一种快速检测抗原‑抗体反应的试纸条的制作方法

本实用新型涉及医疗
技术领域：
，特别是涉及一种快速检测抗原抗体反应的试纸条。
背景技术：
：目前，免疫学检验技术主要包括酶免疫技术，荧光免疫技术，放射免疫技术，化学发光免疫技术，免疫浊度技术，胶体金技术等。但是，传统的检测技术一般都需要比较长的时间才会出结果，例如酶联免疫吸附试验，从包被、封闭、一抗反应、二抗反应、显色到出结果最快也需要3个小时，导致病人等待结果时间长，耽误病人及时就医，影响疾病诊治情况。免疫层析法是近几年兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带，当干燥的纤维素一端浸入样品后，由于毛细管作用，样品沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检测带，根据该原理制成的免疫层析试纸条也越来越被广泛应用到医疗检测领域，如胶体金试条。尽管现有的胶体金试纸条相比传统的免疫学检验技术，检测时间短，并且能够同时对大批量的检测样本进行检测，明显缩短检测时间。但现有的胶体金试纸条测试物种比较单一，只能用于检测某一特定物种的抗原-抗体反应，不能广泛应地用到不同的物种中。因此，在面对不同物种的抗原-抗体反应的检测时，需要重新制备相应的胶体金试纸条，而从胶体金颗粒制备、划膜、标记、样品垫制备到样本的测试最快也需要一天的时间，这样一来，严重影响了试验的进度，拖慢了试验的进程。技术实现要素：鉴于此，本实用新型目的在于提供一种快速检测抗原-抗体反应的试纸条，该试纸条能够用于检测不同物种的抗原-抗体反应，并且操作简便、检测时间短、特异性强。本实用新型提供了一种快速检测抗原-抗体反应的试纸条，包括底板，所述底板上依次设置有样品垫，金标垫，层析膜，吸水纸；所述金标垫担载有胶体金标记的免疫蛋白；所述免疫蛋白为G蛋白或A蛋白。优选地，所述层析膜上还设置有控制带C线；所述控制带C线划有鼠IgG抗体或鼠IgA抗体。优选地，底板为半硬质塑料、硬质塑料或硬纸片中的一种。更优选地，半硬质塑料为PVC。优选地，样品垫为玻璃纤维膜或聚酯膜。更优选地，样品垫为玻璃纤维膜。优选地，金标垫的材质为玻璃纤维。优选地，层析膜的材质为硝酸纤维素。本实用新型提供的快速检测抗原抗体反应的试纸条的宽度为3～4mm，优选地，检测试条的宽度为4mm。本实用新型提供一种快速检测抗原-抗体反应的试纸条，包括底板，所述底板上依次设置有样品垫，金标垫，层析膜，吸水纸；所述金标垫担载有胶体金标记的免疫蛋白；所述免疫蛋白为G蛋白或A蛋白。本实用新型提供的快速检测抗原抗体反应的试纸条能够用于检测不同物种的抗原抗体反应，并且操作简便、检测时间短、特异性强。附图说明为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1为本实用新型实施例提供的快速检测抗原-抗体反应的试纸条的结构示意图；其中，1示底板，2示样品垫，3示金标垫，4示层析膜，5示吸水纸，6示检测带C线；图2为小鼠阳性CRP杂交瘤细胞培养液上清的检测结果；其中，图2A为实施例1试条的检测结果，图2B为实施例2试条的检测结果，图2C为对比例1试条的检测结果；图3为小鼠阳性CYS-C杂交瘤细胞培养液上清的检测结果；其中，图3A为实施例1试条的检测结果，图3B为实施例2试条的检测结果，图3C为对比例1试条的检测结果；图4为小鼠阳性β2-MG杂交瘤细胞培养液上清的检测结果；其中，图4A为实施例1试条的检测结果，图4B为实施例2试条的检测结果，图4C为对比例1试条的检测结果；图5为不同物种乙肝重组抗原-抗体反应的检测结果；其中，图5A为实施例1试条的检测结果，图5B为实施例2试条的检测结果，图5C为对比例1试条的检测结果。具体实施方式为了使本领域技术人员更好地理解本实用新型的技术方案，下面结合附图和具体实施方式对本实用新型进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。