ-氨基丁酸(GABA)作为一种天然存在的非蛋白组成氨基酸，是白酒中的重要营养成分。其是中枢神经系统中很重要的抑制性神经递质，具有极其丰富的生理功能，如：(1)镇静神经、抗焦虑。(2)降低血压。GABA能作用于脊髓的血管运动中枢，有效促进血管扩张，达到降低血压的目的。据报道，黄芪等中药的有效降压成分即为GABA。(3)治疗疾病。(4)降低血氨。(5)提高脑活力。GABA能进入脑内三羧酸循环，促进脑细胞代谢，同时还能提高葡萄糖代谢时葡萄糖磷酸酯酶的活性，增加乙酰胆碱的生成，扩张血管增加血流量，并降低血氨，促进大脑的新陈代谢，恢复脑细胞功能。(6)促进乙醇代谢。以嗜酒者为对象，服用GABA再饮用60mL威士忌后采血测定血中乙醇及乙醛浓度，发现后者浓度明显比对照组低。(7)最新的研究表明，GABA还具有防止皮肤老化、消除体臭、改善脂质代谢，防止动脉硬化高效减肥等功能。
鉴于γ-氨基丁酸的上述强大功能，研究γ-氨基丁酸的检测方法迫在眉睫。目前γ-氨基丁酸的检测多采用比色法或者液相色谱-衍生化法。其中，比色法只能半定量，液相-衍生法不稳定，操作费时、麻烦，且衍生化试剂有毒，不利于人体健康。
技术实现要素：
为避免上述现有技术所存在的不足之处，本发明提供了一种快速检测白酒中γ-氨基丁酸的方法，旨在利用超高效液相色谱仪串接三重四级杆质谱仪对白酒中的γ-氨基丁酸进行快速、准确的检测。
本发明解决技术问题，采用如下技术方案：
本发明快速检测白酒中γ-氨基丁酸的方法，其特点在于：利用超高效液相色谱串接三重四级杆质谱仪对白酒中的γ-氨基丁酸进行检测；
所用仪器为配有三重四级杆质谱仪的超高效液相色谱仪；
所述方法包括如下步骤：
(1)对待测白酒酒样进行前处理：
准确量取50mL待测白酒酒样于100mL旋转蒸发瓶中，旋转蒸发至3-5mL，去除待测白酒中的醇类物质，然后用超纯水定容至10mL，最后经0.22μm滤膜针头过滤器过滤，获得待测样品；
(2)设定超高效液相色谱仪的条件为：
色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱；
柱温为30～45℃；
样品室温度为10～20℃
流动相：A相为乙腈，B相为体积浓度为0.1％的乙酸水溶液；
流速为0.2～0.5mL/min；
洗脱方式为等度洗脱；
进样量为1～5μL；
检测所用时间为2min；
三重四级杆质谱检测器的条件设定为：
离子化方式：ESI+；
监测方式：多反应监测模式MRM；
锥孔电压：30～50V；
毛细管电压：3.00～5.00kV；
脱溶剂气温度：400～600℃；
脱溶剂气流量：500～1000L/h；
锥空气流量：50～100L/h；
离子源温度：150～500℃；
质谱方法参数表如表1：
表1：质谱方法参数表
(3)γ-氨基丁酸的标准曲线的绘制
取γ-氨基丁酸配制质量浓度范围在50～500ng/mL的一系列标准工作溶液(至少配样5个)，然后按照步骤(2)所设定的仪器的条件取1.5mL标准工作溶液进样，用超高效液相色谱串接三重四级杆质谱仪进行检测，以待测物的峰面积或者待测物在质谱中的响应值对其所相应的质量浓度进行线性回归，获得γ-氨基丁酸的线性回归方程，所述线性回归方程所对应的曲线，即为γ-氨基丁酸的标准曲线；以待测物在质谱中的响应值为例，γ-氨基丁酸对应的线性回归方程及相关系数r2见表2，方程中X为γ-氨基丁酸的浓度，Y为对应的待测物在质谱中的响应值。
表2：γ-氨基丁酸的线性回归方程、相关系数、检出限、定量限
(4)待测白酒酒样的检测
将待测白酒酒样按步骤(1)的方式进行前处理获得待测样品后，取1.5mL按步骤(2)所设定的条件进行检测，获得待测样品的色谱图，根据母离子对待测样品进行定性分析，然后根据γ-氨基丁酸的标准曲线对待测样品进行定量分析。