本实用新型提供的快速检测抗原-抗体反应的试纸条的制备过程中采用的仪器、试剂皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例和附图，进一步阐述本实用新型：参见图1，本实用新型实施例1～2提供的胰岛素检测试条，包括底板1，所述底板1上依次设置有样品垫2，金标垫3，层析膜4，吸水纸5；所述金标垫5担载有胶体金标记的免疫蛋白；所述免疫蛋白为G蛋白或A蛋白。其中，层析膜4上还设置有C线；所述C线划有鼠IgG抗体或鼠IgA抗体。实施例1金标垫的制备和标记：洗净1L的锥形瓶，放入可以加热的磁力搅拌器上，精确量取0.5L超纯水，加热至刚好沸腾，加入1％氯金酸溶液5ml，混匀1min，加入1％柠檬酸三钠9ml，反应10min.冷却至室温，定容到0.5L待使用。取2ml金溶液加入0.1M碳酸钾溶液20ul，充分混合均匀，取蛋白G用量20ug，混合均匀，静止反应5min，加入10％BSA的20ul，混合均匀，10000rpm，4℃，离心10min，去掉上清，加入1ml金悬浮液(PH值8.5的0.02MTRIS+0.75％Tween-20+3％蔗糖+0.75％PEG20000+1.2％酪蛋白)，铺至0.8cmX30cm的玻璃纤维上，37℃烘干2h。层析膜的制备：取鼠IgG抗体(购自杭州隆基生物)，用0.01mol/L的PB+3％海藻糖将鼠IgG抗体稀释成0.5mg/mL，使用量为35μL/30cm，用划膜仪划膜至硝酸纤维素膜(HFNC135膜Milipore)上，42℃反应2h，得到检测带C线。样品垫的处理：配制样品垫处理液(0.02MPB+0.05％酪蛋白+3％蔗糖+0.5％Tween-20，pH7.4)5ml,铺至2.8cmX30cm玻璃纤维上，以每5ml铺3cmX30cm的量铺，静止反应10min,沥干，37℃烘干过夜，在湿度30％以下包装，封口，备用。试纸条的组装：将样品垫，金标垫，划好的层析膜，以及吸水纸依次贴到PVC底板上，均匀切成4.0mm宽的膜条。实施例2金标垫的制备和标记：洗净1L的锥形瓶，放入可以加热的磁力搅拌器上，精确量取0.5L超纯水，加热至刚好沸腾，加入1％氯金酸溶液5ml，混匀1min，加入1％柠檬酸三钠9ml，反应10min.冷却至室温，定容到0.5L待使用。取2ml金溶液加入0.1M碳酸钾溶液20ul，充分混合均匀，取蛋白A用量20ug，混合均匀，静止反应5min，加入10％BSA的20ul，混合均匀，10000rpm，4℃，离心10min，去掉上清，加入1ml金悬浮液(PH值8.5的0.02MTRIS+0.75％Tween-20+3％蔗糖+0.75％PEG20000+1.2％酪蛋白)，铺至0.8cmX30cm的玻璃纤维上，37℃烘干2h。层析膜的制备：取鼠IgG抗体(购自杭州隆基生物)，用0.01mol/L的PB+3％海藻糖将鼠IgA抗体稀释成0.5mg/mL，使用量为35μL/30cm，用划膜仪划膜至硝酸纤维素膜(HFNC135膜Milipore)上，42℃反应2h，作为C线。样品垫的处理：配制样品垫处理液(0.02MPB+0.05％酪蛋白+3％蔗糖+0.5％Tween-20，pH7.4)5ml,铺至2.8cmX30cm玻璃纤维上，以每5ml铺3cmX30cm的量铺，静止反应10min,沥干，37℃烘干过夜，在湿度30％以下包装，封口，备用。试纸条的组装：将样品垫，金标垫，划好的层析膜，以及吸水纸依次贴到PVC底板上，均匀切成4.0mm宽的膜条。对比例1金标垫的制备和标记：洗净1L的锥形瓶，放入可以加热的磁力搅拌器上，精确量取0.5L超纯水，加热至刚好沸腾，加入1％氯金酸溶液5ml，混匀1min，加入1％柠檬酸三钠9ml，反应10min.冷却至室温，定容到0.5L待使用。取2ml金溶液加入0.1M碳酸钾溶液20ul，充分混合均匀，取羊抗鼠IgG(购自长沙博优)，混合均匀，静止反应5min，加入10％BSA的20ul，混合均匀，10000rpm，4℃，离心10min，去掉上清，加入1ml金悬浮液(PH值8.5的0.02MTRIS+0.75％Tween-20+3％蔗糖+0.75％PEG20000+1.2％酪蛋白)，铺至0.8cmX30cm的玻璃纤维上，37℃烘干2h。层析膜的制备：取鼠IgG抗体(购自杭州隆基生物)，用0.01mol/L的PB+3％海藻糖将鼠IgG抗体稀释成0.5mg/mL，使用量为35μL/30cm，用划膜仪划膜至硝酸纤维素膜(HFNC135膜Milipore)上，42℃反应2h，作为C线。样品垫的处理：配制样品垫处理液(0.02MPB+0.05％酪蛋白+3％蔗糖+0.5％Tween-20，pH7.4)5ml,铺至2.8cmX30cm玻璃纤维上，以每5ml铺3cmX30cm的量铺，静止反应10min,沥干，37℃烘干过夜，在湿度30％以下包装，封口，备用。试纸条的组装：将样品垫，金标垫，划好的层析膜，以及吸水纸依次贴到PVC底板上，均匀切成4.0mm宽的膜条。实施例3试纸条的性能检测试验(一)将CRP抗原(桂林英美特)0.5mg/ml(TRIS8.0+2％蔗糖)混合均匀，将实施例1～2和对比例1的试条分别取4只为一组每只试条上点0.2ulCRP抗原，放入37℃烘箱中烘烤10min备用。将阳性CRP杂交瘤细胞培养液上清依次稀释梯度为1：1、1:10、1:50、1:100，分别用实施例1～2和对比例1的试条进行检测，5分钟后获得检测结果，结果见表1和图2A～2C。其中，图2A为实施例1试条的检测结果，图2B为实施例2试条的检测结果，图2C为对比例1试条的检测结果。表1CRP抗原抗体反应的检测(二)将CYS-C抗原(hytest)0.5mg/ml(TRIS8.0+2％蔗糖)混合均匀，将实施例1～2和对比例1的试条分别取4只为一组每只试条上点0.2ulCYS-C抗原，放入37℃烘箱中烘烤10min备用。将阳性CYS-C杂交瘤细胞培养液上清依次稀释梯度为1、1:10、1:50、1:100，分别用实施例1～2和对比例1的试条进行检测，5分钟后获得检测结果，结果见表2和图3A～3C。其中，图3A为实施例1试条的检测结果，图3B为实施例2试条的检测结果，图3C为对比例1试条的检测结果。表2CYS-C抗原抗体反应的检测(三)将β2-MG抗原(桂林英美特)0.5mg/ml(TRIS8.0+2％蔗糖)混合均匀，将实施例1～2和对比例1的试条分别取4只为一组每只试条上点0.2ulβ2-MG抗原，放入37℃烘箱中烘烤10min备用。将阳性β2-MG杂交瘤细胞培养液上清依次稀释梯度为1、1:10、1:50、1:100，分别用实施例1～2和对比例1的试条进行检测，5分钟后获得检测结果，结果见表3和图4A～4C。其中，图4A为实施例1试条的检测结果，图4B为实施例2试条的检测结果，图4C为对比例1试条的检测结果。表3β2-MG抗原抗体反应的检测由表1～表3和图2～图4的试验结果可知，本实用新型提供的试纸条和对比例1提供的试纸条均可用于小鼠细胞培养液上清中CRP、CYS-C、β2-MG的抗原抗体反应的检测，采用上述试纸条进行检测时，操作简便且检测时间短。实施例4试纸条物种活性检测将乙肝重组抗原(购自北京博生福)0.5mg/ml(TRIS8.0+2％蔗糖)混合均匀。将实施例1～2和对比例1的试条分别取出4只为一组，每两只分别点上乙肝重组抗原0.2ul，放入37℃烘箱中烘烤10min备用。将其反应相对应的样本：HBsAg阳性人血清稀释1000倍、兔多抗1mg/ml稀释1000倍、山羊多抗1mg/ml稀释1000倍测试、鼠单抗1mg/ml稀释1000倍进行测试。检测结果如表4和图5A～5C所示：表4物种人血清兔多抗山羊多抗鼠单抗实施例1++++++++实施例2++++++对比例1---++由表4和图5的实验结果可知，对比例提供的试纸条只能用于检测单一物种中抗原-抗体的反应，而本实用新型提供的快速检测抗原-抗体反应的试纸条能够应用于检测不同物种(如人、兔、山羊、鼠)的乙肝重组抗原-抗体反应，并且操作简便、检测时间短、特异性强。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本实用新型。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本实用新型的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本实用新型将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。当前第1页1 2 3