对本发明方法作如下灵敏度测试：灵敏度测试包括仪器的灵敏度与方法的灵敏度，仪器的灵敏度用仪器的检出限表示，取信噪比≥3的γ-氨基丁酸的一系列标准工作溶液的最小浓度为仪器检出限；方法的灵敏度用方法的定量限表示，取信噪比≥9的γ-氨基丁酸的一系列标准工作溶液的最小浓度为方法定量限。所得的相关数据见表2。
对本发明方法作如下准确性及重现性实验：选用同一个白酒样品经前处理后作为空白样品，分为3份，分别加入一系列标准工作溶液进行加标回收实验，计算回收率；选取1个白酒样品按照同一前处理方法处理6个，分别进行实验，通过计算其相对标准偏差(RSD)的范围来判断分析方法的重现性。所述的准确性用回收率来表示，见表3，方法的重现性用相对标准偏差(RSD)来表示，见表4。可以看出回收率在80～120％，RSD<10％。
表3：γ-氨基丁酸的加标回收率实验
表:4：γ-氨基丁酸的重现性实验
本发明的有益效果体现在：
1、本发明建立了一种利用超高效液相色谱串接三重四级杆质谱快速检测白酒中γ-氨基丁酸的方法，能够准确地对白酒中的γ-氨基丁酸进行定性、定量，为白酒中γ-氨基丁酸的准确判定、快速检测提供科学依据。
2、本发明的检测方法操作简单快捷、准确可靠、重复性好。
3、本发明ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱与0.1％的乙酸水溶液和乙腈流动相的选择对白酒中γ-氨基丁酸达到了优异的分离效果。
4、本发明的前处理操作步骤少，从而降低了实验误差并提高了数据的准确性。
5、本发明通过降低检测时间可以节约人力、物力以及财力。
6、本发明采用多级反应监测模式(MRM)，灵敏度以及较大跨度的线性范围能够满足酒类样品的检测要求。
7、本发明测试了加标样品回收率以及实际样品中γ-氨基丁酸的含量。结果表明，γ-氨基丁酸的检出限与定量限完全能够满足酒类样品的测定要求，化合物回收率、重现性均满足定量测试要求。
具体实施方式
为验证本发明方法的准确性，取已知γ-氨基丁酸含量的几个白酒样品按本发明的方法进行测定，具体步骤如下：
(1)对待测白酒酒样进行前处理：
准确量取50mL待测白酒酒样于100mL旋转蒸发瓶中，旋转蒸发至3-5mL，去除待测白酒中的醇类物质，然后用超纯水定容至10mL，最后经0.22μm滤膜针头过滤器过滤，获得待测样品；
(2)设定超高效液相色谱仪的条件为：
色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱；
柱温为40℃；
样品室温度为20℃
流动相：A相为乙腈，B相为体积浓度为0.1％的乙酸水溶液；
流速为0.2mL/min；
洗脱方式为等度洗脱(流动相A相与B相的体积比为20％：80％)；
进样量为2μL；
检测所用时间为2min；
三重四级杆质谱检测器的条件设定为：
离子化方式：ESI+；
监测方式：多反应监测模式MRM；
锥孔电压：30V；
毛细管电压：3.00kV；
脱溶剂气温度：400℃；
脱溶剂气流量：1000L/h；
锥空气流量：50L/h；
离子源温度：150℃；
质谱方法参数表如表1：
表1：质谱方法参数表
(3)、待测白酒酒样的检测
将待测白酒酒样按步骤(1)的方式进行前处理获得待测样品后，按步骤(2)所设定的条件取1.5mL进样检测，获得待测样品的色谱图，根据母离子对待测样品进行定性分析，然后根据γ-氨基丁酸的标准曲线对待测样品进行定量分析，即获得待测白酒中所含有的γ-氨基丁酸及相应含量。
各白酒样品中γ-氨基丁酸的实际含量与通过本实施例方法测得的含量见表5。
表5